禽流感病毒标本采集及运输 胶体金检测质量控制 高万芹.

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1 禽流感病毒标本采集及运输 胶体金检测质量控制 高万芹

2 生物安全－禽流感：二级防护 适用范围： 进入医院污染区的人员、采集疑似病例、确诊病例咽拭子的人员、标本运输人员及处理其分泌物、排泄物人员
处理病人使用过的物品和死亡病人尸体的人员以及转运病人的医务人员和司机。 对禽流感疑似或确诊病例进行流行病学调查的人员 在疫点内对染疫动物进行标本采集、捕杀和无害化处理以及进行终末消毒的人员

3 二级防护要求 穿普通工作服、戴工作帽、外罩一层防护服、 戴防护眼镜和防护口罩（离开污染区后更换） 戴乳胶手套、穿鞋套
进行家禽的宰杀和处理时，应戴橡胶手套，穿长筒胶鞋。 每次实施防治处理后应立即进行手清洗和消毒。

4 三级防护 确诊禽流感病例或证实可由人传染人时，对病人实施近距离治疗操作例如气管插管、气管切开的医务人员和标本采集人员。
除按二级防护要求外，将口罩、防护眼镜换为全面型呼吸防护器（符合N95或FFP2级标准的滤料）

5 工作人员的自我防护： 防护中不可忽视的四方面:
一、无论是参加防治的临床工作人员、实验工作人员，标本运输人员,还是从事流行病学调查与疫情处理的工作人员，必须有安全可靠的防护措施。工作期间，除工作衣以外，还应穿隔离衣裤、隔离鞋帽（最好是包头帽），必须戴合格的口罩、双层乳胶手套，必要时戴护目镜和防护面罩。总之，工作人员的皮肤粘膜均不能暴露在外，不可直接接触病人分泌物、排出物、体液和血液，以及可能被它们污染的一切医疗用品、生活用品和其他废弃物。

6 二、防护措施中的另一重要措施是洗手。接触每一位病人（包括疑拟病人）之后必须洗手。严格执行六步洗手法。彻底洗手不仅可以清除沾染的体液、血液等。还可以清除90%以上的病原体。戴手套工作的人，脱手套后同样要洗手。因为在工作过程中手套上可能有细小的损伤而未察觉。紧急情况下，还可用氯已定醇反复搓揉双手的各个部位。

7 三、防护中不可忽视的另一细节是脱各种隔离衣物应在离开污染区进入半污染区时完成。脱前洗手，脱后要再洗一次手。脱衣要慢要轻，准确投入收集桶（或带），不可远距离抛入收集袋，否则将使其表面可能污染的病原体再次飞扬而受染。口罩应在洗手后最后摘除，要求与隔离衣等相同。去清洁区还应再洗一次手。

8 四、标本运送人员也要注意个人防护，运送标本要使用专用标本运送箱，标本运送箱要贴生物危害标识。

9 采集对象和采集人员 采集对象： 􀂾不明原因肺炎病例。 􀂾人禽流感待查病例、临床诊断病例、确诊病例。 􀂾出现发热等异常临床表现的密切接触者。
􀂾其他需要排除人禽流感的病例。

10 采集人员： 在当地疾病预防控制机构的指导下，由医疗机构的医生、护士负责门诊、住院病人的标本采集。当地疾病预防控制中心专业人员负责其他人群的标本采集。

11 标本采集种类和要求： 上呼吸道标本：包括鼻拭子、鼻咽拭子、鼻咽抽取物、鼻洗液、咽漱液。最佳采集时间为发病后3天内，一般不超过7天。
下呼吸道标本：包括呼吸道吸取物、支气管灌洗液、胸水、肺组织活检标本。下呼吸道标本最有利于禽流感病毒分离。 􀀹 尸检标本：主要包括肺、气管，条件允许下也可采集肝、肾、脾、心脏、脑、淋巴结等组织标本。每一采集部位分别使用不同消毒器械，以防交叉污染；每种组织应多部位取材，各部位应取20～50g，淋巴结取2个。病人死亡后应尽早进行解剖，无菌采集。

12 标本采集种类和要求： 血清标本：应尽量采集急性期、恢复期双份血清。急性期血样的采集，不能晚于发病后7天；恢复期血样在发病后第2、3、4周采集。如未能采集到急性期血样，仍应尽早采集第一份血样，并在间隔2～4周后采集第二份血样。采集量要求5ml，以空腹血为佳，建议使用真空采血管。病例诊断需双份血清。􀀹 其它标本：可在病例发病后的7天内采集粪便标本。

13 采样液: pH7.4～7.6 HANK氏平衡盐。 pH7.4～7.6的Eagle`sMEM培养液（不含牛血清，含0.5~1%的牛血清白蛋白V）。 肉汤采样液，多应用于鸡胚接种法分离病毒。 为防止采样液生长细菌和真菌，在采样液中需加入抗菌素，加入庆大霉素（其终浓度为0.1mg/ml）和抗真菌药物（其终浓度为2ug/ml），或者加入青霉素（其终浓度为2000IU/ml）和链霉素（其终浓度为2000μg/ml）。加入抗菌素以后重新调节pH值为7.4，配制好以后，分装每个采样管4ml,-20℃冻存。

14 采咽拭子的器材和容器(核酸检测): 1

15 采咽拭子的器材和容器(胶体晶检测):

