以不同萃取方式利用高效液相層析儀 (High-performance Liquid Chromatography)測定不同種類之甘草酸含量

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1 以不同萃取方式利用高效液相層析儀 (High-performance Liquid Chromatography)測定不同種類之甘草酸含量
海軍軍官學校 應用科學系 105年專題研究成果發表會 以不同萃取方式利用高效液相層析儀 (High-performance Liquid Chromatography)測定不同種類之甘草酸含量 校長，教育長，總隊長，各級長官，老師，同學大家好。我要報告的主題是 我是今天的報告人正期一百零六年班龔猷皓。 龔猷皓 徐敏馨

2 大綱 前言 實驗步驟 實驗過程 甘草酸之提取率 標準偏差分析表 文獻比較 結論 報告大綱有前言等七大項，請參閱。

3 前言 甘草酸具有下列藥理性質 腎上腺皮質類固醇 抗炎 解毒 鎮痛 鎮咳 抗潰瘍
研究發現甘草酸具有下列藥理性質。假設我們今天能將甘草酸摻入軍用野戰口糧中，利用其藥理性質，在戰時的風寒及傷口處理上，提供基本的醫療效用，為戰場上個人的基本醫療保健做更進一步的保障，以增加官、士、兵之續戰力及存活率。 因此其主要成份－甘草酸，也被做了許多更進一步的研究，對於其相關產品的使用量也越來越高。因此我想找出何種萃取法適用於何種甘草。 史桂蘭與胡志浩（2001），甘草酸藥理作用及臨床應用研究進展。天津藥學，第 13 卷第 1 期：10-12頁。

4 光果甘草：Glycyrrhiza inflate 脹果甘草：Glycyrrhiza glabra
這是我所使用的兩種甘草 光果Glycyrrhiza inflata Batal:皮較粗糙 脹果Glycyrrhiza glabra Linn:皮較光滑

5 實驗步驟 脹果甘草 切塊 光果甘草 各取30g 有機溶劑 萃取法 室溫 提取法 蒸餾法 微波 將兩種甘草切塊，各取30g

6 實驗步驟 有機溶劑 萃取法 室溫 提取法 蒸餾法 微波 高效液相層析儀(HPLC) 計算其含量 進樣 分析

7 實驗過程 有機溶劑萃取法 1.製做提取液 提取兩次 2.去除植物蛋白、多醣等物質 脹果甘草 光果甘草 合併濾液 取100ml 上清液
溫度90°C加熱1hr 提取兩次 光果甘草 有機溶劑萃取法，首先是製作提取液，特色是使用有機溶劑去除植物蛋白、多醣等物質。 2.去除植物蛋白、多醣等物質 靜置室溫24hrs 95%乙醇50ml 合併濾液 取100ml 以6000rpm 離心15mins 上清液

8 實驗過程 有機溶劑萃取法 3.得甘草酸濕品 甘草酸 上清液 濕品 加入3.5M硫酸50ml後沉澱 3.5M硫酸50ml 靜置室溫24hrs
以6000rpm 離心15mins 加入3.5M硫酸50ml後沉澱

9 實驗過程 室溫提取法 1.取得上部澄清液 2.得甘草酸濕品 光果甘草 上清液 脹果甘草 甘草酸 上清液 濕品 靜置室溫24hrs
含1%氨之60%乙醇200ml 上清液 靜置室溫24hrs 以6000rpm 離心15mins 2.得甘草酸濕品 室溫提取法，特色是加入含1%氨之60%乙醇200ml ，靜置於室溫下提取24hrs。 甘草酸 濕品 上清液 靜置室溫24hrs 3.5M硫酸50ml 以6000rpm 離心15mins

10 加入3.5M硫酸50ml後沉澱 甘草酸濕品 A-光果甘草 B-脹果甘草

11 實驗過程 蒸餾法 1.製做提取液 提取兩次 2.得甘草酸濕品 取100ml 濾液 甘草酸 濕品 光果甘草 脹果甘草 去離子水150ml
溫度90°C轉速800rpm加熱1hr 光果甘草 脹果甘草 去離子水150ml 提取兩次 2.得甘草酸濕品 蒸餾法，特色是提取液提取後再加熱蒸發。 取100ml 濾液 合併濾液 甘草酸 濕品 溫度90°C轉速800rpm加熱1hr 3.5M硫酸50ml 靜置室溫24hrs 100ml 以6000rpm 離心15mins

