組別：第六組 報告者：林嘉鴻 組員：劉瓊鎂、姜芸妮、曾祥佑 指導教授：陳淑德 老師 中華民國100年7月10日

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1 組別：第六組 報告者：林嘉鴻 組員：劉瓊鎂、姜芸妮、曾祥佑 指導教授：陳淑德 老師 中華民國100年7月10日
靈芝菌的培養及液固態發酵 組別：第六組 報告者：林嘉鴻 組員：劉瓊鎂、姜芸妮、曾祥佑 指導教授：陳淑德 老師 中華民國100年7月10日

2 大綱 前言 目的 材料與設備 實驗步驟 結果與討論

3 前言 靈芝作為藥物在中國已有五千年的歷史，歷代著名之本草書籍均記載有關於靈芝的述敘。靈芝的培養方法可分為野生與人工栽培，由於靈芝有多種功效，所以希望從人工培育中能大量生產。而在靈芝的培育過程中，培養基的準備和如何接菌使菌種發酵則為最基礎的功夫。若能將這兩項做好，養出靈芝便不是難事了。

4 實驗目的 靈芝菌種培養－學習靈芝菌種的培養 靈芝菌種活化－ 學習靈芝菌種的預活化 靈芝的液態發酵－學習靈芝的液態發酵
靈芝的固態發酵－學習靈芝的固態發酵

5 材料與設備 靈芝菌種培養 靈芝菌株(Ganoderma lucidum)、PDA
平板培養皿、螺旋式管、試管架、pipe、 酒精燈、殺菌釜、無菌操作台、錐形瓶、加熱器、電子天平、燒杯、接種環、量筒、30℃培養箱。

6 材料與設備 靈芝菌種活化 靈芝菌株(Ganoderma lucidum)、PDB
500mL搖瓶、pipe、酒精燈、殺菌釜、無菌操作台、錐形瓶、接種環、電子天平、恆溫振盪培養箱。

7 材料與設備 靈芝的液態發酵 靈芝菌株(Ganoderma lucidum)、糙米粉、 Glucose、Yeast extract
500mL搖瓶、pipe、酒精燈、殺菌釜、無菌操作台、錐形瓶、電子天平、恆溫振盪培養箱。

8 材料與設備 靈芝的固態發酵 靈芝菌株(Ganoderma lucidum)、糙米粒
玻璃罐、濾布、綿繩、鋁箔紙、pipe、 酒精燈、殺菌釜、無菌操作台、錐形瓶、脫水機、電子天平、量筒、培養箱。

9 實驗步驟-靈芝菌種培養 秤5.85gPDA+150ml水至於250ml錐形瓶中
將錐形瓶蓋子蓋上進行滅菌(121℃，20min，1.1大氣壓) 滅菌後於操作台中將培養皿倒入15~20ml後等待冷卻凝固 將靈芝菌平板以接種環分切成約1cm²之菌塊，分別貼附於平板及斜面表面，再置於30℃培養箱培養一週。 於實驗末期觀察靈芝在平板和斜面培養基上之生長

10 實驗步驟-靈芝菌種活化 秤3.6gPDB+150ml水(二重複)置於250ml搖瓶中 進行滅菌(121℃，20min，1.1大氣壓)
滅菌後於無菌操作台中放冷至室溫 於每瓶中接種5ml之菌液，培養於30℃，150rpm震盪培養箱一週 於實驗末期觀察靈芝在搖瓶中的生長情形

11 實驗步驟-靈芝的液態發酵 秤7.5g糙米粉+150ml水(二重複)置於250ml搖瓶中攪拌均勻 進行121℃，20分鐘滅菌
殺菌後將搖瓶置於無菌操作台冷卻至室溫 每瓶接入10ml預活化的靈芝菌液 在30℃，150rpm震盪培養箱培養兩天

12 實驗步驟-靈芝的固態發酵 秤100g糙米粒+100ml水(二重複)置於玻璃瓶中攪拌均勻 封蓋後蓋上濾布及鋁箔紙進行121℃ 滅菌60分鐘
將發酵罐取出，於無菌操作台冷卻至室溫 每瓶均勻接入20mL預活化靈芝菌液 置30℃培養箱培養5～7天

13 結果與討論

14 下面這些是由斜面接平板，都沒有發現菌的生長。
靈芝菌種培養-平板 上面這些是由平板接菌到平板，都有長菌。 這是受污染的平板 下面這些是由斜面接平板，都沒有發現菌的生長。

15

16 受污染之平板

17 靈芝菌種培養-斜面 此為由平板接至斜面

18 受污染之斜面

19 靈芝菌種活化

20 原本應為澄清狀之PDB卻變為混濁狀，所以應為被污染。

21 靈芝的液態發酵 菌絲球的出現

22 可以明顯看見基質表面有白色菌絲出現，但由於沒有混勻，幾乎只看見表面有菌絲的出現。
靈芝的固態發酵 可以明顯看見基質表面有白色菌絲出現，但由於沒有混勻，幾乎只看見表面有菌絲的出現。

23 若攪拌均勻則菌絲分布較平均，可看見菌絲長的也比較多。
靈芝的固態發酵 若攪拌均勻則菌絲分布較平均，可看見菌絲長的也比較多。

24 討論 由上面的圖探討為何會受雜菌汙染之原因： 1.操作台或操作人員未確實消毒乾淨 2.機器老舊過濾網失去功能 3.操作時未確實在操作台內進行
4.操作時未依實際流程操作 斜面接平板未有人成功，可能是因為技術不純熟，所以都長不出菌絲。

25 Thanks for your attention!