模式动物斑马鱼 邵明 生命科学学院发育生物学研究所.

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1 模式动物斑马鱼 邵明 生命科学学院发育生物学研究所

2 【0hpf－24hpf】 HT = h / (0.055T- 0.57) 斑马鱼发育时期的计算公式：
HT = 在温度T条件下所发育的小时数； h = 在28.5℃ 的标准条件下 所发育到的小时数。 For example, computation of development to the 20-somite stage (occurring at 19 h at the standard temperature) yields 23.6 hours at 25C, and 15 hours at 33C. These times not not differ significantly from those observed (23.5 hours and 14.5 hours).

3 斑马鱼的早期发育（从受精到原肠作用结束）

4 斑马鱼作为模式动物的优势 世代周期短（约1.5－3个月），发育迅速 胚胎透明，易于观察 斑马鱼饲养管理较为简单，产卵量大
是目前唯一可以进行大规模遗传突变筛选的脊椎动 物，已成为目前最好的脊椎动物发育遗传学研究体 系之一

5 斑马鱼发育生物学的研究手段 解剖学手段 Developmental anatomy 试验手段 Experimenta approach
遗传手段 Developmental Genetics

6 解剖学手段 细胞标记 1. 某一部位的细胞将来发育成什么组织 2. 胚胎某部分的细胞在形态发生过程中的行为

7 Caged dye Caged dyes 荧光标记 By photoconversion Kaede UV

8 DMNB caged fluorescein

9 试验手段 （Experimental approach）
试验手段：通过扰乱和破坏来观察胚胎的反应，目的是研究胚胎发育某个过程的机理

10 显微操作 显微注射 显微移植术 缺损实验 重组实验

11 显微注射和移植

12 发育生物学的遗传学手段 Developmental Genetics

13 非同位素的标记：地高辛（Digoxigenin）标记探针的原位杂交

14 goosecoid的时空表达模式

15 研究基因功能的方法 loss of function 正向：诱变，转基因引起的插入突变 反向：基因敲除技术，基因敲低技术
-----gain of function 基因瞬时高表达 持续过量表达 错误表达

16 基因突变正向筛选技术 斑马鱼的正向遗传学筛选 （ENU，virus，transposon）

17 Ekker et. al. 2011

18 基于转座子的转基因技术

19 TALENs介导的基因打靶技术 Recent work on the DNA-binding properties of transcription activator-like effector (TALE) proteins has shown that their specificity also relies on only a few key residues with a predictable code that can be used to design new DNA-binding proteins. Non-homologous end joining (NHEJ)

20

21 dscr3 MZ mutant 的构建

22 Cas9系统 我们实验室参加了全国斑马鱼一号染色体敲除联盟，一号染色体约1500个基因，我们负责60个。

23 Morpholino介导的基因敲低（Knock down）技术
一种RNA的类似物 磷二酰胺键

24 Morpholino 介导的特异的 knockdown

25 构建某个基因的显性抑制形式（Dominant Negative）和组成活性形式（Constitutively-Active）
DN＝Knockdown CA＝overexpression GSK3S9A constitutively active form Kinase dead GSK-3, dominant negative

26 谢谢大家！