Edmond S K Ma博士 香港养和医院病理科 FISH 在多发性骨髓瘤中的应用 Edmond S K Ma博士 香港养和医院病理科 BTG 2013

议 程 回顾HKS&H的经验 CG异常：东西方结合 诊断应用 BTG 2013

在多发性骨髓瘤中的CG异常 常规细胞遗传学30% 间期FISH ~ 90% Drach J et al Cancer Res 1995; 55: 3854 – 9 原因: 骨髓血浆细胞比例低 浆细胞增殖指数低 易位可能是形态的隐藏如t（4；14）（P16；q32） BTG 2013

预后意义 BTG 2013

预后意义 Avet-Loiseau et al, Blood 2007; 109: 3489 - 95 黑: No 13q-, t(4;14)和17p- 和 低 B2M 蓝: 阳性的 13q-, No t(4;14) 和 17p- 和 低 B2M 绿: No 13q-, t(4;14) 和 17p- 和 高 B2M 红: 阳性的 13q-, No t(4;14) 和17p- 和高 B2M 灰: 任何一个 t(4;14) of 17p-, 和低 B2M 粉: 任何一个 t(4;14) of 17p-, 和高 B2M Avet-Loiseau et al, Blood 2007; 109: 3489 - 95

国际骨髓瘤工作组共识 危险分层（panel2） Blood 2011; 117: 4696 – 4700 细胞遗传学检测染色体13和13q缺失, t(4;14) 和del(17p), 通过FISH检测的 t(4;14), t(14;16) 和 del(17p) 重复复发 标准的研究工作(panel 3) Blood 2011; 117: 4701 – 5 标准的中期细胞遗传学和 FISH检测：t(4;14), t(14;16) 和 del(17p) BTG 2013

议程 回顾 HKS&H 经验 CG异常：东西方结合 诊断应用 BTG 2013

多发性骨髓瘤中FISH 以同一天处理为目标 骨髓涂片检查 如浆细胞＜5%则排除 通过CD138免疫磁珠分选细胞 (Miltenyi Biotec) 样品浆细胞＜50% 针对> 90%纯度 预分析变量：样本充足，新鲜度，浆细胞百分比 BTG 2013

CD138免疫磁珠分类 前 后 BTG 2013

CD138免疫磁珠分选 前 后 BTG 2013

FISH探针 13q, t(4;14), 17p, CEP 5/9/15 t(4;14), t(14;16), 17p, CEP 5/9/15 最近的分类 t(4;14)(p16;q32) (IGH/FGFR3 DF探头 ) t(14;16)(q32;q23) (IGH/MAF DF探头 ) TP53/CEP17 CKS1B / CDKN2C（P18）放大/缺失 BTG 2013

Avet-Loiseau H et al, J Clin Oncol 30: 1949 – 52, 2012 1q的增加：多发性骨髓瘤新的高危CG标记 来源cytocell网站 红 (1q) = CKS1B 绿(1p) = CDKN2C (p18) Avet-Loiseau H et al, J Clin Oncol 30: 1949 – 52, 2012 BTG 2013

FISH 分析 分析至少100细胞 两名观察员 实验室临界值 平均值 + 3SD正常骨髓为参照 阳性阈值水平 Ross FM et al 2012; Avet-Loiseau H et al 2012 10%：融合或分裂探针 20%：数值异常 30%：染色体1q增加 40%：del（17p）/ p53 BTG 2013

HKS&H数据摘要 n = 105 例 从 2011年4月 – 2012年12月 男性: 女性 = 73 : 32 从 2011年4月 – 2012年12月 男性: 女性 = 73 : 32 中位年龄 = 62 岁 (范围: 42 – 88) 中位浆细胞百分比 = 53% 范围 5 – 95% 细胞分类工作在 44/105 (42%) i.e. < 50% 浆细胞 BTG 2013

HKS&H数据摘要 CG异常 频率 (%) 计数 +ve细胞的范围 13q- 24% 5/21 60 – 90% t(4;14) 16% 17/105 10 – 90% t(14;16) 3% 2/80 50 – 80% 17p- 6% 6/105 20 – 80% 1q 增加 42% 5/12 40 – 90% 多染色体 5/9/15 36% 31/87 20 – 95%

HKS&H数据摘要 次要FISH异常 6/17 t(4;14)+ve表现出非典型的（1y1o1g）信号模式 多染色体 / 放大 4, 14 或 16 常见 单体性染色体 / 缺失 17, 4, 14 or 16 偶尔 BTG 2013

