第三章 消毒与灭菌 教学目的： 掌握常见消毒药品；熟练掌握消毒、灭 菌技术； 教学重点： 消毒、灭菌技术

在制种过程中，消毒与灭菌是不可缺少的环 节。消毒是指采用物理或化学的方法杀死物 体表面或环境中的部分有害微生物；灭菌是 指用物理或化学的方法杀死物体中或环境中 的一切微生物，也就是说灭菌的物体不再有 任何活的微生物存在。

消 毒 一、 常用消毒药剂及使用方法 1. 高锰酸钾 强氧化杀菌剂，常用 0.1 － 0.2% 的溶液 （取高锰酸钾 1g, 加水 1000ml ）对床架、器 皿、用具和皮肤表面消毒。随用随配

2. 过氧化氢 氧化型消毒剂。市售品为 30% 或 3% 水溶液，常用 1% 浓度消毒器皿、用具和皮肤。 组织分离时用 20% 溶液浸种菇 1 － 3 分钟。 3. 漂白粉 常用 2 － 5% 的漂白粉溶液（取 2 － 5g 漂白粉加水 100ml ）洗刷菇房的墙壁、床架、地面和用具等表面 消毒 4. 甲醛 强还原性杀菌剂。市售品含量为 37 － 41% 喷雾：按 1 ： 5 的比例配成水溶液。

5. 石炭酸 5% 水溶液消毒，配制时先用热水溶化再加入所 需水量。 6. 来苏儿（煤酚皂） 常用 1 － 3% 的溶液擦洗或用于手、用具的浸泡 （ 2 分钟）或空间喷雾。 7. 乙醇 70 － 75% 手、接种工具等表面消毒

8. 新洁尔灭 原溶液为 5% ，常用 0.25% 浓度对手和器具作 表面消毒。 9. 石灰（ Cao) ，熟石灰 Ca(OH) 2 压盖 10. 多菌灵 产品多为 5% 或 25% 可湿性粉剂，常用于培养 基拌料消毒，添加量因品种而异。 11. 甲基托布津 常见剂型为 50% 、 70% 可湿性粉剂，生产上 用 70% 甲基托布津稀释 1000 － 1500 倍喷雾菇床消 毒。

二、消毒方法 （一）空间消毒法 1. 化学药剂喷雾消毒法： 2% － 3% 的来苏水、 2 － 5% 漂白粉、 0.25% 多菌灵或新 洁尔灭、 5% 石炭酸、 1000 － 1500mg/L 甲基托布津、 10% 澄清石灰水等 2. 化学药剂熏蒸消毒法： A. 甲醛－高锰酸钾氧化熏蒸法 1m 3 空间用 10ml 甲醛加 7g 高锰酸钾熏蒸.

B. 气雾焚烧熏蒸消毒法： 1m 3 空间用 2g 菇保 1 号等气雾消毒剂熏蒸 3. 物理消毒法 A. 紫外线消毒 一般用 30 － 40W 的紫外灯管，有效作用距离为 1.5 － 2m 照射 分钟以上。 B. 臭氧发生器 把空气中的 O2 变成 O3 ， O3 具有强氧化作用。

（二）物体表面消毒法： 1 － 3% 的来苏儿溶液擦洗或用于手、用具的 浸泡（ 2 分钟）。 70 － 75% 酒精手、接种工具、菇体表面等表 面擦拭消毒 0.1 － 0.2% 的高锰酸钾溶液对床架、器皿、用 具和皮肤表面消毒。 0.25% 浓度对手和器具作表面消毒。 （三）培养料消毒 1. 药物消毒 0.2% 多菌灵、 0.1% 克霉灵拌料消毒

2. 生、熟石灰 2-5% 石灰拌料 3. 巴氏消毒 法国微生物学家、化学家路易士、巴斯德首创的 低温消毒法。加热到 62 ℃，经过 30 分钟，以杀死不耐高 温的物质中的微生物的消毒法。

灭菌 一、灭菌方法 ( 一 ) 火焰灭菌法 利用酒精灯火焰外焰球形区域烧灼灭菌 适用于能耐高温而不被破坏的器物如接种 工具、培养皿、试管口或菌种玻璃瓶口，也 可用于菇体等。

（二）干热灭菌 利用加热的高温（ 160 － 170 ℃，维持 2 小时）空气 使菌体蛋白变性从而达到灭菌。 适用于玻璃器皿、器械、棉塞、滤纸等 （三）高压湿热蒸汽灭菌： 适用于培养基、玻璃器皿及用具等的灭菌 手提式高压蒸汽灭菌锅的构造和使用： 1. 构造： （ 1 ）锅体：一般以 2KW 电热管作内热源，直接浸在锅 内水中，通电后产生蒸汽。另附有支架，以承受内锅体。

（ 2 ）内锅：由铝楹嵌接而成，用于承放待灭物品。底 附有活动的栅格板，以防回流冷凝水将物品弄湿。其边 上还有一用于插排气管的槽。 （ 3 ）锅盖：上有木把手、安全阀、放气阀、压力表 （ 4 ）其它：橡皮垫圈、旋钮等 2. 使用方法： （ 1 ）加水：往锅里加水与支架齐平 或稍高出支架。 （ 2 ）装锅：往锅中放入培养基试管。

（ 3 ）封锅、接通电源：盖好锅盖，对角线拧紧螺旋。 关闭放气阀和安全阀，接通电源，加热。 （ 4 ）排冷空气：当压力达到 0.5 Kg/cm 2 （ 0.05Mpa) 时，打开放气阀放冷气。 （ 5 ）升温升压：压力回零后，关闭放气阀，继续加热 加压。 （ 6 ）保温保压：当压力达到 0.1Mpa 时计时，使压力保 持在 0.1 － 0.15Mpa 之间，维持 20-30min 。 （ 7 ）断电降温、出锅：灭菌完毕后，撤掉电源，压力 自然降到 “ 0 ” 时打开锅盖，取出试管。

（四）常压湿热灭菌：用土蒸锅等进行灭菌 适用于原种、栽培种的培养基和熟料栽培的培养 料的灭菌操作方法： a 加水至八分满 b 装锅，要留有空隙。瓶呈品字形，袋呈井字形 c 关闭锅门，关严。 d 点火升温 e 加热到大气从气孔上冒出时开始计时。 8-10 时。 f 闷一夜，待物料降温后出锅。 g 夏季装锅，装料要迅速，以防培养料酸败，影响灭 菌效果