实验五 细菌的芽胞染色法 一、实验目的 学习并掌握芽胞染色法 初步了解芽胞杆菌的形态特征及芽胞在菌体中的位置.

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1 实验五 细菌的芽胞染色法 一、实验目的 学习并掌握芽胞染色法 初步了解芽胞杆菌的形态特征及芽胞在菌体中的位置

2 二、实验原理 芽胞：某些细菌在生长发育后期，在细胞内形成一个圆形或椭圆形厚壁、含水量极低、抗逆性极强的休眠体。
芽胞染色：在加热条件下用着色力强的染色剂(孔雀绿)染色，染料可同时进入菌体和芽胞。经水洗脱色时，芽胞不易脱色，用对比度大的复染剂(石炭酸番红)染色后，易于区分。

3 三、实验器材 菌种:枯草芽胞杆菌 染色剂：5％孔雀绿水溶液，0.5％沙黄(石炭酸番红)水溶液
其他：小试管、滴管、烧杯、试管夹、载玻片、显微镜等

4 四、实验步骤： 1.制片:制备菌涂片、干燥及固定
2.加热染色:向载玻片滴加数滴5%孔雀绿染液覆盖涂菌部位,用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒汽并维持5min,及时补充染液,切勿让涂片干涸。 3.脱色:水洗脱色至水流无色为止。 4.复染:沙黄（0.5%番红)复染 2－3min。 　　　 5.水洗：水洗无色为止。 6. 镜检将载玻片晾干后油镜镜检。 注意：菌液要浓

5 枯草芽胞杆菌

6 巨大芽胞杆菌

7 破伤风梭状芽胞杆菌

8 破伤风梭状芽胞杆菌

9 肉毒梭菌

10 炭疽杆菌

11 五、实验结果与分析 绘制观察到的枯草芽胞杆菌形态视野图，并注明放大倍数。 2.进行实验结果分析

12 实验六 霉菌的形态观察 一、实验目的 学习并掌握观察霉菌形态的基本方法 了解四类常见霉菌的基本形态特征

13 二、实验原理 霉菌可产生分枝或不分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。 观察霉菌的形态有多种方法，常用的有下列三种：直接制片观察法：是将培养物置于乳酸石炭酸棉蓝染色液中，制成霉菌制片镜检。载玻片培养观察法：用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。玻璃培养观察法：霉菌的玻璃纸培养观察方法与放线菌的玻璃纸培养观察方法相似 。这种方法用于观察不同生长阶段霉菌的形态，也可获得良好的效果。

14 三、实验器材 菌种黑 曲霉 ( Aspergillus sp . ) ， 青霉 ， 黑根霉 ( Rhizopus sp . ) 和毛霉（ Mucor sp. ）培养 2-5d 的马铃薯琼脂平板培养物。 培养基：土豆琼脂或察氏培养基 溶液或试剂：乳酸石炭酸棉蓝染色液 其他：无菌吸管、平皿、载玻片、盖玻片、显微镜等

15 四、实验步骤 直接制片观察法: 1.在载玻片上加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落边缘处挑取少量已产孢子的霉菌菌丝；
2.先置于 50 ％乙醇中浸一下以洗去脱落的孢子，再放在载玻片上的染液中，用解剖针小心地将菌丝分散开。 3.盖上盖玻片，置低倍镜下观察，必要时换高倍镜观察。 注意：挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。菌液要浓

16 曲霉（分生孢子）

17 青霉（分生孢子）

18 根霉（孢囊孢子）

19 根霉（接合孢子）

20 毛霉（孢囊孢子）

21 五、实验结果与分析 1. 结果 绘图说明四种霉菌的形态特征。 2. 思考题 （ 1 ） 你主要根据哪些形态特征来区分上述四种霉菌？
（ 2 ） 根据载玻片培养观察方法的基本原理，你认为上述操作过程中的哪 些步骤可以根据具体情况作一些改进或可用其他的替代方法？ （ 3 ） 你认为在显微镜下，细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的主要区别是什么？