第十三章 精液斑检验

精斑检验的目的与其他物证检验目的一致： 为案件的侦查和审理提供线索和证据 精斑检验的目的与其他物证检验目的一致： 为案件的侦查和审理提供线索和证据 需解决的问题：斑痕是否为精斑？若是精 斑，确定精斑的个体来源。 需解决的问题：斑痕是否为精斑？若是精 斑，确定精斑的个体来源。

一、 概述 一、 概述 精液性状 精液性状 乳白色半透明的粘稠液体，有特殊的异嗅味。 乳白色半透明的粘稠液体，有特殊的异嗅味。 弱碱性（ Ph ）比重（ ）渗透压 弱碱性（ Ph ）比重（ ）渗透压 凝固酶（精囊腺） 凝固酶（精囊腺） 5min 内凝固成较冻状 5min 内凝固成较冻状 中性蛋白酶及纤溶酶（前列腺） 中性蛋白酶及纤溶酶（前列腺） 20-30min 内液化成稀薄半流动体状 20-30min 内液化成稀薄半流动体状

成分构成 有形成分 精 子 呈蝌蚪状 长约 50-70ul ， 头部 ---- 正面观椭圆形，侧面观呈梨形 头部 ---- 正面观椭圆形，侧面观呈梨形 顶体 ---- 覆盖精子头部前 2/3 帽状结构 顶体 ---- 覆盖精子头部前 2/3 帽状结构 含有多种水解酶，穿透卵子 含有多种水解酶，穿透卵子 精子细胞核 -- 染色质，各种大小空泡 精子细胞核 -- 染色质，各种大小空泡 体部 ---- 呈圆柱状，内有中心原纤维轴丝 体部 ---- 呈圆柱状，内有中心原纤维轴丝 尾部 ---- 动力的来源，线粒体很多 尾部 ---- 动力的来源，线粒体很多 细胞成分 睾丸细胞、白细胞、柱状上皮细胞 细胞成分 睾丸细胞、白细胞、柱状上皮细胞 其他固体 卵磷脂小体 前列腺 其他固体 卵磷脂小体 前列腺 精 胺 结晶 ---- 精 胺 结晶 ---- 玻璃小体、色素颗粒、脂肪球 玻璃小体、色素颗粒、脂肪球 精 浆 是由男性各附属性腺分泌物组成，水分 90% ，其他 10% 其中有多种蛋白质（包括酶）、黄素、胆碱、精胺等 其中有多种蛋白质（包括酶）、黄素、胆碱、精胺等 精囊腺 50~80% 呈碱性， 精囊腺 50~80% 呈碱性， 含两种主要：果糖和凝固酶，及磷酸胆碱、黄素 含两种主要：果糖和凝固酶，及磷酸胆碱、黄素 前列腺 15~30% 呈酸性，透明状， 前列腺 15~30% 呈酸性，透明状， 含有酸性磷酸酶、纤溶酶、中性蛋白酶、精胺 含有酸性磷酸酶、纤溶酶、中性蛋白酶、精胺 尿道球腺和尿道旁腺 5% 呈浅灰白色的液体 尿道球腺和尿道旁腺 5% 呈浅灰白色的液体

