嗜酸性粒细胞计数 P36 临床检验基础教研室 程杨艳
嗜酸粒细胞起源于骨髓多能造血干细胞 ,为髓系干细胞分化而来的嗜酸粒细 胞祖细胞( CFU-EO )所产生。 功能: ( 1 )微弱的吞噬作用,基本无杀菌力; ( 2 )主要作用是限制过敏反应的作用: ①抑制嗜碱性粒细胞和肥大细胞; ②吞噬其释放颗粒; ③分泌组胺酶破坏组胺; ( 3 )参与蠕虫的免疫反应。
嗜酸性粒细胞的趋化因子其来源 ①从嗜碱性粒细胞和肥大细胞来源的组胺; ②从补体来的 C 3a C 5a ; ③从致敏淋巴细胞来的嗜酸性粒细胞的趋化 因子; ④从寄生虫来的嗜酸性粒细胞的趋化因子; ⑤某些细菌来的嗜酸性粒细胞的趋化因子; ⑥从肿瘤来的嗜酸性粒细胞的趋化因子。 趋化因子 ↑→E↑
嗜酸性粒细胞绝对数 =WBC×E% 其中 E% (嗜酸性粒细胞分类的比值) 不准,进推算的绝对值误差较大; 故为达到准确计数嗜酸性粒细胞的目的 ,须做嗜酸性粒细胞直接计数。
[ 原理 ] 用嗜酸粒细胞稀释液将血液稀释一 定倍数,同时使红细胞和大部分其 他白细胞被破坏,并将嗜酸粒细胞 着色,充入计数板,低倍镜下计数 2 个计数池共 10 个大方格内的嗜酸粒细 胞数,经换算求得每升血液中的嗜 酸粒细胞数。
[ 器材 ] ①采血针、干棉球、 75% 酒精棉球 ②试管、吸量管 ③计数板、显微镜
[ 试剂 ] 特点: ①为低渗溶液,可使红、白细胞溶解破 裂; ②含对 E 的保护剂,如乙醇、乙二醇、 丙酮; ③并使 E 颗粒染色而被识别。
下列试剂任选一种 : 1. 伊红 - 丙酮稀释液 2. 溴甲酚紫稀释液 3.Hinkelman 稀释液 4. 乙醇 - 伊红稀释液 5. 皂素 - 甘油稀释液 6. 固绿稀释液
[ 操作 ] 0.38ml 稀释液+ 20µl 血 → 混匀 →RBC 溶 解后 → 混匀 → 充池( 2 个) → 静置 2- 5min→ 镜下计数 10 个大方格 E 的数目 。 [ 计算 ] E/L=10 大方格 E 的数 ×20×10 6 =0.02N×10 9 /L [ 参考值 ] ×10 9 /L
[ 注意事项 ] 1. 本实验必须在 1h 内完成,否则细胞被 破坏,结果偏低; 2. 及时混匀,不能过分振荡,以免细胞 破坏; 3. 统一采血时间,以免受生理变化;
4. 注意与 N 区别,以免结果偏高; ( N 着色浅,颗粒小) 5. 含乙醇、丙酮等保护剂会挥发,应注 意其变化; 6. 溴甲酚紫在酸性或中性时为橙黄色, 在碱性显蓝,故器具要防酸。
[ 方法学评价 ] 1 .显微镜计数法 所需设备简单,简便易行; 求得的嗜酸粒细胞绝对值,比用白 细胞总数和分类计数间接推算出的来 的准确。 但重复性差,精确性不如血液分析 仪法。 所采用的稀释液多种,其优缺点见表 2-47
2 .血液分析仪法 五分类血液分析仪是目前最有效 的嗜酸粒细胞计数的筛检方法, 分 析速度快,准确性较高。 但仪器昂贵;当仪器提示嗜酸粒 细胞增多伴直方图或散点图异常时, 应采用显微镜直接计数法复检。
[ 临床意义 ] 1. 生理变化 肾上腺皮质激素的作用 : ①阻止骨髓释放 E; ②使血中 E 到组织中去。 1 )劳动、寒冷、饥饿、各精神刺激等 → 交感神经兴奋 →ACTH↑→ 肾上腺皮质 激素 ↑ →E↓ 。
2 )年龄: 5 岁以下 ( ) ×10 9 /L 5-15 岁 ( ) ×10 9 /L 3 )日间变化: 上午波动大,下午较恒定。 与糖皮质激素脉冲式分泌有关 。
2. 病理变化 1 )增高:轻度 ( ) ×10 9 /L 中度 ( ) ×10 9 /L 重度 >5×10 9 /L 见于: ①寄生虫病:可达 10% 或更多。 ②变态反应性疾病:支气管哮喘、药物 过敏反应、荨麻疹。 ③某些皮肤病:如湿疹、银屑病等。
④血液病:如慢性粒细胞白血病、真性 红细胞增多症、多发性骨髓瘤、脾切 除术后等;嗜酸性粒细胞白血病;霍 奇金病。 ⑤某些恶性肿瘤:如肺癌伴嗜酸性粒细 胞增高。 ⑥某些传染病:感染期嗜酸性粒细胞常 减低,猩红热急性期嗜酸性粒细胞增 高。恢复期暂时性增高。
2 )减少: ①长期使用肾上腺皮质激素; ②急性传染病早期:如伤寒、副伤寒; ③大手术、烧伤。
3 )其他临床应用 (1) 观察急性传染病的预后 (2) 观察手术和烧伤患者的预后 (3) 测定肾上腺皮质功能和垂体前叶功 能: 促肾上腺皮质激素( ACTH )使肾上腺 皮质产生肾上腺皮质激素,造成嗜酸 性粒细胞减低。
直接刺激肾上腺皮质:嗜酸性粒细胞直 接计数后,随即肌注或静脉滴注 ACTH 25mg 。 间接刺激肾上腺皮质:注射 0.1% 肾上腺 素 0.5ml ,刺激垂体前叶分泌 ACTH 。
结果判断: ①正常情况:比注射前应减低 50% 以上。 ②肾上腺皮质功能正常,而垂体前叶功能不 良者:则直接刺激时减低 50% 以上,间接 刺激时不减低或减低很少。 ③垂体功能亢进:直接和间接刺激均可减低 80% ~ l00% 。 ④垂体前叶功能正常,而肾上腺皮质功能不 良者:直接和间接刺激减低均不到 50% 。 艾迪生 (Addison) 病,平均仅减低 4% 。