Septin9甲基化检测 结直肠癌筛查技术

目录 肿瘤发病流行病学概述 结直肠癌的筛查和预防 SEPTIN9 – 甲基化检测及其在临床上的应用 DNA甲基化检测技术及送检流程

中国结直肠癌发病率与死亡率呈急剧上升趋势 2000-2012年中国结直肠癌发病率与死亡率 近十年发病率逐年攀升 2012年新发约40万人 2012年死亡约19.5万人 2012年增速约为4.2%，远超2%的国际平均水平 高居恶性肿瘤发病率的第三位，死亡率的第四位 [1] 2012 中国肿瘤登记年报

结直肠癌早期筛查对5年存活率的影响 早期筛查可提高结直肠癌5年生存率 结直肠癌患者在诊断时，60-70%为中 晚期，早期诊断的比例仅为11.8%。 有效的早期筛查和干预治疗可使癌症病 死率下降60% 病人5年生存率 早期筛查 73% 不做早期筛查 46% 李世荣, 大肠癌早期诊断的基本策略.继续医学教育, 2007. 21(9): p. 22-25 Li, Y., et al. "Detection of colorectal cancer by DNA methylation biomarker SEPT9: past, present and future.." Biomarkers in Medicine8.5(2014):755-69.

肿瘤的预防和筛查 WHO：三分之一可以预防，三分之一可以治愈，三分之一可以改善症状、延长生命 （1985） 肿瘤预防的关键：肿瘤的检测和筛查 癌症可防、可治： 癌前阶段：可实现近100%预防 早期癌症：可以实现80%治愈率 晚期癌症：仅30%人活过5年。

结直肠癌的筛查方式 便潜血（FOBT) 检测 检测粪便中的微量血液的存在 检测灵敏度高 目前临床上广泛用于消化道疾病包括肿瘤的筛查、监控等 缺点：任何引起消化道出血的疾病甚至含铁量高的食物均可引起假阳性 结肠镜检查 临床结直肠癌诊断的金标准，直接获取肠道病变标本 通过病理检测对结直肠癌标准 缺点：侵入性高，接受度低，一般用于诊断不用于筛查

结直肠癌的筛查方式 血清肿瘤标志物是指和肿瘤发病相关的蛋白质 无创快速检测 临床上用于肿瘤的监控，也用于肿瘤的初步诊断 缺点：检测灵敏度低，器官特异性、肿瘤特异性差 医学影像通过占位效应发现肿瘤 检测便捷无创 临床上应用于肿瘤发病全程 缺点：检测灵敏度低，一般不能判定良恶性，有些检测辐射极大

理想的结直肠癌筛查技术 易采样，无创无辐射无痛苦 灵敏度高，最好能够发现早期癌前阶段 特异性高，具有肿瘤特异性 对设备要求低，适于推广 苏州为真Septin9甲基化检测

甲基化——5`甲基胞嘧啶

基因启动子区甲基化 效应：基因表达下降或失活，蛋白水平下降

甲基化是肿瘤发生的早期事件 Epigenetic changes resulting in transcriptional silencing of cancer genes are among the most frequently discovered evens in human tumor samples and altered chromain structure in 5'-regulatory region. Hypermethylation of gene promoter associated CpG islands occurs early during colorectal cancer development, suggesting its utility as a molecular marker for both early detection and monitoring progression of the disease. - Glockner, S.C., et al., Cancer Research, 2009, 69:4691-9 在基因启动子区域CpG岛区域发生的甲基化事件，通常发生在结直肠癌的早期，因此可以把甲基化作为结直肠癌早期诊断和监测疾病进展的分子标记物。

Septin 简介 Septin 是一类广泛分布于除植物外所有真核生物中具有GTPase 活性的保守骨架蛋白基因家族，与细胞分裂有关。 在人类，其由 14 个家族成员组成，分别命名为 SEPT1-14，其中SEPT9 定位于 17q25.3，含有 17 个外显子，编码 Septin9 蛋白其有多个亚型（如 Septin 9-vl、v2、v3、v4，），与染色体分离、DNA 修复、迁移、凋亡等细胞功能有关。 在结直肠癌中，SEPT9-v2 启动子区的 CPG 岛高度甲基化。 Li, Y., et al. "Detection of colorectal cancer by DNA methylation biomarker SEPT9: past, present and future.." Biomarkers in Medicine8.5(2014):755-69.

