学习情境四 注射剂的质量检测

任务一 维生素C注射液中 可见异物的检查与含量测定 任务二 盐酸普鲁卡因注射液的 特殊杂质检查与含量测定 任务三 甲硝唑注射液的质量检测

任务一 维生素C注射液中 可见异物的检查与含量测定 一、注射剂的质量检测 注射剂是指药物与适宜的溶剂或分散介质制成的供 注入体内的溶液、乳状液或混悬液，及供临用前配制或 稀释成溶液或混悬液的无菌粉末或浓溶液的无菌制剂。

注射剂的分类： （1）注射液 （2）注射用无菌粉末 （3）注射用浓溶液

（1）注射液 分类： A、溶液型注射液 B、乳状液型注射液 C、混悬型注射液

（1）注射液 给药途径： 静脉注射 脊椎腔注射 肌内注射 皮下注射 皮内注射

（1）注射液 注射液(静脉输液 ): 药物制成的供注射入体内用的无菌溶液型注射液、乳状液注射液或混悬注射液。 用于肌内注射、静脉注射、静脉滴注等。供静脉滴注的大体积（一般不小于100mL）

注射液 制备 由原料药溶解或分散于适宜的溶剂中，配成一定的浓度，经滤过、灌封、灭菌而制成。 组成 主药、溶剂、附加剂

注射剂的溶剂 水性溶剂： 最常用的水性溶剂是注射用水、0.9%氯化钠溶液、5%葡萄糖溶液或其他适宜的水溶液； 注射用油： 常用为注射用大豆油； 其他非水性溶剂： 主要有乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇和二甲基乙酰胺

（2）注射用无菌粉末(简称粉针) 是指药物制成的供临用前用适宜的无菌溶液配制成澄清溶液或均匀混悬液的无菌粉末或无菌块状物。 可用适宜的注射用溶剂配制后注射 可用静脉输液配制后静脉滴注。

分类： 1. 将原料精制成无菌粉末，并在无菌条件下直接进行分装 2.将药物制成灭菌水溶液，进行无菌分装，然后进行冷冻干燥，在无菌条件下密封制成注射用粉末，也称冻干品。 根据生产工艺条件和药物性质不同，将冷冻干燥法制得的粉末，称为注射用冷冻干燥制品，而用其他方法如无菌溶剂结晶法或喷雾干燥法制得的称为注射用无菌分装产品。

（3）注射用浓溶液 注射用浓溶液是指药物制成的供临用前稀释供静脉滴注用的无菌浓溶液 由药物和溶剂组成。

一、注射剂的质量检测 首先观察注射液的色泽和可见异物，检测步骤依 据《中国药典》的规定，一般按照以下步骤进行 1. 注射剂的检测步骤 首先观察注射液的色泽和可见异物，检测步骤依 据《中国药典》的规定，一般按照以下步骤进行 性状→鉴别→杂质检查→PH值及常规检查 （包括生物学检查）→含量测定

一、注射剂的质量检测 2. 注射剂的常规检查 . (1)注射液的pH值测定 . (2)注射液的装量或最低装量 . (3)无菌粉末的装量差异 . (4)可见异物 . (5)不溶性微粒检查 . (6)热原或细菌内毒素检查 . (7)无菌检查等

（1）pH值 注射剂应具有与血液（血液的pH值是7.4）相等或相近的pH值，一般控制在4～9的范围。 pH值测定是注射剂检查的重要指标之一。

（2）装量 适用范围：注射液及注射用浓溶液 《中国药典》规定方法： 1.注射液的标示装量为不大于2mL者取供试品5支，2mL以上至50mL者取供试品3支； 2.开启时应注意避免损失，将内容物分别用相应体积的干燥注射器及注射针头抽尽，然后注入经标化的量具内（量具的大小应使待测体积至少占其额定体积的40%）内，在室温下检视。

注意 1.测定油溶液和混悬液的装量时，应先加温摇匀，再用干燥注射器及注射针头抽尽，同前法操作，放冷，检视。 2.每支装量均不得少于其标示量。 3.除另有规定外，供多次用量的注射液，每一容器的装量不得超过10次注射量，增加的装量应能保证每次注射用量。

