铜绿假单胞菌 蒋月婷
非发酵菌(Nonfermentative Bacilli) 定义---- 一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利 用葡萄糖的需氧或兼性厌氧的革兰阴 性无芽胞杆菌
发酵型 氧化型 产碱型
概述 非发酵菌：G-b 葡萄糖O/－ 需O2或兼性厌O2 动力+ /－ 氧化酶+ /－ 分类： 假单胞菌属 产碱杆菌属 不动杆菌属 黄杆菌属 分类： 假单胞菌属 产碱杆菌属 不动杆菌属 黄杆菌属 莫拉杆菌属 窄食单胞菌属 金氏杆菌属 艾肯菌属 土壤杆菌属 丛毛单胞菌属 等
非发酵菌分离率
假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群 rRNAⅠ群/假单胞菌属 rRNAⅡ群/伯克菌属 rRNAⅢ群/丛毛单胞菌属、食酸菌属 rRNAⅣ群/短波毛单胞菌属 rRNAⅤ群/窄食单胞菌属 其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等
假单胞菌属Pseudomonas 种类： 铜绿假单胞菌(P.aeruginosa) 荧光假单胞菌(P.fluorescence ) 恶臭假单胞菌(P.putica ) 斯氏假单胞菌(P.stutizeri) 曼多辛假单胞菌(P.mendocina) 产碱假单胞菌(P.alcaligenes) 假产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)
假单胞菌属Pseudomonas 共同特点： G-b 菌体细长 单端鞭毛 无芽胞 专性需O2 营养要求不高 单端鞭毛 无芽胞 专性需O2 营养要求不高 35℃生长，少数4℃、42 ℃生长 葡萄糖O/－ 动力+ 氧化酶+ 可产多种色素：绿脓素 荧光素 脓玉红素
各种菌产生的色素 铜绿假单胞菌 绿脓素、红脓素、青脓素、荧光素 蓝、红、黑、黄色 荧光假单胞菌 荧光素 黄绿色 恶臭假单胞菌 荧光素 黄绿色 菌名 色素 颜色 铜绿假单胞菌 绿脓素、红脓素、青脓素、荧光素 蓝、红、黑、黄色 荧光假单胞菌 荧光素 黄绿色 恶臭假单胞菌 荧光素 黄绿色 斯氏假单胞菌 未定名黄色素 黄色 洋葱伯克霍尔德菌 未定名黄色素、紫色素 黄色、紫色 腐败希瓦讷拉菌 未定名色素 淡红褐色
假单胞菌属Pseudomonas 抵抗力：较强，对多种抗生素耐药 临床意义：分布广泛，条件致病菌， 主要引起皮肤粘膜受损部位感染和各种医院内感染
各种标本 血平板和Mac平板 可疑菌落 涂片革兰染色 革兰阴性杆菌 氧化酶(+)、OF：O 非发酵菌鉴定系统鉴定到种 微生物检验程序
药敏试验 假单胞菌属和不动杆菌属可做K-B法药敏试验，嗜麦芽窄食单胞菌只有3种药物的K-B法药敏标准，其余需用稀释法或E test法
A组：头孢他啶、美洛西林或替卡西林、哌拉西 B组：头孢吡肟、头孢哌酮、氨曲南、亚胺培 C组：头孢噻肟或头孢曲松、氯霉素、奈替米星 抗生素敏感试验： A组：头孢他啶、美洛西林或替卡西林、哌拉西 林、庆大霉素 B组：头孢吡肟、头孢哌酮、氨曲南、亚胺培 南、阿米卡星、妥布霉素、环丙沙星 C组：头孢噻肟或头孢曲松、氯霉素、奈替米星 U组：羧苄西林、头孢唑肟、四环素、诺氟沙星 或氧氟沙星、磺胺甲基异恶唑
铜绿假单胞菌 P.aeruginosa
铜绿假单胞菌 形态：G-b 菌体长短不一 球杆状或长丝状 单端单鞭毛 动力+ 无芽胞 特性：专性需氧 营养要求不高 单端单鞭毛 动力+ 无芽胞 特性：专性需氧 营养要求不高 35℃+ 4℃－ 42 ℃+ 可形成多种不同形态的菌落 产多种色素(主要为绿脓素、荧光素)
