开放实验 切花保鲜和采后生理 厦门大学生命科学学院

一.实验目的意义 要求学生能运用已学的知识进行实验设计 能根据自己的设计独立进行实验操作 能独立解决实验中出现的问题 能对实验现象和实验结果做出合理的解释 能对实验数据进行科学的统计分析 提高学生独立科研能力

二.实验原理 1.切花保鲜技术 1.1采收： 花期采收、蕾期采收（香石竹、月季、唐菖蒲、郁金香、菊花） 剪取时间：清晨或傍晚 花枝留取高度：取决于吸水力，强高弱低 1. 2采后预处理 采收→ 浸水4h → 水中切除花梗5cm → 捆扎→ 预处理液处理→ 不透明塑料袋包裹→ 装入有孔纸箱→ 运输、贮藏 预处理液： 香石竹：10％蔗糖，1000 ug/L硝酸银溶液浸泡10min 月季：2％蔗糖、300 ug/L 8-羟基喹啉溶液（或其硫酸盐、柠檬酸盐 溶液）浸泡10min 唐菖蒲、郁金香、菊花： 1000 ug/L硝酸银溶液处理10min

1. 4延长花期 插瓶前花枝处理： 1. 3催花 催花液：蔗糖、杀菌剂、植物激素（或生长调节剂） 香石竹： 7％蔗糖、25ug/L GA 、300 ug/L 8-羟基喹啉柠檬酸盐溶液 月季： 2％蔗糖、25ug/L GA 、300 ug/L 8-羟基喹啉柠檬酸盐溶液 唐菖蒲、郁金香：5％蔗糖、25ug/L GA 、300 ug/L 8-羟基喹啉柠檬酸盐溶液 1. 4延长花期 插瓶前花枝处理： 水下剪切：草本剪斜面；粗花枝或木本花切口剪十字型或多开 裂缝或敲碎 热烫法，灼伤法，温水浸泡法，末端击碎法，冷藏法，消毒法

日常用营养液配方：(水最好存放一昼夜或用蒸馏水） 1.5 营养保鲜法 营养物质：蔗糖、果糖、葡萄糖、无机盐等 杀菌防腐剂：VitC 、阿司匹林、水杨酸、高锰酸钾、硫酸铜、食盐、 硫磺、明矾、琥珀酸、丁醇、酒精、苯甲酸等 乙烯抑制剂：硝酸银、硫代硫酸银、醋酸银、硝酸钴、氨基氧乙酸、 硝酸钾（钙） 、高锰酸钾等 pH 3~4：用柠檬酸调节 可适当添加激素和氨基酸 日常用营养液配方：(水最好存放一昼夜或用蒸馏水） 阿司匹林3片，VitC2片，溶于1L水中 糖20g, 8-羟基喹啉02~0.3g，溶于1L水中 糖10g，盐10g，溶于1L水中 糖20g，硫酸铜5g，溶于1L水中 1.6 日常管理： 叶片不能浸在水中，每2~3天换水一次，茎部不新鲜切口要切除 摆放：不要放在成熟瓜果附近，阳光直射和烟熏的地方

2. SOD测定原理 检测SOD常用间接的化学方法 酶单位/样品量 = 在反应系统中，存在 产生O2．体系（如核黄素照光或黄嘌呤-黄嘌呤氧化 　在反应系统中，存在 　产生O2．体系（如核黄素照光或黄嘌呤-黄嘌呤氧化　　 　　　　　　　　　　酶等） 　被氧化或还原后可检测的物质（如NBT,　Cytc或　 　　　　　　　邻苯三酚，肾上腺素等) 　　　通过光谱吸收，测定被氧化或还原后物质的变化,从而计算出SOD的活性。 　　　氮蓝四唑（NBT）光化还原的方法常用于植物组织的SOD活性测定和SOD同工酶带显示。 酶单位/样品量 =

3. 丙二醛测定原理 丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温条件下，可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川（3,5,5－三甲基恶唑2,4－二酮），其最大吸收波长在532 nm。可采用分光光度法计算MDA含量。 直线回归法： Y532＝－0.00198＋0.088D450 双组分分光光度计法 ： C1(mmol/L)=11.71D450 C2(umol/L)=6.45(D532-D600)-0.56D450

三.实验设计 选材 营养液的选择和配制（药品提前开出并上交） 实验操作设计及注意事项 生理指标（SOD和MDA）的测定（取样要科学） 材料的选择和处理 实验组和对照组的设计 生理指标（SOD和MDA）的测定（取样要科学） 原理的理解 所需仪器药品及药品配制 详细的操作过程 数据的整理和分析 结论

选 材

四.实验安排 四人一组自行组合、设计、选材 实验四周（保鲜液更换、形态观察、SOD和MDA测定） 数据统计分析，实验总结 课堂汇报 根据所提意见对实验总结进行修改，撰写实验报告

五.结果与分析 定期记录形态色泽变化和花的落瓣情况。 对测得的生理指标要进行科学计算和统计分析。 针对实验结果做出比较和总结分析，确定保鲜效果。

六.注意事项 6.1 保鲜过程中的注意事项 选材要选取新鲜、健康的材料 保鲜液配制注意试剂的理化特性及试剂间是否存在化学反应 6.1 保鲜过程中的注意事项 选材要选取新鲜、健康的材料 保鲜液配制注意试剂的理化特性及试剂间是否存在化学反应 准确计算试剂用量，避免浪费 仪器使用时注意操作正确 定期更换保鲜液，注意保鲜液的pH变化和染菌情况 测生理指标时注意采样的科学性

6.2 SOD测定注意事项 用PBS研磨样品(其它样品保存在冰箱),离心后上清液为粗酶液(冰箱中保存) 研磨时 PBS不要超过4.5mL 样品研磨完后配反应液,加样过程中注意避光保存 要做预实验确定酶液加入量，酶液加入量以抑制率在35%-65%为好 分装反应液,在每支试管中加入适量粗酶液(5-200uL),在316光照10-30min. 注意空白对照和最大照光管的设置.

6.3 测定MDA时的注意事项 测定MDA时会受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm处，532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA-TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532、 450nm处的消光值，所以在蔗糖、TBA与MDA显色反应中需要有一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为100～300ug/gDW，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3+的终浓度为0.5nmol/L。

七. 思考题 通过本次实验你体会最深的是什么？从中你学到了什么？ 对开放性实验你有何好的建议？

八.开放实验总结 1.查资料,设计实验(确定材料,选保鲜液)。 2.取材(新鲜、健壮，生理状态相近) 3.配制保鲜液 试剂配制：溶解性、反应沉淀、禁止配母液 药品称量：保持桌面和天平整洁，注意腐蚀性 4.日常管理要保持实验室的干净、整洁 注意仪器的开关，正常使用和维护 5.SOD和MDA测定原理要清楚。采样时取0.1-0.5g, 注意采样的科学性。 6.保鲜结果

7.实验报告撰写的科学性和规范性 条理不够清楚, 照抄照搬现象严重 实验设计表述要一目了然，关键细节简单提及 实验现象描述最好采用比较列表的形式,不要记流水帐 结果计算要采用标准模式 酶活单位：U/mg Protein, U/g•NW 或 U/g•FW 图表不规范 结论太武断