（3）最低装量 适用范围： 标示装量为50mL以上的注射液及注射用浓溶液按照最低装量检查法检查，

检查方法 取供试品5个（50mL以上者3个） 开启时应注意避免损失，将内容物分别用相应体积的干燥并预经标化的注射器（包括注射针头）抽尽（50mL以上者可倾入预经标化的干燥量筒中） 黏稠液体倾出后，将容器倒置15分钟，尽量倾净。 读出每个容器内容物的装量，并求其平均装量，均应符合规定。 如有1个容器装量不符合规定，则另取5个（或3个）复试，应全部符合规定。

（4）装量差异 适用范围： 注射用无菌粉末，应符合表7-3中规定。 凡规定检查含量均匀度的注射用无菌粉末，可不再进行装量差异检查。

（4）装量差异 检查方法: 1.取供试品5瓶（支） 2.除去标签、铝盖，容器外壁用乙醇洗净，干燥 3.开启时注意避免玻璃屑等异物落入容器中 （4）装量差异 检查方法: 1.取供试品5瓶（支） 2.除去标签、铝盖，容器外壁用乙醇洗净，干燥 3.开启时注意避免玻璃屑等异物落入容器中 4.分别迅速精密称定 5.倾出内容物，容器可用水或乙醇洗净 6.在适宜条件下干燥后，再分别称定每一容器的重量 7.求出每1瓶（支）的装量与平均装量。 每瓶（支）中的装量与平均装量相比较，应符合规定。如有1瓶（支）不符合规定，应另取10瓶（支）复试，均应符合规定。

（5）可见异物 可见异物是指存在于注射剂中，在规定条件下目视可以观测到的不溶性物质，其粒径或长度通常大于50μm。 注射剂应在符合药品生产质量管理规范（GMP）的条件下生产，产品在出厂前应采用适宜的方法逐一检查并同时剔除不合格产品。

检查方式 自检: 自检是在生产过程中的检查，应逐支（瓶）进行。 抽检: 抽检是药检部门进行的检查。 实验室检测时应避免引入可见异物。 当供试品溶液的容器（如不透明、不规则形状容器等）不适于检测，需转移至专用玻璃容器中时，均应在100级的洁净环境（如层流净化台）中进行。

可见异物检查法 A.灯检法 一般常用灯检法， B.光散射法 灯检法不适用的品种（如用有色透明容器包装或液体色泽较深的品种）应选用光散射法。

A.灯检法 灯检法应在暗室中进行。 A为带有遮光板的日光灯光源；照度可在1000lx～4000lx范围内调节； B为不反光的黑色背景； C为白色不反光的白色背景和底部（供检查有色异物）； D为反光的白色背景（指遮光板内侧）。

A.灯检法 检查人员条件: 要求远距离和近距离视力测验，均应为4.9或4.9以上（矫正后视力应为5.0或5.0以上）； 应无色盲。

检查方法: 除另有规定外，取供试品20支（瓶），除去容器标签，擦净容器外壁，轻轻旋转和翻转容器使药液中存在的可见异物悬浮（注意不使药液产生气泡），必要时将药液转移至洁净透明的专用玻璃容器内；置供试品于遮光板边缘处，在明视距离（指供试品至人眼的距离，通常为25cm），分别在黑色和白色背景下，手持供试品颈部使药液轻轻翻转，用目检视。

无色注射液的检查，光照度应为1000lx～1500lx；

结果判定: 溶液型静脉用注射液、注射用浓溶液 20支（瓶）供试品中，均不得检出可见异物。如检出可见异物的供试品不超过1支（瓶），应另取20支（瓶）同法检查，均不得检出。 混悬型注射液 20支（瓶）供试品中，均不得检出色块、纤毛等可见异物。

溶液型非静脉用注射液、注射用无菌粉末和供注射用无菌原料药 按国务院药品监督管理部门的有关规定执行。 不得发现有肉眼能见到的白块、纤维等异物，抽检的不合格率不得超过5%。 如检查超过规定，则加倍抽样复检，复检结果不超过规定，仍按合格判断。 贮存期的不合格率不得超过7.5％。

B.光散射法 当一束单色激光照射溶液时，溶液中存在的不溶性物质使入射光发生散射，散射的能量与不溶性物质的大小有关。 此方法通过对溶液中不溶性物质引起的光散射能量的测量，并与规定的阈值比较，以检查可见异物。

