经穴部位的Ca2+是针刺效应产生的关键因素之一

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1 经穴部位的Ca2+是针刺效应产生的关键因素之一
郭义、王秀云、张艳军、胡利民 徐汤苹、 胡凤慧、苗文方、李桂兰、李建宇 天津中医学院.中国传统医药国际学院 张春煦 陈进生 姜萍 南开大学化学系

2 应该说，针刺效应的产生是多种因素共同作用的结果。影响针灸治疗效果的因素很多，如取穴、手法、施术时间、患者体质等。揭示针刺治疗原理，对提高临床疗效具有重要的意义。多年来，我们对钙离子在针刺疗效中的作用进行了研究，现将结果报告如下。

3 一.几种针刺效应动物模型的建立

4 1、研究依据、研究思路 针刺 经脉 效应 经脉•脏腑病变的调节 穴位 经脉者，所以决死生、处百病、调虚实 《灵枢•经脉篇》
夫十二经脉者、内属于腑脏、外络于肢节 《灵枢•海论篇》

5 2、动物模型的复制方法 （1）乌头碱引起心律失常模型 动物：家兔 方法：20ug/kg、0

6 （2）电刺激下丘脑引起的心律失常模型 动物：家兔 方法：用脑立体定位器固定家兔头部，打孔、参 照Sawyer图将金属电极插在下丘脑，给于20-30V、60Hz的电刺激 指标：观察心电图一定时间内早搏收缩出现的次数 穴位：内关 手法：平补平泻 5分钟

7 （3）实验性心肌梗塞模型 动物：大鼠 方法：乙醚麻醉后将大鼠固定，胸部备皮、消毒， 切开左胸部皮肤，从第四或第五肋间分离 肌层，打开胸腔、轻轻地压迫胸廓，挤出 心脏。从左心耳和动脉圆锥之间的冠状静 脉部位结扎冠 状动脉后，将心脏压回胸 腔，迅速缝合胸壁。 指标：缺血部的体积（用计算机分析） 血清酶:AST、CDH、α-HBOH、CK活性 穴位：内关 手法：平补平泻

8 （4）正常胃运动模型 动物：家兔 方法：麻醉后切开家兔的腹腔，取出胃， 将自制的传感器缝合于幽门部的 浆膜层处，将腹腔缝合，将导线 从颈部引出 指标：用计算机处理胃运动的振幅和频率 穴位：足三里 手法：平补平泻

9 （5）实验性胃运动亢进及抑制模型 动物：家兔 方法：和（4）的手术方式相同，肌肉 注射新斯的明造成胃运动亢进 ， 肌肉注射654-2（Anisodamine)， 造成胃运动抑制，摸索引起胃运 动亢进或抑制的药物的剂量 指标：用计算机处理计算胃运动的振幅和频率 穴位：足三里 手法：平补平泻

10 （6）实验性胃胀痛模型 动物：大鼠 方法：用三叉管的一端连接能扩张的小 球囊、一端连接水银检压计、 一端连接注射器，乙醚麻醉下， 将小球囊从口腔缓慢插入胃内， 然后，用注射器将空气注入小球 囊使其扩张，造成胃胀痛。 指标：大鼠出现胃胀的症状（四肢或头 部的扭动等），用血压计测定压力 穴位：足三里 手法：平补平泻

11 指标：胃排出率= 穴位：足三里 手法：平补平泻 （7）实验性胃损伤小鼠胃排空模型 动物：小鼠
方法：稀盐酸（0.3mol/l、1ml)灌胃造成胃损伤。将20个直径为0.5mm的黑色树脂球和10%可溶性淀粉糊一同注入胃中 指标：胃排出率= 肠排出的树脂球数目 灌入总数 × 100% 穴位：足三里 手法：平补平泻

12 经脉 心：手厥阴心包经（内关） 胃：足阳明胃经（足三里） 动物 大鼠、小鼠、大耳白家兔 穴位针刺时间 根据模型不同，一般3-5分钟、留针
综 上 所 述 经脉 心：手厥阴心包经（内关） 胃：足阳明胃经（足三里） 动物 大鼠、小鼠、大耳白家兔 穴位针刺时间 根据模型不同，一般3-5分钟、留针

13 二、穴位Ca2+浓度变化以及阻断 Ca2+活动环节对针刺效应的影响

14 1、络合穴位处Ca2+对针刺效应的影响 针刺 有效 心、胃病变 内关、足三里

15 （络合：使用EDTA溶液与Ca2+结合，使Ca2+失活）
针刺 无效 心、胃病变 内关、足三里 注射EDTA

16 EDTA络合Ca2+的浓度： 10-2M 、2.5× 10-3M 、 5× 10-4M 、 10-4M
EDTA络合Ca2+的剂量: 家兔20ul、大鼠、小鼠5ul 结果： 10-2M 、2.5× 10-3M 、10-3M 的EDTA可以使针刺效果丧失。但是5×10-4M 、 10-4M EDTA穴位注射，针刺效果仍然存在。 证明10-3M 的EDTA是使针刺效果丧失最低浓度。

