抗ENA抗体谱 (extractable nuclear antigen, ENA)

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1 抗ENA抗体谱 (extractable nuclear antigen, ENA)
属非组蛋白的核蛋白，为酸性蛋白抗原，是由许多小分子RNA与各自对应的特定蛋白质组成的核糖核蛋白颗粒，分子中不含DNA

2 抗ENA抗体谱 (extractable nuclear antigen, ENA)
抗核抗体ANA 核抗原有三个组成部分：组蛋白、DNA、可溶性核抗原 可溶性核抗原可用盐水或磷酸盐缓冲液从细胞核中被提取

3 ENA检测方法 免疫印迹法（Western-blot） 斑点酶免疫吸附试验 ELISA 双向免疫扩散（ID） 对流免疫电泳（CIE）

4 ENA检测方法 免疫印迹法检测ENA谱的原理 ⑥ 加底物显色，观察结果 ⑤ 洗去多余酶标二抗 ④ 加入酶标二抗反应 ③ 洗去未反应蛋白
非特异蛋白 E ENA检测方法 ③ 洗去未反应蛋白 E ② 加入标本反应 自身抗体 ① 纯化抗原膜条（膜条试剂盒）

5 临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括： 抗U1-RNP 抗Sm 抗SSA 抗SSB 抗Scl-70 抗Jo-1 抗rib-P蛋白

6 抗可提取性核抗原（ENA）抗体 抗可提取性核抗原（ENA）抗体
anti-extractable nuclear antigen antibodie 抗RNP抗体：高滴度抗RNP抗体是MCTD的特征性抗体，抗体滴度与疾病的活动性相关 抗Sm抗体：对SLE高度特异（超过90%），约5%-40%患者为阳性，同ds-DNA抗体一起，都被认为是参与疾病的致病过程 Sm和RNP是同一分子复合物中的不同抗原位点，两种抗原具有相关性，故抗Sm抗体抗体阳性常伴有抗RNP阳性  抗SSA抗体：最常见于SS（40%-95%的阳性率），也可见于SLE（20%-60%）及PBC（20%）。抗SSA抗体特别见于新生儿红斑狼疮（100%），又称新生儿SLE综合征 抗可提取性核抗原（ENA）抗体

7 抗可提取性核抗原（ENA）抗体 抗可提取性核抗原（ENA）抗体
anti-extractable nuclear antigen antibodie  抗SSB抗体：几乎均在女性患者中检出（29:1），可出现在 SS（40%-95%），SLE（10%-20%）和新生儿红斑狼疮（75%）。抗SSA和抗SSB抗体同时阳性主要出现在SS  抗Scl-70抗体：分布在核浆内，在核仁内浓度非常高，参与DNA双螺旋的复制和转录。抗Scl-70抗体可见于25%-75%的系统性硬化症患者  抗Jo-1抗体：多见于多发性肌炎和皮肌炎，阳性率为25%-35%，常常与肺间质纤维化/纤维素性肺泡炎相伴发  抗核糖体P蛋白抗体：为SLE特异性自身抗体（10%-30%）。SLE中高滴度的核糖体P蛋白与疾病活动度不相关 抗可提取性核抗原（ENA）抗体

8 均质型 肝片 Hep-2细胞 抗组蛋白抗体(histone) 抗dsDNA抗体 抗核小体抗体(nucleosome) 抗ssDNA抗体
肝片 Hep-2细胞 抗组蛋白抗体(histone) 抗核小体抗体(nucleosome) 抗dsDNA抗体 抗ssDNA抗体 高效价：SLE 低效价：RA,慢性肝病，传单，药物诱发的LN

9 斑点型（或颗粒型） 肝片 Hep-2细胞 抗U1-nRNP 抗Sm抗体 抗SSB/La抗体 高效价斑点型常见于MCTD

10 核膜型（或周边型） 相关抗体：抗dsDNA抗体 与胶原病、PBC、慢性活动性肝炎等相关

11 相关抗体：抗RNA聚合酶-1抗体、抗SCL-70抗体
核仁型 相关抗体：抗RNA聚合酶-1抗体、抗SCL-70抗体 与硬皮病相关

12 核点型（DOTS）   抗着丝点型 见于SLE、SS、PBC、风湿病 硬皮病局限型标志抗体

13 实验室方法的选择流程 确诊试验 自身免疫性疾病的筛选试验 ANA检测 95%～99%可排除SLE （－） SLE治疗缓解
病情特重（大量IC沉积消耗抗体） （＋）低滴度 常见于RA等其它自身免疫性疾病 　　　高滴度　可作为诊断SLE的依据 ENA抗体谱检测 （－）不能排除SLE 抗dsDNA、Sm、rib抗体 （＋）可帮助诊断SLE　 自身免疫性疾病的筛选试验 ANA检测 确诊试验 抗Scl 硬皮病 抗Jo-1抗体 PM/DM 抗SSA和抗SSB 干燥综合症 胞浆自身抗体 抗AMA-M2：PBC

14 自身免疫性疾病检测的应用原则 免疫球蛋白、补体等检测 + ANA筛选 ENA抗体谱 抗胞浆型抗体鉴定 其它自身抗体

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16 思考 实验操作无误，保证带未出现，可能的原因？ 条带RNP/Sm与Sm的关系? 阳性质控的意义?

17 标本信息 标本号 临床诊断 ANA结果 ENA结果 1 体检 — 2 口干，腿痛 1:1000胞浆型 3 SS？ 1:3200颗粒型 4
SSA(60KD)+++SSA(52KD)+++ 4 雷诺现象 1:1000颗粒型着丝点型 SSA(60KD)++SSA(52KD)++ SCL-70+ 5 干燥综合征？ 1:320颗粒型 SSA(60KD)+SSA(52KD)++ SSB+ 6 面肌痉挛，神经痛 1:100颗粒型 Rib-P+ 7 睡眠障碍，头痛 1:100胞浆型 RNP+