仪器装置和检测原理: 仪器由旋瓶装置、激光光源、图像采集器、数据处理系统和终端显示系统组成，并配有自动上瓶和下瓶装置。

检查方法: 除另有规定外，从仪器提供的菜单中选择与供试品规格相应的测定参数，并根据供试品瓶体大小对参数进行适当调整后，将供试品检测3次。 凡仪器判定有1次不合格者，用灯检法确认。 本法适用有色透明容器包装或液体色泽较深等灯检法检查困难的品种不用灯检法确认。

结果判定： 除另有规定外，取供试品20支（瓶），除去不透明标签，擦净污渍，置仪器上瓶装置上，启动仪器并记录检测结果，应不得检出可见异物。 如经确认检出可见异物的不超过1支（瓶），另取20支（瓶）同法复试，均不得检出。

（6）不溶性微粒的检查 本法系在可见异物检查符合规定后，用以检查溶液型静脉用注射剂中不溶性微粒的大小及数量。 可见异物检查由于采用目视检查的方法只能检出50µm以上的微粒，较小的则难以检出。 《中国药典》规定供静脉滴注用注射液（装量为100mL以上者），需检查不溶性微粒。

检查方法种类 A.光阻法 一般先采用光阻法（一法）； B.显微计数法 除另有规定外，不溶性微粒检查法当光阻法测定结果不符合规定或供试品不适于用光阻法测定时，应采用显微计数法（二法）进行复验或测定，应符合规定，并以显微计数法的测定结果作为判定依据。

注意 本检查法不适用于乳液型、混悬型等注射液。 不溶性微粒检查的试验操作环境要求应不得引入微粒，测定前的操作应在层流净化台中进行。 玻璃仪器和其他所需的用品均应洁净、无微粒。 本法所用微粒检查用（水或其他适宜溶）剂，使用前须经不大于1.0μm的微孔滤膜滤过。

A.光阻法 检查方法: ① 标示量为25mL或25mL以上的静脉用注射液 除另有规定外，取供试品（不少于3个容器），用水将容器外壁洗净，小心翻转20次，使溶液混合均匀，超声处理（80～120W）30s脱气或静置适当时间脱气后，小心开启容器，直接将容器置于取样器上，不加搅拌，依次由仪器直接抽取每个容器中的全部溶液，分别依法测定，弃去第一个容器的读数，取后续测定结果的平均值，即得。

② 标示量为25mL以下的静脉用注射液 除另有规定外，取适当数量的供试品（折合总量不少于25mL），用水将容器外壁洗净，小心翻转20次，使溶液混合均匀，超声处理（80～120W）30s脱气或静置适当时间脱气，小心开启容器，直接将容器置于取样器上，不加搅拌，依次由仪器直接抽取每个容器中的全部溶液，分别依法测定，弃去第一个容器的读数，取后续测定结果的平均值，即得。

③ 供静脉注射用无菌粉末及注射用浓溶液 除另有规定外，取供试品（不少于3个容器），用水将容器外壁洗净，小心打开瓶盖，加入适量微粒检查用净化水或适宜的溶剂，小心盖上瓶盖，缓慢振摇使内容物溶解（注射用浓溶液直接操作），超声处理（80～120W）30s脱气或静置适当时间脱气，小心开启容器，直接将容器置于取样器上，不加搅拌，依次由仪器直接抽取每个容器中的全部溶液，分别依法测定，弃去第一个容器的读数，取后续测定结果的平均值，即得。

结果判定: ① 标示装量为100mL或100mL以上的静脉用注射液 除另有规定外，每1mL中含10μm以上的微粒不得超过25粒，含25μm以上的微粒不得超过3粒。 ② 标示装量为100mL以下的静脉用注射液、静脉注射用无菌粉末及注射用浓溶液 除另有规定外，每个供试品容器中含10μm以上的微粒不得过6000粒，含25μm以上的微粒不得过600粒。

B.显微镜计数法 结果判定 ①标示装量为100mL或100mL以上的静脉用注射液 除另有规定外，每1mL中含10μm以上的微粒不得超过12粒，含25μm以上的微粒不得超过2粒。 ②标示装量为100mL以下的静脉用注射液、供静脉注射用无菌粉末及注射用浓溶液 除另有规定外，每个供试品容器中含10μm以上的微粒不得超过3000粒，含25μm以上的微粒不得超过300粒。

