第十五章 甾体激素类药物的分析.

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1 第十五章 甾体激素类药物的分析

2 一、基本结构及分类 C D A B 基本结构：环戊烷并多氢菲 18 12 17 11 19 13 16 1 2 14 9 10 15 8 3

3 分类： 肾上腺皮质激素 雄性激素及蛋白同化激素 甾体激素 性激素 孕激素 雌激素

4 二、结构与性质 1. 肾上腺皮质激素 主要活性基团 性 质 △4 – 3 – 酮 UV、与羰基试剂反应 C17 – α – 醇酮基
1. 肾上腺皮质激素 主要活性基团 性 质 △4 – 3 – 酮 UV、与羰基试剂反应 C17 – α – 醇酮基 还 原 性

5 2. 雄性激素及蛋白同化激素 主要活性基团 性 质 △4 – 3 – 酮 UV、与羰基试剂反应 C17 – β – 羟基 可成酯

6 3. 孕激素 主要活性基团 性 质 △4 – 3 – 酮 UV、与羰基试剂反应 C17 –甲酮基 与亚硝基铁氰化纳反应 C17 –乙酰氧基
3. 孕激素 主要活性基团 性 质 △4 – 3 – 酮 UV、与羰基试剂反应 C17 –甲酮基 与亚硝基铁氰化纳反应 C17 –乙酰氧基 C17 –乙炔基 水解鉴定乙酸 与硝酸银沉淀

7 4. 雌激素 主要活性基团 性 质 A环为3–OH 苯环 UV、与重氮苯磺酸盐反应 C17 –乙炔基 与AgNO3反应 C17 –羟基
4. 雌激素 主要活性基团 性 质 A环为3–OH 苯环 UV、与重氮苯磺酸盐反应 C17 –乙炔基 与AgNO3反应 C17 –羟基 可成酯

8 二、鉴别试验 （一）与强酸的呈色反应 （母核） H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl 甾体激素类药物 呈色

9 与硫酸显色反应 显 色 荧光 加水稀 泼尼松龙 深红 絮状↓灰 泼尼松 橙 黄→蓝绿 炔雌醚 橙红 黄绿 ↓红色 炔雌醇 橙红 黄绿 絮状↓玫红 醋酸可的松 黄或微 褪色并澄 带橙 清

10 (二) 官能团的反应 1 C17 – α – 醇酮基 还原性 A. 呈色反应 四氮唑盐 费林试液 多伦试液 OHˉ 肾上腺皮质激素药物 呈色

11 B. 沉淀反应 氨制硝酸银 肾上腺皮质激素药物 Ag↓黑色 碱性 酒石酸铜 Cu2O↓橙红色

12 2. C3–酮基和C20–酮基 甾体类激素药物 羰基试剂 黄色的腙 ＃常用的羰基试剂： 2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼

13 3. 甲酮基呈色反应 黄体酮 蓝紫色 亚硝基铁 氰化纳 其他甾体 淡橙色 不显色

14 4. 酚羟基 雌激素类药物 重氮苯磺酸 红色偶 氮染料

15 5. 乙炔基 含炔基的甾体激素 硝酸银 白色银盐沉淀 ↓

16 6. 有机卤素 蓝色配合物 茜素氟蓝 硝酸亚铈 有机氟 Fˉ 有机破坏 有机氯 Clˉ 硝酸—硝酸银 AgCl↓

17 （三） UV法 △４-3-酮 nm 苯环 nm

18 （四） IR法

19 （五） TLC法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别

20 （六） HPLC法 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）

21 三、 杂质检查 （一）有关物质检查 定义 与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“有关物质”

22 （1）TLC法（高低浓度对比法） 判定方法： 规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色

23 （2）HPLC法（高低浓度对比法） 判定方法： 规定杂质峰数目 规定杂质峰面积

24 （二）游离磷酸的检查 对照品法 地塞米松磷酸钠 氢化可的松磷酸钠 倍他米松磷酸钠 氢化泼尼松磷酸钠

25 （三）有机溶剂残留量的检查 甲醇和丙酮 GC法 甲醇 ≤0.3% 丙酮 ≤0.5%

26 四、含量测定 （一）HPLC法 USP、BP、JP均采用 RP－HPLC（大多内标法）
（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰） 特点 用样量少，灵敏度高，分离效 果好，测定速度快 例：黄体酮的含量测定：ODS柱； 甲醇-水（65：35）；254nm 内标：己烯雌酚

27 （二）UV法 △４-3-酮 nm（±） 肾上腺皮质激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素 苯环 nm（±） 雌激素

28 强分光光度活性药物 弱、非分光光度活性药物
（三）比色法 强分光光度活性药物 弱、非分光光度活性药物 化学反应 提问可采用什么方法来提高甾体激素类药物的分光光度活性。

29 四氮唑比色法 1. 原理 肾上腺皮质激素类 C17 -α－醇酮基 强还原性 OH - [还原]

30 2、方法：以醋酸地塞米松为例 制备对照液 加入四氮唑盐 制备供试液 484nm AX 有色产物 AR AX× CX AR ×V×标示量
标示量（%）= ×100% AR ×V×标示量

31 3. 讨论 （1） 基团对反应速度的影响 C11= O＞ C11－OH C21－OH＞ C21-酯

32 （2） 溶剂、水分的影响 含水量＞5%→ν↓ — 无水乙醇 含水10%→A↓10% 含水30%→几无反应 — 无醛无水乙醇 醛 → A↑

33 （3） O2与光线的影响 怕光 →避光、快速 反应过程 反应产物 O2影响颜色强度和稳定性 →隔绝空气、 快速、充N2

34 （4）碱的种类及加入顺序 反应应在强碱性（pH13.75） 条件下进行 以氢氧化四甲基铵的结果最佳 加入顺序：

35 （5） 温度与时间 t℃↑→ν↑→甲瓒分解↑ ChP ℃ ～45′

36 异烟肼比色法 C3－酮基 肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同 化激素、孕激素 1. 原理 HCl （缩合）

37 2.测定方法

38 3.讨论 （1） 反应速度 C3= O ＞ C17= O 、 C20= O C11= O 不反应 反应专属性 C3－酮基

39 （2）溶剂的选择 异烟肼盐酸盐→甲醇、乙醇 无水甲醇 无水乙醇

40 Kober反应比色法 雌激素 原理 λmax=515

41 第十章 复习内容 1、熟悉本类药物的分类，掌握其结构 特征与分析方法的关系 2、熟悉某些官能团的呈色反应，了解其他鉴别方法
第十章 复习内容 1、熟悉本类药物的分类，掌握其结构 特征与分析方法的关系 2、熟悉某些官能团的呈色反应，了解其他鉴别方法 3、掌握本类药物中其他甾体的检查方 法，了解其他特殊杂质的检查

42 4、掌握四氮唑比色法、异烟肼比色法 的原理、方法及测定条件。了解 UV法、Kober反应比色法及HPLC 法在其含量测定中的应用

43 .Kober反应是指雌激素类药物与_______共热呈色。( )
A.硫酸－甲醇 B.硫酸－乙醇 C.硫酸－甲醛 D.硫酸－醋酐

44 用四氮唑比色法测定皮质激素类 药物，是利用C17 –α醇酮基的何种性 质 A．氧化性 B．还原性 C．可加成性 D．酸性 E．碱性