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AKTA Purifier使用
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一、仪器使用注意事项
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AKTA purifier
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流路图 Inlet Pump 压力感应器 混合器 在线滤器 进样阀 色谱柱 紫外检测器 电导检测器 PH计 收集器
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使用环境 对操作环境的要求: 室内温度:4-40度 相对湿度:10-90% 输入电压:100-240VAC 功率:400AV-900AV
重量:40KG-70KG 注意事项: 1、主机要有良好的接地;计算机和主机不要用同一电源 2、当把主机置于远端控制时,com线不要长于15m
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仪器使用(1) 准备工作: 1、Buffer、超纯水、20%乙醇,0.45um或0.22um滤膜过滤、除气。 2、样品15000rpm离心10min,除颗粒、除气。
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仪器使用(2) 以分子筛为例: 1、清空废液缸。 2、准备好收集管。 3、开机:先开主机,后开电脑,避免连接错误。 4、将入口崩头A轻轻放入超纯水中,注意A和B不要搞反。如有需要此时可更换定量环。 5、检查泵后润洗液是否充足,泵后管路是否充满,允许有少量气泡。 6、对A泵两个泵头进行抽气,各10ml。 7、打开程序,低流速运行5分钟,然后运行Pumpwash,观察压力是否正常 8、使用Inject模式冲洗10ml,待紫外平稳即可装柱
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仪器使用(3) 装柱:在有流速和设置保护压力的情况下装柱,约0.3ml/min,从上到下,打开柱子上端后,使液体充满上端,避免进入气泡,然后将上端拧成半紧状态。然后打开下端,再将上端拧紧。120ml柱子可直接观测接口管路一段时间,看是否有气泡 装好后检查紫外检测线,以及出口处出液情况。 注意:在管路连好后,稍微将连接处管路向外拔一下,如果很容易拔出说明没连好。
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仪器使用(4) 柱子连好后观察压力情况,刚接上一般压力比正常压力稍低,属正常现象。 即使压力不超过报警压力,也不要将流速提高到正常流速以上。 Superdex75 10/300GL 24ml 流速0.6ml/min Highload16/60 superdex75 120ml 流速1ml/min 20%乙醇流速减半。
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仪器使用(5) 进样: 1、用注射器洗进样环,特别是入口处容易残留上次进样样品,需要特别注意。 2、进样时保证进样阀处于load位置。 3、注射器吸取样品时,尽量避免气泡,少量微小气泡关系不大。 4、进样体积大于定量环体积,否则容易进气泡。
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仪器使用(6) 使用完毕: 1、系统保存于20%乙醇 2、倒掉废液 3、擦干所有积水 4、仪器配件归位
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维护-每天: • 检查系统是否渗漏. • 如果数天不使用仪器,须用水将系统冲洗干净, 并将层析柱和pH计拆下,之后用20%乙醇清洗系
系统(System): • 检查系统是否渗漏. • 如果数天不使用仪器,须用水将系统冲洗干净, 并将层析柱和pH计拆下,之后用20%乙醇清洗系 统,并用20%的乙醇保存所有的流路。 系统泵(Pump P-900): •检查系统泵是否渗漏,如果发现泵头发生渗漏,或是流量不准确,则需更换泵头密封圈。更换缓冲液时,需排尽泵头里的残存气泡,否则会影响流速的准确性。
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维护-每周 • 检查筛网是否很脏,如有必要须更换. • 清洗滤器,如有必要须更换滤膜,否则会形成 很高的在线压力,损坏层析柱。
缓冲液筛网(Inlet filters): • 检查筛网是否很脏,如有必要须更换. 在线滤器(On-line filter): • 清洗滤器,如有必要须更换滤膜,否则会形成 很高的在线压力,损坏层析柱。 泵冲洗液(Pump rinsing solution): • 更换泵后冲洗液(20%乙醇)。如果冲洗液瓶中液体量增加,说明泵头密封圈渗漏,须更换
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维护-每三个月 •检测光源强度(应大于20%)及使用时间(大于4000hr)、光栅翻转时间(大于2000hr)
紫外监测仪(Monitor UV-900): •检测光源强度(应大于20%)及使用时间(大于4000hr)、光栅翻转时间(大于2000hr) 保护光纤,防止折断或扭弯,否则无法采集数据或数据不准 在不做柱层析时,注意关掉光源,尽量延长灯的使用寿命和减少光栅的机械磨省。 10ml系统 100ml系统
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维护-每六个月 • 清洗UV流通池,如果样品很脏则须更频繁的清洗. •检查和校正pH计
Monitor UV-900 • 清洗UV流通池,如果样品很脏则须更频繁的清洗. Monitor pH/C-900 •检查和校正pH计 (pH计在不使用时必须保存在下述溶液中: 1:1 mixture of pH 4 buffer and 2 M KNO3或pH4.0的饱和KCl溶液中) Mixer M-925 •检查混合仪及接头是否松动
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维护-每年 • 检查阀是否渗漏,如果渗漏则需更换阀头 Valve INV-907, IV-908 and PV-908
维护-每两年 Mixer M • 更换混合池
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系统清洗(Cleaning the system)
每天工作结束后(At the end of the day) 如果系统仍将使用之前一天的相同缓冲液,则可以用10%的使用流速,用缓冲液冲洗泵 如果将在第二天更换缓冲液,则需用水用PumpWash功能将泵冲洗干净 几天停用仪器(Leaving for a few days) 先用水PumpWash冲洗之后,再用20%的乙醇将系统冲洗干净,包括所有的进口管路和出口管路都用20%的乙醇保存好
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每月清洗(Monthly cleaning) 必须每月按时清洗系统或在遇到问题时清洗系统(如色普峰出现重影): 用1M NaOH ,执行SystemWash指令. 之后立即用水将NaOH冲洗干净.
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系统移动(Moving the system)
移动系统时小心谨慎,拆下外围的部件和管道,并防止剧烈震动,
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小心!(WARNING!) ·在更换部件时必须关掉所有的电源. ·如果有水或缓冲液渗入到仪器内部带电部位,须立即关掉电源,并求助于维修工程师
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P-900柱塞泵 初次使用或停用一段时间后再次使用时,首先以较低的流速运行,逐渐增加流速。切记不要开机后即高速运行
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需要注意的问题 1、废液溢出 注意:每次用完倾倒废液,使用之前看下废液缸,没倒的话,清空并提醒上一位同学。 2、不充20%乙醇
注意:2天不用必须充20%乙醇,当天必须充上水,切忌保存在Buffer里 3、使用频率过高,时间过长。 注意:尽量节约蛋白使用,减少仪器使用次数。使用时尽量节约时间,平衡时不需要走整个柱体积,进样后也一样。合理安排时间,尽量不要出现因为有事而长时间的空走。 4、用大柱子进行分析 注意:大柱子用于制备,小柱子进行分析。 5、开机使用pumpwash 注意:为避免对泵造成损伤,开机运行后不要立即使用pumpwash,应先用低流速走几分钟。保证抽过泵头后,可省略pumpwash。 6、注意平衡时关闭紫外灯。 7、压力偏高时请不要降低流速继续使用,考虑更换滤器和通知管理员冲洗柱子。 8、所有配件和说明书使用完后必须归位。
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二、层析原理
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三、Unicorn 使用
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