（7）热原或细菌内毒素 热原检查系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。 细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。

热原是指药品中含有的能引起体温升高的杂质。 《中国药典》规定，供静脉滴注用的注射剂以及容易感染热原的品种，按各品种项下的规定，照热原检查法或细菌内毒素检查法进行检查，应符合规定。 热原和细菌内毒素检查均为控制引起体温升高的杂质，检查时选其中一种即可。

（8）无菌检查 无菌是检查注射剂以及其他要求无菌的品种是否无菌的一种方法。 无菌检查应在洁净度100级单向流空气区域内进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物感染。 检查中应取相应溶剂和稀释剂同法操作，作为阴性对照。

《中国药典》中规定的无菌检查法有两种方法： ①直接接种法，适用于非抗菌作用的供试品； ②薄膜过滤法，适用于有抗菌作用的供试品。

3、注射剂含量测定及结果计算 ＊注射剂含主药量大，附加成分不干扰测定者，可直接蒸干后，用重量法或按原料药相同的方法测定。如酸碱滴定法测定碳酸氢钠注射液；亚硝酸钠法测定盐酸普鲁卡因注射液。 ＊注射剂含主药量较小，若采用测定原料药的方法，所消耗的供试品量太多时，可选用微量、灵敏的方法，如马来酸氯苯那敏、盐酸利多卡因的原料药采用非水溶液滴定法测定，而马来酸氯苯那敏注射液、盐酸利多卡因注射液则分别采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定。 ＊若附加成分对主药的含量测定有干扰时，应排除干扰后再进行测定。

含量测定的结果计算: 注射剂的含量测定结果用实际含量占标示量的百分比来表示，计算公式为：

（1）用滴定分析法测定

例1乳酸钠注射液的含量测定 精密量称本品（标示量为20mL:2.24g）1mL，置锥形瓶中，在105℃干燥1h，加冰醋酸15mL与醋酐2mL，加热使溶解，放冷，加结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1011mol／L）滴定至溶液显蓝绿色，消耗10.26mL，并将滴定结果用空白试验校正，消耗0.03mL。每1mL高氯酸滴定液（0.1mol／L）相当于11.21mg的乳酸钠（C3H5NaO3）。《中国药典》二部（2005年版）规定本品含乳酸钠应为标示量的95.0％～110.0％。试计算本品是否符合规定的含量限度。

解： 答：本品含量为103.8％，符合《中国药典》二部（2005年版）的含量限度。

（2）用紫外-可见分光光度法测定

【例2】 马来酸氯苯那敏注射液的含量测定 精密量取本品（标示量为lmL:10mg）2mL，置100mL量瓶中，加盐酸溶液（稀盐酸1→100mL）稀释至刻度，摇匀。精密量取稀释液5mL，置50mL量瓶中，用同一浓度盐酸溶液稀释至刻度，摇匀。取该溶液置lcm厚的石英吸收池中，以相同盐酸溶液为空白，在264nm波长处测得吸光度为0.432，按C16H19C1N2·C4H4O4的吸收系数（）为217计算，《中国药典》二部（2005年版）规定本品含马来酸氯苯那敏应为标示量的95.0％～110.0％。试计算本品是否符合规定的含量限度。

答：本品含量为99.5％，符合《中国药典》二部（2005年版）的含量限度。

二、维生素C注射液中可见异物的检查与含量测定 结构与性质: L－抗坏血酸

性质 （1） 溶解性 1、易溶于水 2、水溶液呈酸性

（2） 还原性 二烯醇结构 二烯醇结构 二酮基结构

有活性 有活性 无活性

酸性 （3） 一元酸 C3－OH的 pKa = 4.17 C2－OH的 pKa = 11.57

（4） 光学活性 手性C（C4、C5） * L(+)－抗坏血酸 活性最强 *

与碱反应 （5） 水解性

1.可见异物 定义 可见异物是指在规定条件下目视可以观测至的不溶性物质，其粒径或长度通常大于50μm 灯检法 光散射法 （1）检查方 法 最常用

可见异物检查装置: 伞棚式检查灯 1白色底板 2 黑色背景 3 日光灯

可见异物检查——灯检法: 检查方法 取供试品20支(瓶)，除去容器标签，擦净容器外壁，轻轻旋转和翻转容器使药液中存在的可见异物悬浮(注意不使药液产生气泡)，置供试品于遮光板边缘处，在明视距离(指供试品至人眼的距离，通常为25cm)，分别在黑色和白色背景下，手持供试品颈部使药液轻轻翻转，用目检视。

