细胞工程实验 齐迎春 Email yingchunqi@mail.hzau.edu.cn 谢婷婷 Email tingtingxie@yahoo.cn
实验总体要求 实验学时数：20学时 总体要求： 理解并观察细胞全能性。 在实验操作上掌握细胞工程技术中的核心，无菌操作技术以及通过一定的实验技巧控制培养的技术。 通过实验观察、结果分析初步学会本领域的实验设计、实验分析及其完整实验论文的撰写。
实验课注意事项 按照课表安排时间进行实验，不得随意调课； 实验课不得缺课； 实验过程必须有详细记载； 遵守实验室管理，爱护实验仪器和一切用具； 每次实验结束后，个人使用的物品须自己清洗干净； 班长负责安排值日生做好清洁卫生。
实验课总体安排 实验1 实验技术概览 培养基的配制 实验2 实验4 实验5 愈伤组织诱导 植物脱毒 茎尖剥离 实验3 分化及其植株再生 人工种子制备 与论文撰写 植物脱毒 茎尖剥离 实验3 实验技术概览 植物离体 操作技术
实验成绩的记录方法 平时操作和实验记录记做平时成绩 实验论文撰写记做期中成绩 以上两个成绩占《细胞工程》课程的40%
一、培养基配制
愈伤组织诱导培养基配制 培养基配方： MS + BA 2mg/L + NAA 2mg/L 附加：蔗糖20g/L，琼脂8g/L
培养基母液配制 按附表配方配制MS培养基母液：大量元素配20×，微量元素和其它成分配制成200×，母液贮存于4℃的冰箱中。
MS培养基母液配制 成 分 1L母液用量（mg/l） 大量元素（ 20×） NH4NO3 KNO3 CaCl2·2H2O 成 分 1L母液用量（mg/l） 大量元素（ 20×） NH4NO3 KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O KH2PO4 33000 38000 8800 7400 3400 微量元素（ 200×） KI H3BO3 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O Na2MoO4·2H2O CuSO4·5H2O CoCl2·6H2O 166 1240 4460 1720 50 5 维生素（200×） 烟酸 VB1 VB6 100 20 肌醇 （200 ×） 2000 铁盐*（200×） FeSO4·7H2O Na2·EDTA·7H2O 5560 7460 甘氨酸 400
实验操作 每4个学生一组，配制500ml愈伤组织诱导培养基 向容量瓶中顺序加入培养基母液： 大量元素（20X） 微量元素（200X） BA和NAA （250X） 加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水(约400ml)，加入10g蔗糖后搅拌使其溶化，用0.5N的NaOH和0.5N的HCl调整pH至5.8-6.0。 加入4g琼脂，将烧杯置于电炉上，搅拌加热使琼脂完全溶化，然后用蒸馏水定容至终体积500ml，继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中。 分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力1.1kg/cm2，灭菌时间20min.左右。灭菌后的培养基置于无菌室保存备用。 25ml 2.5ml 各2.5ml 各2.0ml
影响培养基凝固的因素 pH 琼脂的用量 琼脂溶化程度
本实验注意事项 所有用品（量筒/三角瓶/瓷杯/注射器）使用前无须清洗，用完以后及时清洗 大量元素（25ml）用量筒量取 其他试剂（2.5ml or 2.0ml）使用移液管，注意一种溶液用一根移液管，不可混用以防溶液交叉污染 琼脂要充分煮沸，要求边煮边用玻棒不断搅动，以防琼脂糊底，煮沸3-5次直至溶液透明 培养基分装使用注射器，每瓶分装18ml，注意不要粘在瓶口，如不小心粘上，应用草纸檫拭干净 新皮筋封口只缠两圈
观察污染等各种情况并洗瓶（按组打分）