第八部分 传染病的免疫学检测 一 、伤寒、副伤寒血清学诊断 （一）肥达（Widal）试验 方法：试管法

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1 第八部分 传染病的免疫学检测 一 、伤寒、副伤寒血清学诊断 （一）肥达（Widal）试验 方法：试管法
步骤：试管编号稀释病人血清+菌液混匀, 放置16-20小时观察结果。  结果判定 : 以出现++凝集的血清最高稀释倍数为该血清的 凝集抗体的效价

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3 正常值： O≤1:80；H≤1:160 临床意义： 1. “O”和“H”均高于正常值，可考虑为伤寒；恢复期较急性期增长4倍以上确定诊断。 2. “O”抗体（IgM）出现较早， “H”抗体（IgG）出现较晚 3. 病程第2周以后，大多出现阳性反应，一般以第3、4周阳性率最高，病愈后，可持续数月。

4 （二）酶联免疫（ELISA）试验 方法：抗原(伤寒杆菌脂多糖或Vi抗原)包被 +待测 血清 +第二抗体（酶标记）底物显色 参考值：<1:20 临床意义： 1. 早期诊断(发病1周后即可升高） 2. 检测抗Vi抗体，可以诊断伤寒带菌者

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6 二、抗链球菌溶血素“O”测定 —— 溶血抑制法 原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）存在于感染链球菌病人的血清中，可以和溶血素“O”特异性结合，使之失去溶血作用 方法：病人血清  倍比稀释  ＋溶血素  +红细胞  观察溶血现象 结果判定：无溶血现象的血清最高稀释倍数定为ASO的单位数。 参考值：ASO<400U 临床意义： 1. 链球菌感染1周，ASO↑，4～6周达高峰。 2.风湿热：ASO↑。

7 三、肝炎的免疫学检测 （一）甲型肝炎（HAV）的免疫学检查： 1. 粪便中HAV抗原的检测 ELISA夹心法
方法：①标本处理：待测粪便+牛肉汤盐水冻融离心取上清(即待测抗原)；②包被抗体； ③加待测标本；④加酶标抗体(HRP-抗甲肝IgG)；⑤加酶底物；⑥测定OD492。 结果判断： 待测标本OD值 ——————— ≥ 2.1阳性 阴性对照OD值

8 2 抗HAV-IgM的检测 抗体捕获ELISA法 方法：抗人μ链包被  +待检血清(含抗HAV-IgM)  +HAAg  +HRP-抗HAV-IgG+酶底物测定OD492 。 结果判断： 待测标本吸光度值 ————————≥2.1阳性 阴性对照吸光度值 临床意义：发病4周后，几乎全部患者抗HAV-IgM 为阳性，用于甲肝诊断。 检测抗HAV-IgG可用于流行病学调查。

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10 （二）乙型肝炎的免疫学检测 1. HBsAg的检测 ——反向间接血凝试验 方法：致敏红细胞(抗HBsAg＋RBC) ＋患者血清 (含HBsAg)凝集

11 2.抗HBs检测 ELISA抑制法 方法：抗HBs包被  +HBsAg(已知浓度) +待测标 本 +HRP-抗HBs  +酶底物  目测或测 定OD492 结果判定： 目测：阳性孔－无色或浅黄 阴性孔－桔黄色 OD值测定： < 0.5 待测孔OD值 阴性对照OD值

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13 血中HBV标志物检查法及其阳性意义 标志物 常用检测法 阳性意义 HBsAg ELISA夹心法 正在或曾经感染
标志物 常用检测法 阳性意义 HBsAg ELISA夹心法 正在或曾经感染 抗-HBs ELISA抑制法 曾感染或疫苗注射 抗-HBc(IgM类) 抗体捕获ELISA 发病期，慢性恶化期 抗-HBc(IgG类) ELISA抑制法 曾感染，急性恢复期 HBeAg ELISA夹心法, RPHA HBV复制，感染性强 抗-HBe ELISA抑制法， PHA 急性感染，趋向恢复 HBV-DNA PCR法 HBV复制 前S2Ag ELISA夹心法 HBV复制 抗-前S ELISA抑制法 提示预后良好

14 四、梅毒血清学检查 1. 未灭活血清反应素试验 (unheated serum reagin test, USR) 玻片凝集法
方法：病人血清和脂质抗原(心磷脂、卵磷脂和胆固醇混合物）各一滴  玻片上  混合振动4min  观察结果 结果判断： － （阴性） 无凝集 ＋ （弱阳性） 小凝集块 ＋＋～＋＋＋(阳性) 中或大凝集块

15 2. 快速血浆反应素试验(rapid plasma reagin test, RPR)
方法：病人血清＋RPR抗原(活性炭结合类脂质Ag)观察凝集颗粒或絮片 结果判断：阴性 无黑色凝集 阳性 明显黑色凝集颗粒或絮片 临床意义： 1.梅毒患者 USR阳性者，70％～90％； RPR阳性者，80％～95％。 2. 某些麻风、SLE、硬皮病、类风湿性关节炎等也可出现USR假阳性。

16 3.荧光密螺旋体抗体吸收实验(FAT-ABS)
方法：病人血清(56℃,30min)  加非致病螺旋 体抗原吸收  滴加于抗原(梅毒螺旋体) 片  +FITC-抗人IgG  荧光显微镜检 查。 结果判定：++  阳性 ±  + 可疑 - 阴性

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18 五、获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)的相关检测技术
　1.抗HIV抗体的检测： ① 酶联免疫吸附试验（ELISA） ②明胶颗粒凝集实验(PA) ③免疫荧光检测法（IFA） ④免疫印记法（western blot） ⑤放射免疫沉淀法（RIP） 应用： ①、②和③用于筛查； ④和⑤用于确定诊断。

19   HIV病毒检测： ①细胞培养分离病毒 ②检测HIV抗原。 3.细胞免疫功能： ①检测T细胞功能 a.CD4T淋巴细胞计数 b.迟发变态反应皮试 c.有丝分裂原刺激反应 ②检测B细胞功能 a.循环免疫复合物 b.免疫球蛋白

20 1. 血清中抗HIV抗体检测 间接免疫荧光法 方法：淋巴细胞(感染HIV)涂片  待检血清(16稀 释  FITC-抗人IgG 观察结果 结果判定：阳性 胞浆出现弥漫性荧光

21 2.血清中抗HIV抗体检测 免疫印记法 方法：HIV-1蛋白抗原裂解物  SDS-PAGE电泳  转移至硝酸纤维膜  +待测血清  +HRP- 抗人IgG  +酶低物  观察结果。 结果判定： 阴性 无可见显色条带 阳性 可见显色条带，根据显色带对应的 抗原的分子量判定HIV感染，如： P24、P31和gP41或gP160/120显色 可确定为感染阳性，缺少P24或P31 为可能阳性，只有其一为可疑。