可见异物检查——灯检法 （2）结果判定: 溶液型静脉用注射液、注射用浓溶液20支(瓶)供试品中，均不得检出可见异物。如检出可见异物的供试品超过1支(瓶)，应另取20支(瓶)同法检查，均不得检出。 混悬型注射液 20支(瓶)供试品中，均不得检出色块、纤毛等可见异物。

2.含量测定 测定方法 (1) 碘量法 原理 指示剂 淀粉指示液

H+

方法 精密量取本品适量（约相当于维生素C 0.2g），加水15ml与丙酮2ml，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4ml与淀粉指示液1ml，用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色并持续30秒钟不褪。每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6

讨论 酸性环境 稀 HAC 减慢VitC被O2氧化速度 新沸冷H2O 赶走水中O2 立即滴定 减少O2的干扰 加丙酮 减少亚硫酸氢钠干扰

任务二 盐酸普鲁卡因注射液的 特殊杂质检查与含量测定

结构与性质: 芳伯氨基 酯键,易水解 脂烃胺 Cl－反应

A.芳伯氨基 可用重氮化-偶合反应鉴别和亚硝酸钠滴定法测含量 B.酯键 易水解 引入特殊杂质对氨基苯甲酸

C.脂烃胺侧链 弱碱性 可与生物碱沉淀试剂发生 沉淀反应进行鉴别 可用非水碱量法测定含量 可与酸成盐 D.溶解性 游离碱易溶于有机溶剂 其盐易溶于水

一、特殊杂质检查 对氨基苯甲酸 -CO2 [O] 有色 溶血

本品干燥时较稳定，但其水溶液 易水解和氧化，故中国药典规定其注 射液应检查对氨基苯甲酸 杂质来源 中间体、水解产物 杂质来源 中间体、水解产物 检查方法 TLC（杂质对照品法）

对氨基苯甲酸的检查： 照薄层色谱法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于含有羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14: 1:1:4）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100mL，加冰醋酸5mL制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。

二、含量测定 亚硝酸钠滴定法 中国药典指示终点方法 永停法

二、含量测定 结果计算：

任务三 甲硝唑注射液的质量检测 性质与结构： 甲硝唑结构

性质 （1）有硝基，在锌粉、盐酸作用下，还原生成氨基，可发生重氮化或重氮化-偶合反应； （2）为含氮的杂环化合物，与三硝基苯酚反应生成黄色盐，熔点150℃； （3）有紫外吸收。

鉴别： （1）取本品适量（约相当于甲硝唑l0mg），加氢氧化钠试液2ml微温，即得紫红色溶液；滴加稀盐酸使成酸性即变成黄色，再滴加过量氢氧化钠试液则变成橙红色。

（2）取本品适量（约相当于甲硝唑 0.1g），置水浴上蒸干，残渣加硫酸溶液（3→100）4ml，应能溶解；加三硝基苯酚试液10ml，放置后即生成黄色沉淀。

检查： （1）pH值 应为4.5-7.0 （2） 氯化物 精密量取本品适量(约相当于甲硝唑50mg)，加水至50m1，加2%糊精溶液5ml，碳酸钙0.1g与荧光黄指示液5-8滴，摇匀，用硝酸银滴定液(0.lmol/L)滴定至浑浊液由黄绿色变为微红色。消耗硝酸银滴定液(0.lmol/L)应为13.2-14.6m1或35.1-38.8m1(250m1：500mg)。

（3）装量 （4）可见异物 （5）不溶性微粒 （6）细菌内毒素 （7）无菌

含量测定： 精密量取本品适量，加盐酸溶液(9→1000)定量稀释制成每1ml中约含甲硝唑 12.5μg的溶液，照紫外-可见分光光度法(附录ⅣA)，在277nm的波长处测定吸光度，按C6H9N3O3的吸收系数( )为377nm计算，即得。

含量测定结果计算： 式中 A为供试品溶液测得的吸收度； 为甲硝唑的百分吸收系数； l 为供试品溶液液层的厚度（cm）； V样为供试品的取样体积（mL）； m标示值为甲硝唑注射液的标示值（g / mL）