产NDM-1泛耐药肠杆菌科 细菌感染诊疗指南 实验室检测方法解读 徐英春 北京协和医院

产KPC酶的肠杆菌科细菌特征 MIC (µg/ml) MIC (µg/ml) 阿米卡星 R 氨苄西林 R 氨苄西林-舒巴坦 R 氨曲南 R 厄他培南 R或I 庆大霉素 R 亚胺培南 R或I 左氧氟沙星 R 美罗培南 R或I 哌拉西林-他唑巴坦 R 四环素 R 妥布霉素 R 复方磺胺 R 39 jhindler clsi M100-S18

KPC 产KPC酶的肠杆菌科细菌耐药特点 所有的 b-内酰胺类耐药 青霉素类 广谱头孢菌素 单环B内酰胺类 碳青霉烯类 质粒介导的耐药基因 有的菌株同时 ESBL（+）,氟喹诺酮类耐药、氨基糖苷类耐药 35

产KPC酶的肠杆菌科细菌耐药特点 黏菌素 /多粘菌素 敏感 MIC ≤2 µg/ml S 替加环素 可能敏感（ MIC ≤2 µg/ml S; 4 µg/ml I; ≥8 µg/ml R） 52

NDM-1 的检测方法 NDM-1，即新德里金属β-内酰胺酶-1型，是由细菌质粒上携带的blaNDM-1基因编码的。目前，国际上已有十余篇关于NDM-1的研究性文章或相关部门报告发表。 由blaNDM-1编码产生的碳青霉烯酶及因此产生的对碳青霉烯类耐药性可以通过现有推荐使用的表型鉴定方法准确、可靠的鉴定出来[1] [1] US CDC. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2010 Jun 25;59(24):750. [2] Yong D et al. Antimicrob Agents Chemother. 2009 Dec;53(12):5046-54.

CLSI M100-S20及CLSI M100-S20-U中碳青霉烯类的折点 抗菌药物 纸片扩散法 (mm) 稀释法(mg/L) S R 多利培南 - ≥23 ≤19 ≤1 ≥4 厄他培南 ≥19 ≤15 ≤2 ≥8 ≤0.25 ≥1 亚胺培南 ≥16 ≤13 ≤4 ≥16 美罗培南

（一）表型筛查试验 纸片扩散法： 肉汤稀释法或Etest法 美罗培南（10ug）或亚胺培南（10ug）： 抑菌圈直径≤22mm 肉汤稀释法或Etest法 美罗培南或亚胺培南:MIC≥2ug/ml 亚胺培南适合于大肠埃希菌，克雷伯菌属，沙门菌属，肠杆菌属 变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属对亚胺培南敏感性下降是由产碳青霉烯酶外的其他机制引起，因此对这些菌株尚未建立用亚胺培南MIC法进行筛选和确认碳青霉烯酶，并且亚胺培南纸片法对所有肠杆菌科碳青霉烯酶的筛查效果都不好 [1] Yong D et al. Antimicrob Agents Chemother. 2009 Dec;53(12):5046-54. [2] Kumarasamy KK et al. Lancet Infect Dis. 2010 Sep;10(9):597-602.

（二）表型确证试验 纸片扩散法： Etest法： 双纸片协同法： 改良霍奇试验(modified Hodge test) 自动化鉴定与药敏仪器 [1] Yong D et al. Antimicrob Agents Chemother. 2009 Dec;53(12):5046-54. [2] Kumarasamy KK et al. Lancet Infect Dis. 2010 Sep;10(9):597-602.

（二）表型确证试验 纸片扩散法：亚胺培南(10ug)/亚胺培南(10ug)+ EDTA(500mM 10ul)复合纸片 图：复合纸片法判定金属β-内酰胺酶示意图 (左纸片：亚胺培南/EDTA, 右纸片：亚胺培南) [1] Yong D et al. J Clin Microbiol. 2002 Oct;40(10):3798-801.

（二）表型确证试验 Etest法： Etest® MBL (IP/IPI、MP/MPI) 结果判读：单药与复合制剂的MIC比值≥8 [1] http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?doc=CNL_CLN_PRD_G_PRD_CLN_60

(亚胺培南/亚胺培南+抑制剂[EDTA]) 图：Etest MBL 试验示意图 (亚胺培南/亚胺培南+抑制剂[EDTA]) [1] Lee K et al. J Clin Microbiol. 2005 Feb;43(2):942-4.

（二）表型确证试验 双纸片协同法： 亚胺培南(10ug)、EDTA(0.5M x 10 μl约0.5mg/片)， 间距10mm (0.5McF） 图：亚胺培南-EDTA双纸片协同试验示意图 (图中菌种为铜绿假单胞菌) [1] Lee K et al. J Clin Microbiol. J Clin Microbiol. 2003 Oct;41(10):4623-9.

（二）表型确证试验 #1 pos #2 pos #3 neg 改良霍奇试验(modified Hodge test) 制备 0.5McF的 E. coli ATCC 25922菌悬液. 1:10稀释 用棉签均匀涂布 MHA 平皿、约5分钟，中心贴厄他培南或美罗培南纸片 用1 ul接种环挑取2-3个菌落，从纸片边缘向外划线 过夜培养（16-20h）. 出现向内生长的菌株薇碳青霉烯酶阳性（如图1，2）. E. coli ATCC 25922 厄他培南抑制 E. coli ATCC 25922 #1 pos #2 pos 15x100 MM Plate #3 neg 有丰富菌的E. coli ATCC 25922生长 CLSI M100-S20. 13

（二）表型确证试验 自动化鉴定药敏仪器 BD凤凰100 Walkway MicroScan VITEK2

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