开放实验 切花保鲜和采后生理 厦门大学生命科学学院.

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1 开放实验 切花保鲜和采后生理 厦门大学生命科学学院

2 一.实验目的意义 要求学生能运用已学的知识进行实验设计 能根据自己的设计独立进行实验操作 能独立解决实验中出现的问题
能对实验现象和实验结果做出合理的解释 能对实验数据进行科学的统计分析 提高学生独立科研能力

3 二.实验原理 1.切花保鲜技术 1.1采收： 花期采收、蕾期采收（香石竹、月季、唐菖蒲、郁金香、菊花） 剪取时间：清晨或傍晚
花枝留取高度：取决于吸水力，强高弱低 1. 2采后预处理 采收→ 浸水4h → 水中切除花梗5cm → 捆扎→ 预处理液处理→ 不透明塑料袋包裹→ 装入有孔纸箱→ 运输、贮藏 预处理液： 香石竹：10％蔗糖，1000 ug/L硝酸银溶液浸泡10min 月季：2％蔗糖、300 ug/L 8-羟基喹啉溶液（或其硫酸盐、柠檬酸盐 溶液）浸泡10min 唐菖蒲、郁金香、菊花： 1000 ug/L硝酸银溶液处理10min

4 1. 4延长花期 插瓶前花枝处理： 1. 3催花 催花液：蔗糖、杀菌剂、植物激素（或生长调节剂）
香石竹： 7％蔗糖、25ug/L GA 、300 ug/L 8-羟基喹啉柠檬酸盐溶液 月季： 2％蔗糖、25ug/L GA 、300 ug/L 8-羟基喹啉柠檬酸盐溶液 唐菖蒲、郁金香：5％蔗糖、25ug/L GA 、300 ug/L 8-羟基喹啉柠檬酸盐溶液 1. 4延长花期 插瓶前花枝处理： 水下剪切：草本剪斜面；粗花枝或木本花切口剪十字型或多开 裂缝或敲碎 热烫法，灼伤法，温水浸泡法，末端击碎法，冷藏法，消毒法

5 日常用营养液配方：(水最好存放一昼夜或用蒸馏水）
1.5 营养保鲜法 营养物质：蔗糖、果糖、葡萄糖、无机盐等 杀菌防腐剂：VitC 、阿司匹林、水杨酸、高锰酸钾、硫酸铜、食盐、 硫磺、明矾、琥珀酸、丁醇、酒精、苯甲酸等 乙烯抑制剂：硝酸银、硫代硫酸银、醋酸银、硝酸钴、氨基氧乙酸、 硝酸钾（钙） 、高锰酸钾等 pH 3~4：用柠檬酸调节 可适当添加激素和氨基酸 日常用营养液配方：(水最好存放一昼夜或用蒸馏水） 阿司匹林3片，VitC2片，溶于1L水中 糖20g, 8-羟基喹啉02~0.3g，溶于1L水中 糖10g，盐10g，溶于1L水中 糖20g，硫酸铜5g，溶于1L水中 1.6 日常管理： 叶片不能浸在水中，每2~3天换水一次，茎部不新鲜切口要切除 摆放：不要放在成熟瓜果附近，阳光直射和烟熏的地方

6 2. SOD测定原理 检测SOD常用间接的化学方法 酶单位/样品量 = 在反应系统中，存在 产生O2．体系（如核黄素照光或黄嘌呤-黄嘌呤氧化
　在反应系统中，存在 　产生O2．体系（如核黄素照光或黄嘌呤-黄嘌呤氧化　　 　　　　　　　　　　酶等） 　被氧化或还原后可检测的物质（如NBT,　Cytc或　 　　　　　　　邻苯三酚，肾上腺素等) 　　　通过光谱吸收，测定被氧化或还原后物质的变化,从而计算出SOD的活性。 　　　氮蓝四唑（NBT）光化还原的方法常用于植物组织的SOD活性测定和SOD同工酶带显示。 酶单位/样品量 =

7 3. 丙二醛测定原理 丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温条件下，可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川（3,5,5－三甲基恶唑2,4－二酮），其最大吸收波长在532 nm。可采用分光光度法计算MDA含量。 直线回归法： Y532＝－ ＋0.088D450 双组分分光光度计法 ： C1(mmol/L)=11.71D450 C2(umol/L)=6.45(D532-D600)-0.56D450

8 三.实验设计 选材 营养液的选择和配制（药品提前开出并上交） 实验操作设计及注意事项 生理指标（SOD和MDA）的测定（取样要科学）
材料的选择和处理 实验组和对照组的设计 生理指标（SOD和MDA）的测定（取样要科学） 原理的理解 所需仪器药品及药品配制 详细的操作过程 数据的整理和分析 结论

9 选 材

10 四.实验安排 四人一组自行组合、设计、选材 实验四周（保鲜液更换、形态观察、SOD和MDA测定） 数据统计分析，实验总结 课堂汇报
根据所提意见对实验总结进行修改，撰写实验报告

11 五.结果与分析 定期记录形态色泽变化和花的落瓣情况。 对测得的生理指标要进行科学计算和统计分析。
针对实验结果做出比较和总结分析，确定保鲜效果。

12 六.注意事项 6.1 保鲜过程中的注意事项 选材要选取新鲜、健康的材料 保鲜液配制注意试剂的理化特性及试剂间是否存在化学反应
6.1 保鲜过程中的注意事项 选材要选取新鲜、健康的材料 保鲜液配制注意试剂的理化特性及试剂间是否存在化学反应 准确计算试剂用量，避免浪费 仪器使用时注意操作正确 定期更换保鲜液，注意保鲜液的pH变化和染菌情况 测生理指标时注意采样的科学性

13 6.2 SOD测定注意事项 用PBS研磨样品(其它样品保存在冰箱),离心后上清液为粗酶液(冰箱中保存) 研磨时 PBS不要超过4.5mL
样品研磨完后配反应液,加样过程中注意避光保存 要做预实验确定酶液加入量，酶液加入量以抑制率在35%-65%为好 分装反应液,在每支试管中加入适量粗酶液(5-200uL),在316光照10-30min. 注意空白对照和最大照光管的设置.

14 6.3 测定MDA时的注意事项 测定MDA时会受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm处，532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA-TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532、 450nm处的消光值，所以在蔗糖、TBA与MDA显色反应中需要有一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为100～300ug/gDW，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3+的终浓度为0.5nmol/L。

15 七. 思考题 通过本次实验你体会最深的是什么？从中你学到了什么？ 对开放性实验你有何好的建议？

16 八.开放实验总结 1.查资料,设计实验(确定材料,选保鲜液)。 2.取材(新鲜、健壮，生理状态相近) 3.配制保鲜液
试剂配制：溶解性、反应沉淀、禁止配母液 药品称量：保持桌面和天平整洁，注意腐蚀性 4.日常管理要保持实验室的干净、整洁 注意仪器的开关，正常使用和维护 5.SOD和MDA测定原理要清楚。采样时取 g, 注意采样的科学性。 6.保鲜结果

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27 7.实验报告撰写的科学性和规范性 条理不够清楚, 照抄照搬现象严重 实验设计表述要一目了然，关键细节简单提及
实验现象描述最好采用比较列表的形式,不要记流水帐 结果计算要采用标准模式 酶活单位：U/mg Protein, U/g•NW 或 U/g•FW 图表不规范 结论太武断

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