生化反应： 氧化酶+ OF：O 硝还+ N2+ 液化明胶+ 枸橼酸盐+ 精双水解+ 乙酰胺酶+ 吲哚-
铜绿假单胞菌 革兰染色
铜绿假单胞菌 电镜图
铜绿假单胞菌 抗原： O抗原(外膜蛋白-保护性抗原 脂多糖-型特异性) H抗原 血清学分型 抵抗力： 抵抗力强 耐干燥 不耐热 多重耐药 抵抗力： 抵抗力强 耐干燥 不耐热 多重耐药 在室温水中长期生存 4℃不生长
铜绿假单胞菌 致病性 广泛存在环境中的条件致病菌，是院内感染 主要病原菌 可引起皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、 烧伤感染、囊性纤维变性等 有多种毒力因子：包括菌毛、荚膜多糖、内 毒素、外毒素、绿脓菌素、蛋白酶、磷脂酶等
粘附素：菌毛的神经氨酸酶分解上皮细胞表面的神经氨酸促进细菌侵入 荚膜：多糖类物质抗吞噬细胞的吞噬作用；使细菌锚泊在细胞表面，与呼吸道感染有关 内毒素、外毒素 绿脓菌素：绿色色素，由铜绿假单胞菌的RpoS基因编码产生的代谢产物，具有氧化还原活性的化合物，能催化超氧化物和过氧化氢产生有毒氧基团，引起组织损伤。在致病中起重要作用 弹性蛋白酶：降解弹性蛋白，引起肺实质损伤和出血；降解补体和白细胞蛋白酶抑制物；可与相应抗体形成复合物，沉积于感染组织中 磷脂酶C
微生物检验 采集标本：各种临床标本 医疗器械 环境用品 检验方法：直接镜检 分离培养(血平、MAC平板) 鉴定 分型：血清学分型、质粒指纹图谱分型、 脉冲场凝胶电泳分型等
脓液 痰 尿液等 血液 环境用品 分离培养 直接涂片染色 肉汤增菌 血平板 37 ℃18-24h 可疑菌落（金属光泽、β-溶血、产绿色素、特殊气味） 初步鉴定 最后鉴定 菌落 色素 非发酵菌鉴定系统鉴定 革兰阴性杆菌 氧化酶(+) 血清分型 检验程序
分离培养 普平： 18-24h圆形 大小不一 边缘不整 扁平 湿润 常呈融合态 琼脂被染成绿或黄绿 湿润 常呈融合态 琼脂被染成绿或黄绿 血平： 扁平 湿润 有金属光泽 琼脂被染成蓝 绿或灰绿 有溶血环 MAC平：微小无光泽半透明 48h后菌落呈棕色
鉴定 初步鉴定 菌体形态 菌落特征 产色素 气味 氧化酶 最终鉴定 非发酵菌生化鉴定系统 API-NE试条
细菌耐药机制 外膜通透性降低 产生灭活酶或钝化酶 主动外排系统将抗生素泵出胞外 抗菌药物作用靶位改变 膜孔蛋白突变 生物膜屏障作用 各种抗生素治疗铜绿假单胞菌所致感染过程中都可能发生耐药。初代敏感菌株在治疗3－4天后可能发生耐药，有必要重复分离菌株 本菌对多种抗生素天然耐药，常用三代头孢和氨基糖苷类联合治疗
鉴定结果分析 从临床标本中分离出来的铜绿假单胞菌，需要排除污染因素 铜绿假单胞菌下呼吸道感染需连续三次痰培养阳性才能确立。
铜绿的菌落分型 典型型 大肠菌样型 粘液型 侏儒型 粗糙型
菌落光滑凸起 成粘液状 粘液型（麦康凯平板） 粘液型（血平板）
细小，无光泽半透明菌落 侏儒型（麦康凯平板）
菌落呈灰绿色 大小不一扁平湿润 边缘不规则呈伞状伸展 表面常可见金属光泽 菌落呈灰绿色 大小不一扁平湿润 边缘不规则呈伞状伸展 表面常可见金属光泽 典型型（麦康凯平板）
产绿脓素 琼脂染成黄绿色 典型型（普通平板上）
菌落中央凸起 边缘扁平 表面粗糙 粗糙型（麦康凯平板）
菌落圆形凸起 似大肠埃希菌菌落 大肠型（麦康凯平板）
常见非发酵菌初步分群鉴定 试验 假单胞 不动杆 产碱杆 黄杆 莫拉 菌属 菌 属 菌 属 菌属 菌属 氧化酶 + - + + + 试验 假单胞 不动杆 产碱杆 黄杆 莫拉 菌属 菌 属 菌 属 菌属 菌属 氧化酶 + - + + + 葡萄糖O/F O/- O/- - O/F - 动力 + - + - - MAC平板生长 + + + +/- -