12 加入3.5M硫酸50ml後沉澱 甘草酸濕品 A-脹果甘草 B-光果甘草

13 實驗過程 微波提取法 1.製做提取液 2.得甘草酸濕品 光果甘草 靜置冷卻 脹果甘草 取100ml 濾液 甘草酸 濕品 含1%氨之60%乙醇
靜置室溫15mins 以功率810W 微波30secs 靜置冷卻 2.得甘草酸濕品 微波提取法，其特色在於利用微波的高頻電磁波穿透萃取物質。 取100ml 濾液 甘草酸 濕品 以6000rpm 3.5M硫酸50ml 靜置室溫24hrs 100ml 離心15mins 離心15mins

14 微波爐 加入硫酸3.5M50ml後沉澱

15 甘草酸之提取率 左邊是脹果甘草所作結果，右邊是光果甘草 由圖可知脹果甘草蒸餾法提取率較高，光果甘草室溫提取法及微波提取法差不多

16 脹果甘草標準偏差分析表 有機溶劑 萃取法 1.6 2.4 3.2 1.1 2.1 ±0.9 44.4 室溫提取法 4.1 0.4 1.3
提取率(%) 萃取方式 第一次 第二次 第三次 第四次 平均AVG 標準偏差 STD 相對標準偏差RSD 有機溶劑 萃取法 1.6 2.4 3.2 1.1 2.1 ±0.9 44.4 室溫提取法 4.1 0.4 1.3 ±1.6 77.7 蒸餾法 4.8 2.3 5.5 4.2 ±1.4 32.9 微波提取法 1.0 3.0 3.6 2.5 ±1.1 45.2 此表可知脹果甘草中蒸餾法相對標準偏差較其三者低，因此其重複性較高。

17 光果甘草標準偏差分析表 有機溶劑 萃取法 0.8 0.9 1.1 0.1 1.0 ±0.4 60.0 室溫提取法 3.2 3.0 2.3
提取率(%) 萃取方式 第一次 第二次 第三次 第四次 平均AVG 標準偏差 STD 相對標準偏差RSD 有機溶劑 萃取法 0.8 0.9 1.1 0.1 1.0 ±0.4 60.0 室溫提取法 3.2 3.0 2.3 2.4 2.7 16.2 蒸餾法 1.2 5.0 1.3 2.1 ±1.9 90.4 微波提取法 2.6 2.2 2.5 ±0.2 10.1 此表可知光果甘草室使用溫微波提取法相對標準偏差最小，因此其重複性較高。

18 蒸餾法與文獻比較 圖表顯示蒸餾法所做的結果與文獻類似，以統計學來看最後的errorbar有重疊，因此無顯著差異，但以平均來看仍有差異。所做的結果脹果甘草優於文獻。 參考自潘學軍、劉會洲、賈光和、陳家鏞（2001），從甘草中提取甘草酸不同提取方法的比較。過程工程學報，第1卷第1期： 頁。

19 微波提取法與文獻比較 圖表顯示所作結果與文獻有顯著差異，因此推測是功率不夠或著是微波的時間不夠，使結果低於文獻，之後會以提高功率及時間來做改善。 參考自潘學軍、劉會洲、賈光和、陳家鏞（2001），從甘草中提取甘草酸不同提取方法的比較。過程工程學報，第1卷第1期： 頁。

20 結論 提取率 效率 重複性 （脹果甘草） （光果甘草） 有機溶劑 萃取法 室溫提取法 蒸餾法 微波提取法
結果顯示脹果適用蒸餾，光果適用微波。在未來假設能以此方法提高甘草酸提取率，藉此來加入野戰口糧，以達提升戰場上士兵之續戰力及存活率之目標。

21 報告完畢

22 問題回覆 層析的定義： 1. 固定相 - 固體或液體, 吸附樣品 2. 移動相 - 氣體或液體,將樣品帶離固相

23 問題回覆 HPLC工作流程： 管柱 (固定相) 數據處理系統 檢測器 廢液 進樣器 泵 溶劑 (流動相)

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