Septin9基因启动子gamma区域的甲基化导致该基因的表达发生改变 血液 游离甲基化片段和肿瘤细胞 游离DNA 血红细胞 肿瘤细胞

Septin9 DNA在大肠癌中的甲基化

甲基化标志物筛查 对超过60种候选标志物进行研究 从中筛查出三种有潜力的甲基化标志物 Septin9具有最高的特异性和灵敏度 Catherine, Lofton Day, et al. "DNA methylation biomarkers for blood-based colorectal cancer screening.." Clinical Chemistry:54.:2(2008):414-423.

为真Septin9甲基化试剂盒灵敏度和特异性 在北京协和、北京肿瘤、浙江省肿瘤医院、浙江大学附属第一医院、浙江大学附属第二医院等六家标杆医院入组了1243例肿瘤患者 样本 有效检测 阳性个数 阳性率 CRC 436 346 79.35% 癌前病变 58 10 18.97% 癌前疾病 71 7 11.27% 良性疾病 87 9 10.34% 健康人 224 4.02% 干扰样本 84 0.00% 其他癌症 233 33 14.95% 检测436例有效病理确诊结直肠癌患者中，共发现Septin9甲基化阳性患者346例，检出率（灵敏度）79.35%, 阴性符合率（特异性）91.02%

为真Septin9甲基化试剂盒灵敏度和特异性

临床应用 结直肠癌的筛查和检测 结直肠癌辅助诊断 结直肠癌的监控 疗效评估 复发监控 诊断流程

临床应用和科室 结直肠癌的筛查和早期发现（能够发现I/II期肿瘤） 体检科 肛肠外科、普外科、消化外科 消化内科、内科 检验科

检测比较 Septin9甲基化 影像 肿瘤标志物 活检/腔镜 基因多态性 灵敏度 高 低 中低 / 中高 特异性 低-中 金标准 发现肿瘤时间 癌前；早期 中晚期 早期-晚期 易感性风险 临床应用 肿瘤筛查和监控 肿瘤监控 肿瘤检测和诊断 易感性评估 侵入性 无 部分有辐射 检测便捷度 便捷 较便捷 较复杂，需医师操作 需测序等技术，较复杂

Septin9甲基化检测优势 发现早期结直肠癌（I/II），极大提高患者生存几率 检测灵敏度和特异性性优于现有结直肠癌筛查手段（大便隐血、肿瘤标志物等） 检测无创快捷无辐射，适于多次检测

推荐人群 1）一般风险人群： 大于40岁人群 2）高风险人群： 结直肠癌家族史和家族性腺瘤性息肉病,大于20岁人群。 大便隐血阳性检测者 慢性病如糖尿病、肝硬化、胃溃疡、肠息肉、肥胖症等患者 体重突然降低者；出现不知名原因发烧、疼痛者、体表有肿块者 饮食失衡者（如喜食腌制食物、肉类等）；工作压力较大的白领等 生活习惯有待改善者如吸烟人群、熬夜族等 2）高风险人群： 结直肠癌家族史和家族性腺瘤性息肉病,大于20岁人群。 大便隐血阳性检测者 炎症性肠病多年不愈、病变范围较广的溃疡性结肠炎 化放疗治疗效果评估，术后检测。

检测设备和耗材 Septin9检测试剂盒 荧光定量PCR仪 不一定是Roche 480

检测流程 DNA提取及亚硫酸盐转化 5小时 整个结果在8小时内完成 5mlEDTA抗凝外周血 或者2ml血浆 使用EDTA抗凝管采集外周血

Thanks! 苏州为真生物医药科技有限公司