项目6：疫苗生产技术 任务1：细菌类疫苗的生产技术.

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1 项目6：疫苗生产技术 任务1：细菌类疫苗的生产技术

2 教学安排 1. 员工培训 由老师讲解细菌疫苗生产的理论基础及应用范围。 分配实操任务：细菌疫苗(用大肠杆菌模拟)的生产。

3 2. 学生模拟组建运营一个细菌疫苗生产企业，撰写计划书(在理论教学期间完成)。
市场部：细菌疫苗的种类和用途，市场状况，选择生产的细菌疫苗品种，做市场销售预测。 技术部：确定细菌疫苗生产的工艺流程及工艺参数，编制生产操作规程，确定生产车间的布局。

4 品控部：制定所生产的细菌疫苗质量标准，生产取样分析操作规程，质量检测标准和操作规程。
总经理：协调监督各部工作，最后拿出完整的计划书。

5 3. 计划书实施。 计划书要先经过老师的审核，然后实施。 实施过程中考核操作技能。 实施后及时进行实训报告的撰写也总结。

6 细菌疫苗的生产流程

7 1　菌种的选择 菌种应具备的条件是： （1）菌种必须持有特定的抗原性，能使机体诱发特定的免疫力，阻止有关病原体的入侵或防止机体发生相应的疾病； （2）菌种应具有典型的形态，培养特性和生化特性，并在传代过程中，能长期保持这些特性；

8 (3）菌种应易于在人工培养基上培养； （4）如系制备死菌苗，菌种在培养过程就生产较少毒素； （5）如系制备毒素，应能产生大量典型毒素。

9 2　培养基的营养要求 　　往往需要特殊的营养物才能生长。如：结核杆菌以甘油为碳源；百日咳杆菌要以谷氨酸和胱氨酸作氮源等。 3　培养条件的控制 （1）气体 （2）温度 　　接近人体温度。

10 （3）pH 　　根据需要控制； （4）光 　　避光。 4　杀菌 　　热杀菌、甲醛溶液杀菌、丙酮杀菌。

11 5　稀释、分装和冻干 　　用含防腐剂的生理盐水稀释至所需的浓度，分装，2－10℃保存。 三　生物制品的分包装 1　生物制品的分装 　　先检定合格，并有各阶段的制造与检定记录，最近无菌实验超过6个月应重新检定。

12 标签必须完整、明确，品名、批号必须与分装通知单相符。
　　颜色相同而品名不同的活菌苗、活病毒苗与其他制品不得同室同时分装； 　　全部分装应严格控制无菌，原容器内直接分装，同一容器应当日分装完毕； 　　不同亚批制品不得使用同一灌注用具； 　　温度敏感的应控制25 ℃以下。

13 　　装量应多于标签标示量，分装20ml者补1ml分装10ml者补0.5ml，5ml补0.3ml，2ml补0.2ml。
2　生物制品的包装 　　分包后要作漏检。

14 重要的细菌及其类毒素类疫苗的生产工艺 一、伤寒疫苗 全菌苗会产生副反应； 多糖疫苗要求保持多糖乙酰基不被破坏，需用温和处理方法。 (1) 生产菌种 伤寒沙门氏菌。

15 (2) 制造工艺 培养和预处理 37℃深层通气搅拌培养10～12 h ：对数生长后期平衡前期； 0.5％～2.0％终浓度的甲醛杀菌

16 粗制Vi多糖制备 离心除菌； 季铵盐络合沉淀； 离心收集沉淀，用盐溶解分离； 25%乙醇沉淀，除杂蛋白； 80%乙醇沉淀多糖。

17 精制Vi多糖 10%饱和度乙醇钠溶解； 冷酚萃取除杂； 糖液用CaCl溶液透析； 75%乙醇溶液，丙酮脱水干燥。

18 二　卡介苗制备 牛型结核杆菌。 表面培养法： 　　采用改良的苏通培养基，温度37－39，时间10－12d，菌膜收集后压平，移入盛不锈钢珠瓶内，加适量稀释液，低温研磨，制备菌苗。 液体深层培养:

19 三　白喉类毒素 1　菌种及培养基 　　菌种：第8号菌株。 　　培养基：改良马丁培养基，保浦氏培养基，改良林氏培养基。 2　培养 　　多用深层培养。

20 温度　34－35℃ pH　　7.0－7.6 糖量　用麦芽糖 通气量　充足 氮源　补加谷氨酸 时间　50h左右

21 3　脱毒方法 （1）温度　越高越快，但超过40℃会降低抗原性，一般采用37－39 ℃ ； （2）pH值　越高越快，但碱性会降低抗原性，一般采用7.0－7.5； （3）甲醛浓度 越高越快，但过高会导致高甲醛残留，且增加注射疼痛。

22 4、白喉类毒素的精制 5、精制类毒素的吸附

23 四、破伤风疫苗

24 　　谢 谢!