微生物的营养 致远高级中学 施志文

一、微生物需要的营养物质 碳源 氮源 无机盐 生长因子 水

一、微生物需要的营养物质 判断题 × × √ × × √ 1）同一种物质不可能既作碳源又作氮源。（ ） 2）凡是碳源都能提供能量。（ ） 1）同一种物质不可能既作碳源又作氮源。（ ） 2）凡是碳源都能提供能量。（ ） 3）无机氮源也能提供能量。 （ ） 4）除水以外的无机物仅提供无机盐。（ ） 5）配制培养基时用蒸馏水。（ ） 6）牛肉膏中含有生长因子。 （ ） × 如蛋白质、氨基酸、牛肉膏、蛋白胨 × 如CO2不能提供能量 √ 如NH3为硝化细菌提供能源和氮源 × 如NH4NO3还能提供氮源、 CO2提供的是碳源 × 用自来水，因为含有微量元素 √

想一想 现有酸奶一瓶、奶粉一袋、黄豆一袋，如何制作豆奶酸奶？要求用酸奶中乳酸菌进行发酵。

a、分离纯化酸牛奶中的乳酸菌 1、配制培养基：用奶粉泡牛奶，加入1%的琼脂，制成固体培养基，高压灭菌处理。 2、接种： 1.05kg/cm2、121℃、15~30min 2、接种： 在超净工作台上，点燃酒精灯，用酒精消毒手，打开酸奶包装，将接种环灼烧，在酸奶中蘸一下，用划线法接种在固体培养基上。 无菌条件

注意 平板划线法 稀释 单个菌落 ①每次划线前要灼烧 ②冷却后从上一区划线末端开始划 用平板划线法逐步稀释获得的单个菌落 ③首尾区不重叠 a b c 注意 ①每次划线前要灼烧 ②冷却后从上一区划线末端开始划 用平板划线法逐步稀释获得的单个菌落 平板划线法 稀释 ③首尾区不重叠 单个菌落

防止培养基冷凝后形成的水珠滴落在培养基上，不利于菌落的形成 a、分离纯化酸牛奶中的乳酸菌 1、配制培养基：用奶粉泡牛奶，加入1%的琼脂，制成固体培养基，高压灭菌处理。 在超净工作台上，点燃酒精灯，用酒精消毒手，打开酸奶包装，将接种环灼烧，在酸奶中蘸一下，用划线法接种在固体培养基上。 2、接种： 3、培养：倒置培养皿，于37℃恒温箱中培养2-3天。 防止培养基冷凝后形成的水珠滴落在培养基上，不利于菌落的形成 4、纯化和保藏：选择小型且呈灰白色的单个菌落，用划线法接种在斜面培养基上培养，培养后冷藏在冰箱中保存。

b、豆奶酸奶的制作 1、配制培养基：黄豆浸泡，制作豆浆。用奶粉泡牛奶。 豆浆和牛奶混合，采用巴氏消毒法消毒，获得液体培养基。 杀灭试管口的杂菌 2、接种：点燃酒精灯，打开菌种封口后将试管口在火焰上烧一下，并将试管口置于火焰附近，然后灼烧接种环，将接种环于菌种试管培养基无菌落处冷却后刮取菌种，接种到培养基中。 3、培养：37℃发酵8-10小时。

二、培养基 ▲培养基的分类 ①按照物理性质划分培养基 主要用于微生物的分离、纯化、保藏、鉴定等 主要用于观察微生物的运动 主要用于工业生产 固体培养基 液体培养基 主要用于观察微生物的运动 主要用于工业生产 ①按照物理性质划分培养基 半固体培养基 需加入凝固剂，如琼脂

二、培养基 ▲培养基的分类 1、根据物理性质分 2、根据用途分 如，牛肉膏蛋白胨培养基 固体培养基——用于微生物的分离.纯化.保藏.鉴定 半固体培养基——用于观察微生物的运动 液体培养基——用于工业生产 2、根据用途分 通用培养基——满足多种微生物的营养需求的培养基。 如，牛肉膏蛋白胨培养基 选择培养基——能通过缺少某种物质或某种特定的反应选择出特定微生物的具有选择作用的培养基。