化学组成 化学组成 蛋白质 精浆蛋白浓度约为 35~55mg/ml ， 蛋白质 精浆蛋白浓度约为 35~55mg/ml ， 略低于血清蛋白的平均浓度（ 72mg/ml ） 略低于血清蛋白的平均浓度（ 72mg/ml ） 血清共同蛋白 Tf 、 PI 、 ORM 、 GC 血清共同蛋白 Tf 、 PI 、 ORM 、 GC 精液特有蛋白 1966 γ — 精浆 蛋 白（ γ — Sm ） 精液特有蛋白 1966 γ — 精浆 蛋 白（ γ — Sm ） 1967 β — 精浆 蛋 白（ β — Sm ） 1967 β — 精浆 蛋 白（ β — Sm ） α 2 — 精浆糖蛋白（ α 2 — SGP ） α 2 — 精浆糖蛋白（ α 2 — SGP ） 1978 β — 微精浆蛋白（ β — MSP ） 1978 β — 微精浆蛋白（ β — MSP ） 1978 前列腺特异蛋白（ P30 ） 1978 前列腺特异蛋白（ P30 ） 蛋白酶 水解酶的含量最丰富 蛋白酶 水解酶的含量最丰富 某些酶活性水平很高： 某些酶活性水平很高： 酸性磷酸酶等酶活性较其他组织酶活性高 50~100 酸性磷酸酶等酶活性较其他组织酶活性高 50~100 某些酶活性保持较久： 某些酶活性保持较久： 肌酸磷酸激酶 (CPK) 酸性磷酸酶 (ACP) 一年以上 肌酸磷酸激酶 (CPK) 酸性磷酸酶 (ACP) 一年以上

二、精斑的肉眼检验 二、精斑的肉眼检验 目 的：发现可疑精斑、确定所在位置及分布，以便准确取材，提高 阳性检出绿。 目 的：发现可疑精斑、确定所在位置及分布，以便准确取材，提高 阳性检出绿。 记 录：精斑的分布情况、数目、位置、形状、大小、颜色及光泽等 记 录：精斑的分布情况、数目、位置、形状、大小、颜色及光泽等 精斑 部位 人体 --- 犯罪嫌疑人或被害人的外阴或大腿内侧、衣裤 精斑 部位 人体 --- 犯罪嫌疑人或被害人的外阴或大腿内侧、衣裤 现场 --- 被褥、毛巾、手纸、草席 现场 --- 被褥、毛巾、手纸、草席 外观 形状多呈不规则地图状，身体表面可成白色鳞片痂状 外观 形状多呈不规则地图状，身体表面可成白色鳞片痂状 深色布料 --- 浓厚精斑成灰白色状斑迹 深色布料 --- 浓厚精斑成灰白色状斑迹 浅色布料 --- 精斑多呈黄白色地图状。边缘较深 浅色布料 --- 精斑多呈黄白色地图状。边缘较深 软质载体 --- 触之有硬感 软质载体 --- 触之有硬感 辅助检查：陈旧或水洗过的精斑，可疑借助紫外光进行观察 辅助检查：陈旧或水洗过的精斑，可疑借助紫外光进行观察 现象 --- 紫外光下精斑呈银白色荧光，边缘呈浅紫兰色 现象 --- 紫外光下精斑呈银白色荧光，边缘呈浅紫兰色 原因 ---- 精斑中含有黄素，在紫外线下发荧光 原因 ---- 精斑中含有黄素，在紫外线下发荧光 意义 --- 阳性可能是精斑，（阴道分泌物、唾液、鼻涕、乳 意义 --- 阳性可能是精斑，（阴道分泌物、唾液、鼻涕、乳 汁等都可发荧光） 汁等都可发荧光）

