实验七 粪便标本的病原学检查（1） 目的要求： 1.掌握粪便标本病原学检查的步骤、方法、结果判断及实际意义。

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1 实验七 粪便标本的病原学检查（1） 目的要求： 1.掌握粪便标本病原学检查的步骤、方法、结果判断及实际意义。 2．熟悉肠道感染细菌的种类及生物学特点。 3．熟悉Widal反应的原理、试剂、方法、结果判断 及意义。 4．了解肠道感染细菌的微生物学检查原则

2 1．观察上次甘露醇分解试验结果，完成脓汁标本病原学检查综合实验报告。 2．示教内容
粪便标本的病原学检查（1） 实验内容： 1．观察上次甘露醇分解试验结果，完成脓汁标本病原学检查综合实验报告。 2．示教内容 （1）观察主要肠道感染细菌形态示教片（大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌） （2）介绍常用肠道细菌分离培养基（EMB平板、SS平板） （3）常见厌氧菌的形态和培养特性

3 血平板分离培养结果 透明溶血环 金葡或乙链 挑取菌落 金黄色色素 排除乙链 初步判断脓汁标本中可能为金葡，故做以下试验： 1）血浆凝固酶试验 见凝固颗粒 说明标本中的细菌可产生血浆凝固酶 进一步判断脓汁标本中病原性球菌为金葡。 2）甘露醇发酵试验 结果为黄色 原因？？？ 甘露醇发酵试验为阳性 更进一步判断，脓汁标本中病原性球菌为金葡。 结论：根据…试验，这份脓汁标本中病原性球菌为金葡。

4 （4）你如何进行病原学诊断并为未来的诊断结果提供可行的治疗方案？ 要求:按顺序回答上述问题,要条理清楚,层次分明,结论准确.
病例简介 患者，25岁，青年男性，建筑工人。入院前1周搬运建筑材料时颈部软组织皮肤被擦伤，有一长约5厘米的开放性伤口。门诊医生进行了简单的清创缝合处理，并给与青霉素注射液320万单位/日,静脉滴注.3天前开始发热，门诊查体温达39℃, 患者呈急性重病容,面色苍白，局部伤口化脓，有脓性渗出物。肝脾肿大.急诊入住新医大第一附属医院创伤外科诊治。实验室检查：外周血白细胞总数明显升高，分类计数中性粒细胞升高。红细胞总数略低于正常，血红蛋白低于正常。伤口局部渗出物涂片染色镜检可见满视野白细胞和革兰阳性球菌。 问题： （1）你认为该患者最可能感染什么病原菌？ （2）你的初步诊断是什么？ （3）为什么用青霉素治疗无效？ （4）你如何进行病原学诊断并为未来的诊断结果提供可行的治疗方案？ 要求:按顺序回答上述问题,要条理清楚,层次分明,结论准确.

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6 霍乱弧菌（革兰染色）

7 产气荚膜梭菌

8 肉毒梭菌（c. botulinum）

9 发酵乳糖菌落 大肠杆菌 不发酵乳糖菌落 肠道致病菌 SS培养基 麦糠凯培养基 挑选可疑菌落进行下一步生化反应鉴定

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12 Growth of anaerobic bacterium

13 产气荚膜梭菌培养特性

14 3．操作内容：粪便标本的病原学检查（1） 材料： SS琼脂平板培养基 粪便标本棉试子 接种环 酒精灯等 方法：分离培养--分区划线

15 1．观察SS平板分离培养结果，并记录实验结果。 2．示教内容
粪便标本的病原学检查（2） 实验内容 1．观察SS平板分离培养结果，并记录实验结果。 2．示教内容 （1）观察大肠杆菌、伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、和痢疾杆菌生化反应试验示教（糖发酵试验） （2）介绍KIA培养基 （3）观察布鲁菌、鼠疫杆菌、炭疽杆菌、白喉杆菌和 绿脓杆菌的形态

16 Citrate Utilization test
Indole test Methyl red test Citrate Utilization test VP test

17 硫化氢试验 有些细菌如沙门菌、变形杆菌等能分解培养基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸）生成硫化氢，硫化氢遇铅或铁离子生成黑色的硫化物 +（FeS黑色）

18 细菌 双糖铁培养基( KIA) H2S产生 上层 下层 乳糖 颜色 葡萄糖 动力 大肠杆菌 － + 黄色 痢疾杆菌 红色 伤寒杆菌 +/－ 肖氏沙门菌 ++

19 大肠杆菌在双糖铁培养基中表现： 记录： 上黄下黄 葡萄糖 + 乳糖 + 动力 + H2S — KIA（克氏双糖管）：上黄下黄 大肠杆菌
葡萄糖 + 乳糖 + 动力 + H2S — KIA（克氏双糖管）：上黄下黄 未接种管 大肠杆菌 生长管

20 痢疾杆菌在双糖铁培养基中表现： 记录： 无动力为要点！ 无动力为要点！ 无动力为要点 无动力为要点！ 葡萄糖 + 乳糖 — 动力 —
葡萄糖 + 乳糖 — 动力 — H2S — 无动力为要点！ 无动力为要点！ 无动力为要点 无动力为要点！ 大肠杆菌 生长管 痢疾杆菌 生长管 未接种管

21 生化反应 分解葡萄糖、麦芽糖、甘露糖。 不分解乳糖，不产酸。 KIA（克氏双糖管）上红下黄/黑 H2S(-/+) 动力(+)

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23 动力 + 动力- 动力+

24 血清学检查（肥达试验，widal test）
单位：ml 　　　　 生理盐水 患者血清 弃去0.5 诊断菌液 从后往前加 血清稀释度 1: : : : : : : 对照 振摇室温24小时 结果

25 （四）微生物学检查法 伤寒沙门菌 O凝集效价为1：80 H凝集效价为1：160 副伤寒沙门菌H凝集效价为1：80
肥达试验结果解释及注意事项： 正常人抗体水平 伤寒沙门菌 O凝集效价为1：80 　　　　　 H凝集效价为1：160 副伤寒沙门菌H凝集效价为1：80

26 若O、H凝集效价均超过正常值，则可能感染了伤 寒、副 伤寒； 若两者皆低，则患伤寒可能性很小； 若O不高，H高则可能是预防接种或非特异回忆反
应 若O高，H不高，有可能是感染早期或感染了与伤 寒沙门菌有交叉反应的其他沙门菌。

27 3．操作内容：(1)粪便标本的病原学检查（2）
材料： SS平板分离培养物 KIA（克氏双糖铁）斜面培养基 接种针 酒精灯 方法：挑取SS平板分离培养基上的可疑菌落 接种KIA斜面，进行纯培养和生化反应鉴定。 KIA斜面培养基

28 白喉棒状杆菌（不同染色下观察）

29 鼠疫耶尔森菌（美兰染色） 炭疽芽胞杆菌