选择培养基 加入青霉素等抗生素的培养基 选择出----导入了目的基因的受体细胞 青霉菌、酵母菌等真菌 不加氮源的无氮培养基 选择出----自生固氮菌 加入伊红和美蓝染料的培养基 选择出----大肠杆菌（有金属光泽的紫黑色的菌落） 加入高浓度食盐的培养基 选择出----金黄色葡萄球菌 不加含碳有机物的无碳培养基 选择出----自养型微生物

发酵工程的第一步是要从自然界中分离出菌种，假如实验室有以下微生物菌种：①金黄色葡萄球菌，②青霉菌，③乳酸菌，④大肠杆菌，⑤圆褐固氮菌，它们的标签丢失，如何根据各种微生物的颜色、形态、代谢类型及生理特点的不同，采用不同的方法将它们鉴别呢？ 首先配制一系列的不同的固体培养基若干，然后进行灭菌，再把不同的菌种接种到不同的培养基上进行鉴别： 第一步： 第二步： 第三步： 第四步： 用无氮培养基分别培养5种菌，能生长并繁殖形成菌落的是圆褐固氮菌。 用加青霉素的培养基分别培养余下的4种菌，能生长并繁殖形成菌落的是青霉菌。 用加高浓度NaCl的培养基分别培养余下的三种菌，能生长并繁殖形成菌落的是金黄色葡萄球菌 用加伊红—美蓝的培养基分别培养余下的二种菌,菌落颜色呈深紫色并带有金属光泽是大肠杆菌

现提供三种培养基的配方： 配方一：蛋白胨：10g、乳糖：5g、蔗糖：5g、K2HPO4：2g、伊红：0.4g、美蓝：0.065g、蒸馏水：1000ml、pH调至7.2 配方二：（CH2O）：8.0g、尿素：2.0g、KH2PO4：3.0g、CaSO4：0.5g、MgCl2：0.5g、生物素：适量、H2 O：1000ml 配方三：（NH4）2SO4：0.4g、K2HPO4：4.0g、FeSO4：0.5g、CaCl2：0.5g、H2 O：100ml 回答下列问题： （1）细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、 酒精、火焰灼烧几种不同的处理，这些方法 可依次用于杀灭哪些部位的细菌: A.接种针、手、培养基 B.手、培养基、接种针 C.培养基、手、接种针 D.接种针、培养基、手 （2）右图是微生物接种的过程，把聚集的菌种可以使用 法接种，逐步 分散到培养基的表面。 C 平板划线 稀释

现提供三种培养基的配方： 配方一：蛋白胨：10g、乳糖：5g、蔗糖：5g、K2HPO4：2g、伊红：0.4g、美蓝：0.065g、蒸馏水：1000ml、pH调至7.2 配方二：（CH2O）：8.0g、尿素：2.0g、KH2PO4：3.0g、CaSO4：0.5g、MgCl2：0.5g、生物素：适量、H2 O：1000ml 配方三：（NH4）2SO4：0.4g、K2HPO4：4.0g、FeSO4：0.5g、CaCl2：0.5g、H2 O：100ml 回答下列问题： （3）配方一所含有的碳源有____________________，其功能是___________________________。该培养基可用来鉴别哪种细菌？ ___________。 （4）配方二中的营养成分共有__类；若配制时不小心将0.5g MgCl2错加成了5.0gNaCl，为不造成浪费，可改为培养__________________。 （5）配方三可培养的微生物同化作用类型是_______，该培养基若用于培养产生人生长激素的工程菌，培养基的成分中至少应该含有_________；若加入该物质后，除去成分（NH4）2SO4 ，该培养基可用于培养___________________ 。 蛋白胨、乳糖、蔗糖 构成微生物细胞物质和代谢产物 大肠杆菌 5 金黄色葡萄球菌 自养型 有机碳源 自生固氮微生物