16 呼吸道标本的种类及采集方法: 咽拭子：可先让患者深咳嗽几下，然后用聚丙烯纤维头拭子头浸湿采样液（为了提高病毒分离率，可以不蘸采样液进行干采）适度用力擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，应避免触及舌部。采完后迅速将拭子放入采样管(内含3～4ml采样液)，尾部弃去。 鼻拭子：将1根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。取另一根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子以同样的方法采集另一侧鼻孔。上述两根拭子浸入同一含3ml采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。

17 呼吸道标本的种类及采集方法: 呼吸道灌洗液：将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管（约30cm深处），注入5ml生理盐水，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器1次（亦可用小孩导尿管接在50ml注射器上来替代收集）。 胸水: 在B超定位下进行胸腔穿刺，抽取胸水5ml，置于无菌的塑料螺口管中。 肺组织活检标本：在超声或X线定位下,经皮穿刺取肺组织活检标本,置于含3ml采样液的塑料螺口管中。

18 标本包装: 标本必须保存于大小合适、带垫圈的外螺旋盖的塑料管中，管外注明样本编号、姓名及采样日期。
将保存标本的塑料管放入大小适合的塑料袋内密封，每袋装一份标本。 标本有关信息填写“不明原因肺炎/人禽流感待查病例标本送检单”（表1），用另一塑料袋密封。

19 标本送检: 1. 上送标本的满足条件 2．送检的生物安全要求 3．送检的程序
1. 上送标本的满足条件 所有检测结果阳性或可疑的原始标本或分离物必须按照规定要求24小时内送疾控中心复核和进一步检测。 2．送检的生物安全要求 标本放入专用运输箱内，四周放置冰袋，空隙部分用具有吸水和缓冲性能的材料充填，所有运送容器外必须具有生物危险标识。 标本的送应遵循《可感染人类的高致病性病原微生物菌毒种或样本运输管理规定》（中华人民共和国卫生部令第45号 ）。 3．送检的程序 先与上一级疾控中心疾病控制与应急处理办公室联系。

20 表1 不明原因肺炎/人禽流感待查病例标本送检单
表1 不明原因肺炎/人禽流感待查病例标本送检单 编号 姓名 性别 年龄 现住址 发病日期 标本种类 标本量 采集日期 主要临床表现 备注 体温 咳嗽 咽痛 肺炎 其他 注：主要临床表现：体温填写最高温度，其它栏符合的打“√”。 采集人员： 送样人： 采集单位： 送检日期：20 年 月 日 收样人员： 收检日期： 20 年 月 日

21 高致病性病原微生物危险标签 高致病性病原微生物 请勿自行打开 制冷剂： 如有破损、渗漏或遗失 请立即通知当地卫生行政部门 联 系 人：
联系电话：

22 高致病性病原微生物运输登记表 收样单位： 详细地址： 邮政编码： 联系人： 联系电话： 送样单位：

23 快速检测试剂(胶体金）使用要求 必须使用经国家食品药品监督管理局注册批准的快速试剂。 试剂必须在有效期内使用。
推荐使用临床评估质量好并且近几年连续考评结果稳定的试剂（中国疾病预防控制中心网站）

24 实验记录 样品数据资料 主要有：样品送样单、样品报告备份，阳性反应样品送上级实验室后确证实验反馈结果。 质控数据
主要有：快速检测标准操作程序（SOP），日常质控品检测结果、PT检测结果回报成绩。 试剂数据 主要有：试剂收到日期，厂商名称，批号，有效期，保存条件记录等资料。

25 胶体金检测质量控制 快速检测室内质量控制按操作顺序可分为: 检测前， 检测中 检测后

26 检测前质控 样品要求唯一编号，实验前仔细核对、检查。在有两人以上检测的情况下，避免错位。
检测环境温湿度，应在试剂盒操作说明书要求的范围内，试剂和样品应按要求存放，并做好记录。 检查是否有足够的试剂库存,确证试剂在有效期内，禁止使用过期试剂。 每批实验如果应用不同批号的试剂，应做好记录，并对不同批次的试剂进行质控。

27 检测过程质控 准备好试验区域，摆放必要器具。 记录样品编码、姓名、试剂名称及批号、操作者姓名等。 核对样品标号，标记，检测，防止错号。
收集并集中摆放全部待检样品，包括外部质控品。 按照试剂厂家提供的说明书开始操作。 需要在冰箱保存的试剂，从冷藏环境中取出后放置室温，平衡后再使用。剩余的试剂条应立即放入自封袋中密封2－8℃保存。可以在室温条件下保存的试剂也应避免高温。 建议每次最多做10个样品，确保试纸条的编号与标本编号的准确对应，防止错号和交叉污染。 结果判定时，质控带必须出现实验才能成立。如实验完成后未呈现质控条带，本次试验结果无效，样品须重检。 同时，除每个检测日做一次外部质控品外，下列情况下也需加做外部质控品：更换检测人员时;更换不同试剂批号时;更换不同的试剂包装时;更换不同的试剂厂家时

28 检测后质控 实验结果进行判读时，应保证判读地点光线充足。对于难以判读的条带，最好有2人判读。 复核样品编号并填写试验结果。
清洁并处理实验废弃物。 发现试剂出现以下问题，提示存在质量隐患，应详细记录：收到试剂时，试剂的外包装盒或内容物已损伤；标签出现错误、缺失或字迹模糊 (特别是产品厂家名称，批号和货号，失效期或/和生产日期)；缺失目录或操作说明书；试剂盒内容物出现渗漏等。

29 核酸检测单位A型通用阳性,请将标本及核酸冷冻保存及时送市CDC !
谢谢