生物實驗安全防護講習 銘傳大學 生物科技學系 張猷忠

生物實驗安全防護的原則 人身安全 避免污染 保障操作者本身的安全 維護實驗室其他成員的安全 保障實驗室外其他第三者的安全 避免造成實驗室內環境的污染 含儀器，如冰箱、離心機、微量分注器等 避免造成實驗室外環境的污染 如動物飼養場、河川、魚、土壤、植物或作物等

生物實驗室的危險來源 所操作的生物 藥品和試劑 儀器設備 管理制度和人 如病毒、細菌、真菌、寄生蟲和實驗動物等 如酸、鹼、致癌物、放射性同位素、毒性物質、易燃物質和危險氣體等 儀器設備 高壓蒸氣滅菌鍋、離心機、紫外光觀察箱、高熱烘箱和電泳設備等 管理制度和人

實驗室感染實例 台灣(2003/12)、新加坡(2003/9)及中國(2004/7)都曾發生實驗室人員感染SARS事件 流感病毒(H2N2)的實驗室感染 新城雞病病毒(Newcastle disease virus)造成大學教師感染結膜炎 北部某公立大學研究生感染布氏桿菌(Brucella abortus) 細菌之實驗室感染實例 肉毒桿菌(Clostridium botulinum type A )、沙氏桿菌(Salmonella spp.) 實驗操作意外，造成南部某學校實驗室工作人員感染弓蟲 幾乎與隱胞子蟲(Cryptosporidium parvum)實驗有關工作者都會受到感染，尤其是以小牛下痢為卵囊來源時 證據顯示卵囊可能經由空氣傳染

實驗室感染實例 1979年，英國Birmingham大學的一起實驗室意外，造成天花病毒散播 感染了兩個人，其中一人死亡 實驗室負責人也因此自殺 中部某大學本月中旬(2006/9/17)發生實驗室博士班學生感染桿菌性痢疾(Shigella flexneri )事件，該校另一間實驗室前年也曾發生登革熱感染意外 實驗室被關閉

生物實驗室的安全隱憂 美聯社報導(2005/9/16)：三隻感染了黑死病細菌的老鼠大約在兩週前從一個實驗室裏不見了 操作或保存中的微生物外洩： 引發動物或人類疾病 天花病毒(Small pox virus)、炭疽桿菌(Bacillus anthrax)、口蹄疫病毒(FMD virus)、肺結核桿菌(Mycobacterium tuberculosis) 與外界病毒產生核酸重組 流感病毒(Influenza virus)、輪狀病毒(Rotavirus)、Norovirus 與外界細菌交換遺傳物質 抗藥性或毒素基因

生物實驗室的安全隱憂 實驗室操作的核酸外洩： 如何防範被感染人員散播病原 抗除草劑基因、抗殺蟲劑基因 仍在實驗中的轉基因作物或轉基因動物 台灣預研所SARS事件，當事人發燒後6天，始自行至診所、醫院看病，並曾到新加坡開會，因此有70位新加坡人須被隔離，有20多名國人需作自我健康管理

基因重組實驗之安全 國科會頒有基因重組實驗室守則 同時考慮重組體及生物性安全防護 國內持有、保存或使用第二級以上感染性生物材料單位，為落實實驗室生物安全自主管理，避免發生實驗室感染意外，應依法成立生物實驗安全委員會或指派專責人員， 確實督導實驗室各項生物安全相關事項之執行，並依相關核備程序向該局申報。否則依傳染病防治法第63條規定，可處以新台幣9萬元至45萬元之罰鍰。

生物實驗審查程序

屬於事先必需經由研究機構生物實驗安全委員會批准之實驗 所有使用屬於第二級、第三級、及第四級危險群微生物為宿主之實驗 將第二級、第三級及第四級危險群微生物DNA殖入非病原性原核細胞或低等真核細胞之實驗 在組織培養或細胞培養系統中，培養具有感染性之動植物病毒類實驗，或在輔助病毒的存在下，培養有缺陷之病毒類實驗，涉及數種同科之病毒、病毒突變株、或選殖DNA片段時，因可能產生重組或互補，故所有外源性之病毒均應視為一種病毒 人體除外之動物及植物實驗 體積超過20公升以上之醱酵實驗

需經由行政院所屬主管機構核准後方可進行之實驗 選殖產生劇毒之基因(LD50小於100 ng/kg) 選殖LD50不明之毒素基因 將抗藥性基因殖入病原微生物，而有可能導致疾病防治困難的實驗 將基因重組後之DNA，或其產生之任何物質送入人體中 「基因轉殖植物田間試驗管理規範」所規範之實驗 「遺傳工程環境用藥微生物製劑開發試驗管理辦法」所規範之實驗

