动物细胞工程 儋州市一中 金兆娜

提问： 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物细胞工程： 动物细胞工程： 植物组织培养 植物体细胞杂交 1.动物细胞培养 2.动物细胞核移植 4.单克隆抗体 3.动物细胞融合 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。

人造皮肤

什么是动物细胞的培养？ 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。

（一）动物细胞培养 1.过程：

1、选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。

2.分散成单个细胞 在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。

3.动物细胞生长特性： 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。

细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 4.如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？ 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 (遗传物质改变) 细胞株 细胞系 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 传代培养 原代培养

培养过程： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 单个细胞 细胞悬浮液 原代培养 10代细胞 细胞株 传代培养 50代细胞 动物细胞培养不能 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 细胞悬浮液 原代培养 10代细胞 遗传物质未改变 细胞株 50代细胞 传代培养 动物细胞培养不能 最终培养成生物体 遗传物质已改变 细胞系 无限传代

思考题 1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？ 没有 ２、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？ 是 ３、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？ 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖 ４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理。

思考题 ５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？ 胰蛋白酶水解蛋白质 细胞间的成份是蛋白质 6、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 能

讨论 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考并讨论以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质 充足的营养供给、适宜的温度、适宜的pH和气体环境 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 无菌、无毒的环境。

培养条件： 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养（葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、维生素、血清、血浆等。合成培养基） 保证细胞顺利的生长增殖

动物细胞培养条件： 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） 3、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 保证细胞顺利的生长增殖

培养条件： 动物细胞培养液的主要成分： 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、维生素、血清、血浆等。 动物体细胞大都生活在液体的环境 （1）液体培养基 与植物培养基相比其特点是： （2）含有血清、血浆

植物细胞和动物细胞培养的比较 细胞的全能性 细胞增殖 固体培养基 液体培养基 蔗糖、植物激素 葡萄糖、动物血清 细胞株、细胞系 植物体 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞的全能性 细胞增殖 培养基性质 固体培养基 液体培养基 蔗糖、植物激素 葡萄糖、动物血清 培养基特有成分 培养结果 细胞株、细胞系 植物体 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 获得细胞或细胞产物

动物细胞培养应用 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） 作为基因工程中的受体细胞 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据

克隆羊——多利

多莉羊的培育过程 卵细胞 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 融合后的卵细胞 细胞核移植 早期胚胎 卵裂 C母绵羊子宫 胚胎移植 分娩 妊娠

思考题 １、动物的克隆与植物克隆一样吗？ 不 ２、用动物体细胞进行克隆的过程,其实际操作过程是什么？ 动物克隆过程的实际是细胞核移植

二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 细胞分化程度低，恢复全能性容易 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 核移植 受体细胞：MⅡ期的卵母细胞 （难度高）

体细胞核移植的过程 卵母细胞去核 体细胞取核 电刺激使两细胞融合 重组细胞 重组胚胎 新个体

体细胞核移植过程： 供体体细胞 细胞培养 体细胞 细胞融合 注入 进入受体卵母细胞 供体核 卵巢卵母细胞 MⅡ期 去核卵母细胞 去核 胚胎移植 生出与供体遗传物质相同的个体 代孕母牛 重组胚胎

思考题 １、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的体细胞。 ２、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？ 10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型，未发生突变

思考题 3、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞

胚胎移植技术 试管动物（婴儿）培养过程 卵细胞 精子 母体子宫内 孕育、产出 体外受精 受精卵 胚胎 新个体

体细胞核移植技术的应用前景 1、加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 2、保护濒危物种，增加存活数量 3、克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 4、可以作为异种移植的供体，可以用于组织器官的移植

体细胞核移植技术存在的问题： 许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。

1、在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条 件下无限制地传代下去，这种传代细胞称为（ ） A．细胞系 B．细胞株 练习： 1、在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条 件下无限制地传代下去，这种传代细胞称为（　 ） 　　 A．细胞系 B．细胞株 C．原代培养 D．传代培养 A 2、动物细胞工程技术的基础是 ------（ ） 　 A.动物细胞融合 B.单克隆抗体　 C.胚胎移植 D.动物细胞培养 D

3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 （ ） 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 （　 ） 　　 A.容易产生各种变异 B．具有更强的全能性 　 C.取材十分方便 　　 D．分裂增殖的能力强 D

4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 （ ） A.培养基不同； B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； 4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 （ ） A.培养基不同； B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。 A

5、下列关于动物细胞培养的叙述中，错误的是（ ） A、用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或 组织 B、将所取的组织先用胰蛋白酶等处理使其分散成单个 细胞 C、在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液 D、动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞会衰老死亡 D