17 EDTA对照液 ，在体外已结合上Ca2+的EDTA溶液
针刺 有效 心、胃病变 内关、足三里 注射EDTA 对照液

18 2、阻断穴位细胞细胞膜上VOCs对针刺 效应的影响
心胃的病变 无效 经脉 内 关 足三里 针刺 2、阻断穴位细胞细胞膜上VOCs对针刺 效应的影响

19 VOCs阻断剂的种类和浓度： 10-3M Mn(NO3) ul 2× 10-3M 二异搏定 ul 5× 10-4M 心痛定 ul 给药方法： 1、微量注射器穴位注射 2、微量蠕动泵穴位连续灌流

20 注：VOCs阻断剂对照液NaNO3溶液，剂量与
心胃的病变 有效 经脉 内 关 足三里 针刺 注：VOCs阻断剂对照液NaNO3溶液，剂量与 VOCs阻断剂相同

21 3、阻断CaM活性对针刺效应的影响 三氟啦嗪 胃抑制模型 无效 经脉 足三里 三氟啦嗪剂量：10ul 浓度：60um 针刺

22 生理食盐水注射 胃抑制模型 有效 经脉 足三里 针刺

23 4、升高穴位Ca2+浓度对针刺 效能的影响 有效 针刺 经脉 内 关 CaCl2溶液穴位注射 心胃病变 足三里
内 关 足三里 针刺 4、升高穴位Ca2+浓度对针刺 效能的影响 CaCl2 溶液的浓度：10-1M、10-2M、5×10-3M、 10-3M

24 升高穴位处的Ca2+后针刺效能继续存在，与单纯针刺相比无显著的统计学差异，原因有待进一步研究。上海蔡震亨听了我们的报告后，以油性Ca2+穴位注射治疗哮喘，取得了较好的疗效。

25 三、经脉线上Ca2+浓度变化及阻断 Ca2+活动环节对针刺效应的影响

26 1、降低经脉上几处Ca2+浓度对针刺 效应的影响 无效 针刺 经脉 内 关 足三里 心胃病变
内 关 足三里 经脉 心胃病变 表示EDTA注射的部位。经脉线上的某个穴位或经脉线上非穴位处，每次实验仅在一处注射，EDTA的剂量、浓度与上述相同。研究表明使针刺效能消失的最小浓度为10–3M

27 表示EDTA对照液注射部位，体外EDTA络合钙 溶液，其浓度、剂量与上述相同。
（2） 有效 针刺 内 关 足三里 经脉 心胃病变 表示EDTA对照液注射部位，体外EDTA络合钙 溶液，其浓度、剂量与上述相同。

28 表示EDTA注射的部位，经脉线两旁。注射剂量与注射 方法与上述实验相同，部位对照实验。
（3） 有效 针刺 经脉 内 关 足三里 心胃病变 表示EDTA注射的部位，经脉线两旁。注射剂量与注射 方法与上述实验相同，部位对照实验。

29 表示阻断部位。阻断剂种类、剂量、浓度、给药方法同前，阻断部位：经脉线上的穴位或在经、非穴处。每次实验阻断一处。
2、阻断经脉线上几处细胞细胞膜 上VOCs对针刺效果的影响 针刺 无效 内 关 足三里 经脉 心胃病变 表示阻断部位。阻断剂种类、剂量、浓度、给药方法同前，阻断部位：经脉线上的穴位或在经、非穴处。每次实验阻断一处。

30 表示阻断剂对照液注射部位。药物种类、剂量、浓度同二2（2）。药物对照实验。
有效 针刺 内 关 足三里 经脉 心胃病变 表示阻断剂对照液注射部位。药物种类、剂量、浓度同二2（2）。药物对照实验。

31 表示经脉线两旁阻断部位。药物种类、剂量、浓度同三2（1）。部位对照实验。
（3） 有效 针刺 经脉 内 关 足三里 心胃病变 表示经脉线两旁阻断部位。药物种类、剂量、浓度同三2（1）。部位对照实验。

32 表示三氟啦泰注射部位。浓度、剂量同二3（1）
3、经脉线上CaM活性阻断对针刺效果的 影响 无效 针刺 胃经 胃抑制模型 足三里 表示三氟啦泰注射部位。浓度、剂量同二3（1）

33 （2） 有效 针刺 胃经 胃抑制模型 足三里 表示生理盐水注射部位。剂量10ul

34 （3） 有效 针刺 胃经 胃抑制模型 足三里 表示三氟啦泰注射部位。经络线两旁

35 4、经脉线Ca2+浓度的上升对针刺效能的影响
有效 内 关 足三里 经脉 心胃病变 升高Ca2+浓度的部位。药物剂量、浓度同二4

36 四、Ca2+络合针刺效能丧失现象的 原理初探

37 用电生理的方法记录正中神经干复合动作电位
1、 实验性心律异常 有效 内 关 电针 用电生理的方法记录正中神经干复合动作电位

38 EDTA浓度：10-1M、 10-3M EDTA 剂量：20ul
无效 电针 EDTA注射 内 关 内 关 足三里 实验性心律异常 正中神经干复合动作电位与1存在统计学差异 EDTA浓度：10-1M、 10-3M EDTA 剂量：20ul