三、精斑的预备试验 三、精斑的预备试验 酸性磷酸酶检验 酸性磷酸酶检验 实验依据：精斑中的酸性磷酸酶含量高：浓度 540~4000u/ml ，约是于其 他脏器的 100 倍；精斑中酸性磷酸酶稳定性好：抗腐败 --- 常温保存 10 年、 夏季室温 8 周腐败；耐高热 ℃加热 30min 仍可检出活性 实验依据：精斑中的酸性磷酸酶含量高：浓度 540~4000u/ml ，约是于其 他脏器的 100 倍；精斑中酸性磷酸酶稳定性好：抗腐败 --- 常温保存 10 年、 夏季室温 8 周腐败；耐高热 ℃加热 30min 仍可检出活性 检验方法： 检验方法： 磷酸苯二钠试验 磷酸苯二钠试验 原理： 原理： 方法：取可以斑痕 0.1*0.1 ，置于试管内，加反应缓冲液 3~4 滴， 方法：取可以斑痕 0.1*0.1 ，置于试管内，加反应缓冲液 3~4 滴， 37 度温箱内 5~30min ，然后加等量的显色缓冲液 37 度温箱内 5~30min ，然后加等量的显色缓冲液 结果：阳性 --- 立即出现红色 ---- 检材可能是精斑 结果：阳性 --- 立即出现红色 ---- 检材可能是精斑 阴性 --- 出现橙色 --- 检材不是精斑或酸性磷酸酶被破坏 阴性 --- 出现橙色 --- 检材不是精斑或酸性磷酸酶被破坏 特点：灵敏度高 倍稀释的精液仍可以出现阳性反应 特点：灵敏度高 倍稀释的精液仍可以出现阳性反应 磷酸萘酚 - 固蓝 B 试验 磷酸萘酚 - 固蓝 B 试验 原理： 原理： 方法：取少量检材置于白瓷板上，滴加试剂 1~2 滴 方法：取少量检材置于白瓷板上，滴加试剂 1~2 滴 结果：阳性 ----1min 以内出现深紫红色反应为 结果：阳性 ----1min 以内出现深紫红色反应为 阴性 ---- 不呈色或呈淡紫红色 阴性 ---- 不呈色或呈淡紫红色 特点：灵敏度不好，阴道液液可能呈阳性反应。 特点：灵敏度不好，阴道液液可能呈阳性反应。

其他检验：碘化碘钾结晶试验 方法：卵磷脂析出胆碱 + 碘 ---- 过碘胆碱结晶 方法：卵磷脂析出胆碱 + 碘 ---- 过碘胆碱结晶 特点：灵敏度不高 1 ： 400 ，特异性不好 [ 褐色或褐 红色针状、菱形结晶 ] 特点：灵敏度不高 1 ： 400 ，特异性不好 [ 褐色或褐 红色针状、菱形结晶 ]苦味酸结晶试验 方法：精素 ---- 分解产物 + 苦味酸 --- 精素苦味酸结 晶 方法：精素 ---- 分解产物 + 苦味酸 --- 精素苦味酸结 晶 特点：只有人的精液出现 — 种属鉴别 [ 青黄色有 折光的十字、柱、星结晶 ] 特点：只有人的精液出现 — 种属鉴别 [ 青黄色有 折光的十字、柱、星结晶 ]锌检出法 方法：双硫腙法、吡啶基偶氮萘酚法 方法：双硫腙法、吡啶基偶氮萘酚法 特点：特异性非常高，阳性几乎是精斑 特点：特异性非常高，阳性几乎是精斑

四、精斑的确证试验 四、精斑的确证试验 1 精子检出法 1 精子检出法 精子是认定精斑最简便、最可靠的方法。不需要特殊的一起和试剂。 精子是认定精斑最简便、最可靠的方法。不需要特殊的一起和试剂。 直接镜检：精子存活时间受多种因素的影响 直接镜检：精子存活时间受多种因素的影响 男性 前列腺液 — 有利于精子 男性 前列腺液 — 有利于精子 女性 阴道液 — 酸性 — 不利于精子 女性 阴道液 — 酸性 — 不利于精子 精 囊 液 — 有害于精子 精 囊 液 — 有害于精子 宫颈液 — 碱性 --- 保护精子 宫颈液 — 碱性 --- 保护精子 检材处理：浸泡：检材 1.5×1.5, 剪碎，置于试管中，加约 0.5ml 生理盐水， 室温 2 小时，然后 4 度冰箱过夜。可用玻璃棒搅拌或挤压检材。可用 5%~10% 的氨液浸泡检材 ---- 陈旧检材，眼水不易分离精子 检材处理：浸泡：检材 1.5×1.5, 剪碎，置于试管中，加约 0.5ml 生理盐水， 室温 2 小时，然后 4 度冰箱过夜。可用玻璃棒搅拌或挤压检材。可用 5%~10% 的氨液浸泡检材 ---- 陈旧检材，眼水不易分离精子 染色方法：单染 染色方法：单染 复染 苏木素 - 伊红（ HE ） 复染 苏木素 - 伊红（ HE ） 检出时限：活体 检出时限：活体 尸体 尸体 检 出 率： 24h 精子检出率为 50% ， 48h 仅为 10% 。 检 出 率： 24h 精子检出率为 50% ， 48h 仅为 10% 。

