二十二章 真菌学总论 通过本章学习，你将能够回答下列问题 1、常见真菌的所致疾病有哪些？ 2、病原性真菌按其侵犯的部位不同可以分 为哪几类？ 3、检测真菌有哪些常用的方法？如何进行 真菌检验？

真菌生物学性状 真核细胞型微生物，属于真菌界（Kingdom Myceteae）。它具有典型的细胞核，不含叶绿素，以腐生或寄生方式摄取营养，细胞壁含几丁质（Chitin）和（或）纤维素，有完善细胞器，能进行有性生殖和（或）无性繁殖。

真菌生物学性状 多数对人有益，仅少数导致人类疾病 对人致病的真菌分为四类：病原性真菌、 条件致病性真菌、产毒真菌及致癌真菌。 目前大多数真菌的鉴定，形态学（包括真 菌形态、菌落形态）检查仍有重要意义 。

真菌形态特征 单细胞真菌 酵母菌：孢子，无菌丝 类酵母菌：芽生孢子，假菌丝 多细胞真菌 丝状菌（霉菌）：孢子和菌丝

单细胞真菌形态

孢子 假菌丝 类酵母菌—白假丝酵母菌

多细胞真菌形态

二相型真菌 机体内寄生37℃ 单细胞型： 酵母菌 含动物蛋白培养基 普通培养基25℃ 多细胞型： 丝状菌 沙保氏培养基25℃

二相性真菌

真菌的基本形态结构—菌丝 孢子 适宜温/湿度 芽管 延长呈丝状 菌丝 营养、气生、生殖菌丝 分支交织成团 菌丝体

真菌的基本形态结构—孢子 芽 胞 孢 子 1、真菌繁殖结构，一条菌丝可生成 多个孢子 细菌休眠结构，抵御不良环境 作用 真菌繁殖结构 低抗力 芽 胞 孢 子   细菌休眠结构，抵御不良环境 作用 真菌繁殖结构 低抗力 不强，加热60~70℃ 短时间即可死亡 强，有的可耐100℃数小时

孢 子 的 分 类 有性孢子：同一/不同菌体上两细胞 融合减数分裂而成 无性孢子：菌丝上细胞分化生成，不 发生细胞融合。

大分生孢子 分生孢子 小分生孢子 芽生孢子 无性孢子 叶状孢子 厚膜孢子 关节孢子 孢子囊孢子 大多真菌行有性/无性生殖，病原性真菌多以无性生殖为主。

生殖菌丝末端细胞分裂或收缩形成；也可从菌丝侧面出芽形成 大分生孢子的形态

芽生孢子

厚膜孢子

关节孢子

孢子囊孢子

真菌的生长特性 营养要求不高，常用沙保氏培养基 基本成分：葡萄糖、蛋白胨、琼脂 生长条件：pH4.0~6.0 温度22~28℃（深部 真菌37℃） 较高的湿度、O2

菌 落 类 型 （1）酵母型/类酵母型（单细胞真菌菌落形式） A、湿润、柔软而致密，形态似一般细菌菌落 B、镜下：酵母型 类酵母型 卵圆孢子、芽生孢子 芽生孢子、假菌丝

菌 落 类 型 （2）丝状菌落（多细胞真菌菌落形式） A、棉絮状、绒毛状、粉末状（气生菌丝体） 菌落正背面呈不同颜色（可为鉴定依据） B、玻片小培养 镜下 孢子、菌丝及完整菌丝体 乳酚棉蓝

酵母型菌落

白假丝酵母菌菌落(类酵母型)

曲霉菌

青霉菌

临床标本的采集种类 （1）皮肤的角质性物质：毛发、指（趾） 甲、皮屑等。 （2）各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、 耳垢、痰、粪便、尿液等。 （3）血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑 脊液、淋巴穿刺液等。 （4）脓汁及渗出物。

采集标本注意事项 （1）采集的标本要适宜 不同真菌感染应采取不同的临床标 本。怀疑为浅部真菌感染如体癣，应刮取病变边缘的痂、皮屑，发癣应取折断了的病发。怀疑为深部真菌感染应取血液、脑脊液、痰、脓汁等。 （2）在用药前采集标本　一般真菌标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。

采集标本注意事项 （3）采集的标本量要足 血液和脑脊液标本5ml，胸腔液20ml，皮屑标本两块，活体组织两份（一份送病理科检查，一份作镜检和培养）。 （4）严格无菌操作　在采集标本时严格无菌操作，并进行消毒处理，尤其是在采集血液和脑脊液标本时，要避免污染杂菌。 （5）采集的标本立即送检　对采集的标本应立即送检，特别是深部真菌标本采集后最长不超过2h。

真菌的检验方法 镜检真菌形态 真菌抗原检测 真菌分离培养与鉴定 真菌核酸检测 真菌毒素检测

真菌标本直接检查 1.直接镜检：方法简便，快速 10%KOH 低倍/高倍镜检查有无菌丝/孢子 角质标本 微加热 （皮肤癣菌） 2.抗原检测: 直接观察/染色后观察 2.抗原检测: 采用免疫学方法检测真菌抗原，常用的方法有胶乳凝集试验、ELISA、半定量放射免疫测定法。

常用的染色方法 常用的染色方法有革兰染色、瑞氏染色、荧光染色，乳酸酚棉蓝染色、还有墨汁负染色等。 对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，需作瑞氏染色或姬氏染色后镜检。 检测病人脑脊液标本中新生隐球菌，需作墨汁负染色后检查，背景为黑色，新生隐球菌和荚膜不着色

直接镜检意义 阳性结果意义 1.有诊断意义，如浅部真菌病、隐球菌病、皮肤粘膜假丝酵母菌病等 2.代表组织相，直接镜检看到的真菌形态就是该真菌的组织形态，如假丝酵母的菌丝、浅部真菌的厚膜孢子等；确定某些致病性真菌属或种，如皮肤癣菌、曲霉等 3.判断某些真菌种的致病性等

直接镜检意义 直接镜检局限性 1.阴性结果不能排除真菌感染，直接镜检不如培养敏感，其敏感性随标本类型、数量、采集时间和质量等而有所不同 2.有假阳性结果，如溶解的淋巴细胞在脑脊液印度墨汁湿片中易误认为新生隐球菌；脂肪微滴也可与出芽酵母细胞混淆

分 离 培 养 真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。 培养成功与否与采集的标本是否适当、是否新鲜、培养基的选择、培养温度与时间等有关。 大多数真菌培养的温度为28℃，但深部真菌为37℃。对二相性真菌培养时,28℃培养真菌呈菌丝相（霉菌型），37℃培养为组织相（酵母型）。

真菌培养方法 平皿培养 :表面较大可使标本散布，便于观察菌落形态，但水分易蒸发，只能培养生长繁殖较快的真菌，如假丝酵母菌、隐球菌。 大试管培养:水分不易蒸发，主要用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存。 玻片培养(微量培养、小培养):可用于真菌菌种的鉴定。

观察菌落形态时注意 1.菌落性质，是酵母菌还是霉菌。 2.菌落大小,一般病原性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大。 3.菌落颜色，一般病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深。 4.致病性真菌菌落下沉，污染性真菌菌落不下沉;致病性真菌有时使培养基开裂，但污染霉菌很少引起培养基开裂。