议 程 回顾 HKS&H 经验 CG异常：东西方结合 诊断应用 BTG 2013

各研究中FISH异常的频率 参 考 t(4;14) t(14;16) t(11;14) del(17p) del(13q) 超二倍体 MYC Fonseca 2003 (ECOG) 12.7% 4.6% 15.8% 10.7% 54.2% NA Avet-Loiseau 2007 (IFM) 14% 21% 11% 48% 39% 13% Huang S-Y 2005 (Taiwan) 6.8% 34.1% ~20% Tan 2010 (Singapore) 14.9% 5.4% 18.9% 20.3% 29.7% Lai Y-Y 2012 (China) IgH基因易位57.6% 34.7% 60.4% 49% Yu H 2011 (China) 22.2% ~50% 45.8% HKS&H 经验 16% 3% 6% 24% 36% 42%

各研究中FISH异常的频率 参 考 t(4;14) t(14;16) t(11;14) del(17p) del(13q) 超二倍体 MYC Fonseca 2003 (ECOG) 12.7% 4.6% 15.8% 10.7% 54.2% NA Avet-Loiseau 2007 (IFM) 14% 21% 11% 48% 39% 13% Huang S-Y 2005 (Taiwan) 6.8% 34.1% ~20% Tan 2010 (Singapore) 14.9% 5.4% 18.9% 20.3% 29.7% Lai Y-Y 2012 (China) IgH 基因易位 57.6% 34.7% 60.4% 49% Yu H 2011 (China) 22.2% ~50% 45.8% HKS&H 经验 16% 3% 6% 24% 36% 42%

各研究中FISH异常的频率 参考 t(4;14) t(14;16) t(11;14) del(17p) del(13q) 超二倍体 MYC Fonseca 2003 (ECOG) 12.7% 4.6% 15.8% 10.7% 54.2% NA Avet-Loiseau 2007 (IFM) 14% 21% 11% 48% 39% 13% Huang S-Y 2005 (Taiwan) 6.8% 34.1% ~20% Tan 2010 (Singapore) 14.9% 5.4% 18.9% 20.3% 29.7% Lai Y-Y 2012 (China) IgH 基因易位 57.6% 34.7% 60.4% 49% Yu H 2011 (China) 22.2% ~50% 45.8% HKS&H 经验 16% 3% 6% 24% 36% 42%

Agenda 回顾 HKS&H 经验 CG异常：东西方结合 诊断应用 BTG 2013

IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤? 女/57 白种人 骨病变 Hb 11.3 g/dL WBC 6.7 x 109/L 血小板 285 x 109/L RFT 正常 副蛋白 IgM-κ 10.4 g/L

IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤? CD138 CD20 Kappa PAX-5 BTG 2013

IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤? t(11;14) 阳性 MYD88 L256P 阴性 结论 CD20+ IgM 多发性骨髓瘤 细胞周期蛋白 D1 BTG 2013

IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤? 女/68 中国人 肾病综合症, 肾脏损伤 IgG-κ 副蛋白增加趋势 2010年首次BM:不是多发性 骨髓瘤 外周血 BTG 2013

浆细胞骨髓瘤伴t(11;14)(q13;q32) 约占20%多发性骨髓瘤 细胞周期蛋白D1 过表达 淋巴浆细胞形态（40–50%） CD138+ 19+ 20+ PAX5+细胞周期蛋白D1+ 主要是 IgG型, IgA型 和轻链型骨髓瘤 80% IgM型多发性骨髓瘤伴t（11；14） 但CD20-ve相比之下t（11；14）非IgM型浆细胞骨髓瘤 BTG 2013

IgG副蛋白：多发性骨髓瘤还是华氏巨球蛋白血症? Trephine x 100 BM BM Trephine x 600 BTG 2013

IgG 型异常蛋白：多发性骨髓瘤还是华氏巨球蛋白血症 CD20 CD138 Kappa ISH Lambda ISH BTG 2013

IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤? t(11;14) -ve MYD88 L256P +ve 结论: IgG WM T  C BTG 2013

疾病进展 男/72 中国人 轻链型多发性骨髓瘤 达到CR 10个月后浆细胞白血病突然 复发 获得 del(17p) 诊断为阴性 诊断 复发 BTG 2013

致 谢 Prof. C S Chim Mr. Anthony Wong Ms. Candy Wang 相关临床医生 BTG 2013