2. 免疫学检验 制备抗人精液特殊成分的抗血清，做沉淀反应 抗血清 抗 人 精 液 抗 体 --- 具有器官特异和种属 特异性 与其他体液交叉发应 — 吸收消除（乳、唾、血清） 灵敏度： 2000 以上阳性可以肯定精斑，对无精子症 更具价值 抗前列腺特异性抗原抗体 --- 具有高度的种属特异性 和器官特异性 抗前列腺特异性抗原抗体 --- 具有高度的种属特异性 和器官特异性 是目前确证人类精斑常用试剂，最理想的标 记、灵敏度和采用方法有关 是目前确证人类精斑常用试剂，最理想的标 记、灵敏度和采用方法有关 方法：酶联免疫吸附实验，胶体金法

3 生化学检验 乳酸脱氢酶 -X ：位于 LDH3 和 4 之间，由精 子产生 亮氨酸氨肽酶：存在于精浆，滴加试剂呈粉 红色

五、精斑的个人识别 五、精斑的个人识别 1 精斑的 ABO 血型检测 1 精斑的 ABO 血型检测 中和试验：原理 精斑中的水溶性 ABH 血型物质，能 特异地与相应的抗体结合，使抗体与指示红细胞的 凝集能力减低或消失。 中和试验：原理 精斑中的水溶性 ABH 血型物质，能 特异地与相应的抗体结合，使抗体与指示红细胞的 凝集能力减低或消失。 方法 方法 注意： 1 血清效价 4 倍 注意： 1 血清效价 4 倍 2 中和时间至少 30min 2 中和时间至少 30min 3 检材浑浊 — 煮沸 — 离心 3 检材浑浊 — 煮沸 — 离心 ELISA 法：灵敏度高（ ~10 -5 ） --- 防止交叉污染 ELISA 法：灵敏度高（ ~10 -5 ） --- 防止交叉污染 DNA 分型： DNA 分型：

2 精斑的血清型检测 2 精斑的血清型检测 可检出的系统： Gm ， Km ， GC ， ORM 可检出的系统： Gm ， Km ， GC ， ORM 3 精斑的酶型检测 3 精斑的酶型检测 其中 PGM1 和 Fu 较稳定， PGM1 最常用 其中 PGM1 和 Fu 较稳定， PGM1 最常用

4 精斑的 DNA 分析 4 精斑的 DNA 分析 适用范围：即使精液中没有精子，由于精液中含有少量 睾丸细胞、上皮细胞等都可应用。 适用范围：即使精液中没有精子，由于精液中含有少量 睾丸细胞、上皮细胞等都可应用。 分析方法： PCR 技术 ----STR 、 VNTR 分析方法： PCR 技术 ----STR 、 VNTR 特殊应用：可以利用父系亲属的血样进行排除推测 特殊应用：可以利用父系亲属的血样进行排除推测 不受女性成分的干扰，并可推测犯罪嫌疑人的数 目 不受女性成分的干扰，并可推测犯罪嫌疑人的数 目 结果评估：用于排除同一性，没有认定同一性的作用。 结果评估：用于排除同一性，没有认定同一性的作用。 统计分析： Y 染色体上的各基因座在遗传时是连锁的， 以单倍型遗传，不可独立计算。 统计分析： Y 染色体上的各基因座在遗传时是连锁的， 以单倍型遗传，不可独立计算。