微生物分離技術 劃碟法 塗碟法 倒碟法 斜面培養.

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1 微生物分離技術 劃碟法 塗碟法 倒碟法 斜面培養

2 一、培養方法 純種培養主要分增殖及分離二個程序。 1. 增殖培養 增殖培養技術(enrichment culture technique): 調整培養條件，以便篩選 某特殊微生物之過程。 培養基的選擇 取樣 接種 適合環境 觀察菌相 再接種 例: 厭氧菌之培養 利用銨為能源的微生物

3 2. 分離: 將微生物分離成純種培養，原理為使菌數遞減最終達成獨立分離。其方法:
A. 倒碟法(pour plate)或注入培養 B. 劃碟法(streak plate) C. 塗抹法(spread plate) D. 液體分離培養法

4 二、大量培養 1. 批次培養(batch culture): 於一定量營養源的培養基注入微生物，為一種 沒有新營養物質補充及代謝物回收之培養法， 適合短期使用。 2. 連續培養(continuous culture) 不斷有新鮮營養源及代謝物移除之培養法，可 保持菌之活性與新鮮度。 A. 化學恆定器(chemostat): 適用於低稀釋 率(基質之流速/容器體積)之培養槽特點 為基質進料速率微生物移除速率。 B. 恆濁器(turbidostat):適用於高稀釋率之 培養槽新鮮培養基之進料速率取決於光 電設備控制。

5 三、菌種之保存 目的:保存培養之微生物(純種或混合) ，作為日後研究時之備份。 1. 定期接種: 特點是保持菌體不斷生長；缺點為 耗費人力物力、增加污染機會、增加突變機 率，通常適用短期保存。 2. 油封法: 以殺菌過的礦物油或石蠟封口，多用 於黴菌保存。 3. 砂保存法: 將菌株混入殺菌過之泥土或砂中， 適用於耐旱性高的細菌或黴菌之保存。 4. 低溫冷藏法: 於4oC下保存使其代謝降低。 5. 冷凍乾燥法(lyophilization): 於真空下使菌體水 份直接昇華，菌體置於密閉管保存，約數十 年。

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7 劃碟法續上

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11 斜面培養續上

12 步驟說明: 先將菌液做適當之10倍連續稀釋，記錄所使用之菌種學名(屬名+種名) ； 除劃碟法外，塗碟及倒碟之菌數最好介於30-300個之間； 倒碟法之培養基應各組準備，每人一份，每份約以25mL量計算所需之量(例如4人則準備100mL)，先高溫高壓滅菌完後，待冷卻至45度左右，才可加入菌液(0.1mL)； 塗碟法使用之菌液也為0.1mL； 計算 菌數/mL