指導老師：陳淑德 報告者： B9732075 黃育仁 B9732091 張哲維 B9732103 丁家偉 靈芝抗氧化活性之探討 指導老師：陳淑德 報告者： B9732075 黃育仁 B9732091 張哲維 B9732103 丁家偉 1 1
大綱 靈芝 靈芝發酵 靈芝發酵產物之萃取方法 靈芝發酵產物之抗氧化活性 結論 2
靈芝 食用菌，東方國家民眾普遍相信，靈芝具有極好的保健作用，甚至能夠輔助治療癌症。市場上有很多以靈芝為原料的保健食品。 (曾和毛，2007) 在西方國家，每年的全球市場價值 15億美元以上靈芝萃取物。 3
靈芝搖瓶發酵 將保存的菌種接種至PDA斜面，25℃培養7天 將斜面培養基切割成5c㎡小塊 接種到液態培養基中培養七天(30℃，150 rpm) 另以液態培養基分別加入1 g薏仁粉和銀杏葉粉 以121℃，滅菌30 min 冷卻並接種 在30℃，150 rpm於搖瓶培養5天 (曾和毛，2007) 4 4
靈芝發酵產物有效成分 靈芝多醣 靈芝酸 腺苷 5
靈芝多醣 提高機體免疫力 提高機體耐缺氧能力 消除自由基 抑制腫瘤 抗輻射 提高肝臟、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白質能力，延長壽命等 (崔等，2006)
靈芝酸 止痛 鎮靜 抑制組織胺釋放 解毒 保肝 毒殺腫瘤細胞 (崔等，2006)
腺苷 具能提高血液供氧能力 加速血液微循環 提高血液對心、腦的供氧能力 (崔等，2006)
靈芝發酵產物萃取方法 冷水萃取- 樣本10g加入100毫升冷水 在25℃ 100 rpm，24hr 再以5000×g 離心15 min後 通過濾紙過濾 冷凍乾燥 (曾和毛，2007) 9 9
靈芝發酵產物萃取方法 熱水萃取- 靈芝液態發酵產物 以121℃熱水萃取15 min 以5000×g離心10 min 取其上清液 冷凍乾燥 (崔等，2006) 10 10
樣本加入MDF(二甲基甲醯胺 )，攪拌30 min 靈芝發酵產物萃取方法 硫酸化萃取- 樣本加入MDF(二甲基甲醯胺 )，攪拌30 min 冰浴混合物至室溫，加入NaOH 以蒸餾水透析72 hr 加入無水酒精收集沉澱物 (Liu et al., 2010) 11
硫酸化 表一、硫酸化多醣的硫含量、DS、產量、水溶性 (Liu et al., 2010) 12 數據表示為SDs.攜帶值相似，數據無顯著異 sGLP1，sGLP2和sGLP3分別代表著不同的硫酸化GLP溶解度是在室溫下測試 (Liu et al., 2010) 12
靈芝發酵產物之抗氧化活性
對羥自由基清除能力 圖一、冷水松杉靈芝子實體、菌絲體和發酵濾液萃取物的羥自由基清除能力(n=3) (曾和毛，2007) 14
羥自由基清除能力 圖二、GLP和硫酸鹽化GLP羥自由基清除能力 (Liu et al., 2010) 清除羥自由基的能力硫酸化衍生物更高於其靈芝多醣 圖二、GLP和硫酸鹽化GLP羥自由基清除能力 (Liu et al., 2010) 15
超氧陰離子清除能力 圖三、 GLP和硫酸鹽化GLP超氧陰離子清除能力 (Liu et al., 2010) 16 sGLP2顯示較強或同樣的能力作為抗壞血酸氧氣發生反應，這表明通過優化硫酸鹽化可能會獲得一個新sGLP具有較強的自由基清除能力 圖三、 GLP和硫酸鹽化GLP超氧陰離子清除能力 (Liu et al., 2010) 16
過氧化氫清除能力 圖四、 GLP和硫酸鹽化GLP過氧化氫清除能力 (Liu et al., 2010) 17
螯合能力 圖五、 GLP和硫酸鹽化GLP螯合亞鐵離子能力 (Liu et al., 2010) 18 sGLP1比GLP和sGLP2和sGLP3有較強 Fe2+螯合能力，這表明硫化可能加強螯合活性靈芝多醣 圖五、 GLP和硫酸鹽化GLP螯合亞鐵離子能力 (Liu et al., 2010) 18
測定螯合能力 圖六、冷水萃取松杉靈芝子實體，菌絲體和發酵濾液對亞鐵離子的螯合能力 (曾和毛，2007) 19
還原力 圖七、冷水松杉靈芝萃取物子實體、菌絲體和發酵濾液萃取物的還原力 (曾和毛，2007) 20
還原力 圖八、 GLP和硫酸鹽化GLP還原力測定 (Liu et al., 2010) 21 硫酸化靈芝多醣可能增強電子雲密度活性羥基團體和提高電子的分子吸引活動，它可以消除自由基，終止自由基介導氧化連鎖反應 圖八、 GLP和硫酸鹽化GLP還原力測定 (Liu et al., 2010) 21
清除DPPH能力 圖十、冷水松杉靈芝萃取物子實體、菌絲體和發酵濾液萃取物的DPPH清除能力 (曾和毛，2007) 22
抗氧化活性(共軛雙烯法 ) 圖十一、冷水萃取松杉靈芝子實體、菌絲體和發酵濾液的抗氧化活性 (曾和毛，2007) 23
超氧陰離子清除能力 抑制率% 樣品量 /mL 圖十二、不同萃取液清除超氧陰離子的效果 (崔等，2006) 24 24
羥自由基清除能力 抑制率% 樣品量 /mL 圖十三、不同萃取液清除羥自由基的效果 (崔等，2006) 25
還原力 還原力 樣品體積 /μL 圖十四、不同樣品溶液對還原力的影響 (崔等，2006) 26
結論 利用冷水萃取成熟靈芝、菌絲體和濾液將具有比其他萃取方式有更好的抗氧化能力，靈芝茸具有比成熟靈芝更好的功效。 將不溶水性靈芝多醣硫酸化，將可以使不溶水性靈芝能夠被人體利用，使其抗氧化能力增強，並且使功能性增加。 靈芝具有良好的抗氧化能力，發酵時加入薏仁粉、銀杏葉粉等具有抗氧化能力之物質，將會帶來更好的抗氧化效果。 27
參考文獻 曾裕琇、毛正倫，2007，Antioxidant Properties of Cold Water Extracts from Ganoderma tsugae。Fungal Science 22卷1&2期 崔月花、徐鹏、章克昌，2006，灵芝液态发酵有效产物体外抗氧化活性的研究。食品與發酵工業 32卷6期 Wei Liu, Hengyu Wang、 Wenbing Yao、 Xiangdong Gao and Liangli Yu，2010，Effects of Sulfation on the Physicochemical and Functional Properties of a Water-Insoluble Polysaccharide Preparation from Ganoderma lucidum。 J. Agric. Food Chem. 58 (6), pp 3336–3341 Mau, J.-L., S.-Y. Tsai, Y.-H. Tseng, and S.-J. Huang，2005，Antioxidant properties of hot water extracts from Ganoderma tsugae Murrill. LWT - Food Sci. Technol. 38: 589–597. Mau, J.-L., S.-Y. Tsai, Y.-H. Tseng, and S.-J. Huang.，2005 ，Antioxidant properties of methanolic extracts from Ganoderma tsugae. Food Chem. 93: 641–649. 28