实验七、小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察

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1 实验七、小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察

2 一、实验目的： 1、通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的 观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及其意义。
1、通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的 观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及其意义。 2、掌握小白鼠腹腔注射给药和颈椎脱臼处死方法。

3 二、实验原理 巨噬细胞起源于骨髓，经血液进入组织中而成，分布于全身各处。当机体受到某些损伤因素时（如微生物或其它病原体或异物侵入），能招引巨噬细胞，同时巨噬细胞有趋化性，主动向病原体或异物游走，在接触到病原体或异物时，细胞膜凹陷伸出伪足包围异物，并发生胞吞作用形成吞噬泡，继而巨噬细胞质中的溶酶体与吞噬泡融合，消化分解异物。 含台盼蓝的淀粉肉汤，可使腹腔中有较多的巨噬细胞，以供观察吞噬活动。

4 三、实验用品 1、仪器设备：显微镜、注射器、注射针头、吸管、试管架、剪刀、解剖刀、解剖镊、载玻片、盖玻片。 2、试剂： ①0.85%生理盐水
②4%台盼蓝染液：称0.2g台盼蓝，再加入0.85%生理盐水50 ml即可。 ③6%的淀粉肉汤（含台盼蓝染液）： 将0.3g牛肉膏、1.0g蛋白胨、0.5g氯化钠放入100 ml蒸馏水中，加热后加入可溶性淀粉6.0g，溶解后煮沸灭菌，置4℃冰箱保存。用时水浴融化，加入适量4%台盼蓝染液混匀，使其呈蓝色。

5 ④Alsever溶液： 称取2.05g葡萄糖、 0.89g柠檬酸钠Na9C6H5O7.2H2O)、0.05g柠檬酸（C6H6O7.H2O）和 0.42g氯化钠，用蒸馏水定容至100ml，调PH 至7.2，过滤灭菌或高压灭菌10min，置4℃冰箱保存。

6 四、实验材料： 1、小白鼠 2、1%鸡红细胞悬液 1%鸡红细胞悬液制备：
从集市买一只健康活鸡现杀取血5ml（防止污染），放入盛有20ml Alsever溶液瓶中，混匀后置4℃冰箱保存备用（2 周内使用）。使用前，取用Alsever’s 液保存的新鲜鸡血5ml ， 加入8ml 的0.85% 的NaCl 溶液，小心混匀，1500 r/min 离心5min，如此洗涤3 次，最后配成1%的鸡红细胞悬液。

7 五、实验步骤 1、实验前一天，给小白鼠腹腔注射6％淀粉肉汤液(含台盼蓝)1毫升（连续注射三天效果较好）。
2、实验时，每组取一只注射过淀粉肉汤的小白鼠，腹腔注射1%鸡红细胞悬液1ml，25分钟~30分钟后再向腹腔注射0.9%生理盐水1ml，并用手轻揉小鼠腹部，有利于悬液分散。3分钟后，用颈椎脱臼方法处死小鼠（一手捏着鼠头、颈连接处，一手捏住鼠尾，分别向两端用力牵拉，直到拉死为止），迅速剖开腹腔，用不带针头的注射器贴腹腔背壁处直接抽取腹腔液，滴片，制备一张临时装片，盖上盖玻片。放置2分钟~3分钟后在显微镜下观察。

8 六、实验结果 在高倍镜下，可见到圆形或形状不规则的巨噬细胞，其胞质中含有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝的淀粉肉汤形成的吞噬泡），还可见少量淡黄色椭圆形有核的鸡红细胞。慢慢移动玻片标本，仔细观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程：有的鸡红细胞（一个至多个）紧贴于巨噬细胞表面；有的巨噬细胞已将一至数个鸡红细胞部分吞入；有的巨噬细胞已吞入了一个或几个红细胞，形成了椭圆形吞噬泡；有的巨噬细胞内的吞噬泡已与溶酶体融合正在被消化，体积缩小呈圆形。将所见到的处在不同吞噬阶段的巨噬细胞动态地联系起来，想一想吞噬作用的全过程。

9 七、注意事项： 八、作业： 剖开小鼠腹腔时，剪刀头要向上，以避免剪破腹腔血管，腹腔液应是无色的液体。
在高倍镜下绘制小鼠巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的过程图（绘制不同吞噬阶段的巨噬细胞图各一个），示巨噬细胞吞噬作用的全过程。

10 单核细胞（上）和巨噬细胞（下）

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12 单核巨噬细胞吞噬过程示意图

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14 巨噬细胞正在吞噬衰老的红细胞

15 巨噬细胞吞噬细菌（电镜）

16 肺巨噬细胞吞噬大肠杆菌（电镜）