基因重組實驗的防護 物理性防護層級(Physical Containment Level) 物理性防護的目的是將重組體隔離在設施或設備內，防止實驗人員和其他物品受到污染，並且防止其向外界擴散 因封閉程度的不同，區分為P1、P2、P3和P4四等級 20公升以上大量培養實驗的物理性防護，區分為LS-C、LS-1及LS-2的三等級 生物性防護層級(BSL：Biosafety Level) 須同時考慮重組DNA載體及宿主系統之安全性，降低在實驗室外環境中，載體在其宿主中的存活力，實驗用宿主中的載體轉移到非實驗使用的宿主 分為BSL-1、BSL-2、BSL-3及BSL-4四等級或ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3及ABSL-4四等級

實驗室分級 P1 lab: P2 lab: P3 lab: P4 lab: 可處理第一級危險群微生物之實驗室，與人類健康或成人之疾病無關。 可處理第二級危險群微生物之實驗室，在人類所引起的疾病很少是嚴重的，一般來說，傳染力有限，而且通常有預防及治療的方法。 P3 lab: 可處理第三級危險群微生物之實驗室，在人類可以引起嚴重或致死的疾病，可能有預防及治療之方法。 P4 lab: 可處理第四級危險群微生物之實驗室，在人類可以引起嚴重或致死的疾病，目前並無預防及治療之方法。

病原微生物之分類 第一級危險群(Risk group 1 , RG1)微生物 第二級危險群(Risk group 2 , RG2)微生物 第一級危險群微生物與人類健康成人之疾病無關 第二級危險群(Risk group 2 , RG2)微生物 第二級危險群微生物在人類所引起的疾病很少是嚴重的，而且通常有預防及治療的方法 第三級危險群(Risk group 3 , RG3)微生物 第三級危險群微生物在人類可以引起嚴重或致死的疾病，可能有預防及治療之方法 第四級危險群(Risk group 4 , RG4)微生物 第四級危險群微生物在人類可以引起嚴重或致死的疾病，但通常無預防及治療之方法

系上所保存的RG2微生物 Fungus Viruses Bacteria Aspergillus fumigatus Newcastle disease virus, Human rotavirus, Norovirus, Astrovirus, Human adenovirus Bacteria Staphylococcus aureus, Escherichia coli O157:H7, Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Salmonella choleraesuis, Salmonella enteritidis, Salmonella derby, Salmonella panama, Salmonella dublin, Vibrio parahaemolyticus

病原感染途徑 空氣或氣霧傳播 不慎吸入 食物或飲水 皮膚或黏膜接觸 SARS, Flu, TB 空調、不當實驗或儀器操作、帶病工作 黴菌孢子、培養液 食物或飲水 Salmonella, E. coli 微波爐、食物放置實驗室冰箱 皮膚或黏膜接觸 NDV, parasites 污染桌面或門把、不良衛生習慣、實驗意外

生物安全等級第一級 - BSL1 or P1 Lab - 包含標準實驗室操作 適合對操作人員及環境無或低危害的物質RG1及一般標準重組DNA的試驗環境 實驗室設施：(第二道防護) 要有門與外界隔開，窗戶要裝設紗窗或屏障 在建築物中，實驗室無需與主通道加以區隔 工作通常在開放空間的操作台上進行 工作桌面要易於清潔及不透水 不需要特別的隔離設備，亦不常使用 安全防護設施：(第一道防護) 保護衣物：實驗衣、手套 人員保護裝備：面罩、眼鏡或眼罩 人員訓練要求： 監督管理者：具有微生物或相關學科的一般訓練 實驗室人員：具有實驗室操作流程的特定訓練

生物安全等級第一級 -標準微生物操作程序- 工作時禁止或限制出入。 禁止飲食、飲水及抽煙。 操作前後要洗手。 工作桌面每天要消毒。 廢棄物要消毒滅菌。 避免液體濺灑及產生氣霧。 禁止用嘴操作移液管，要使用機械式移液裝置。 使用過之吸管必須先插入盛有消毒劑之長方型吸管槽，吸進消毒液後才可拉開吸管輔助器。滴管使用後，手指維持緊壓不要鬆開，吸進消毒液後，置入盛有消毒劑之容器。 使用微量吸管頭取感染性材料，其液體推出後拇指不要鬆開，直至將微量吸管頭插入盛有消毒劑之容器，吸進消毒液後才可退掉微量吸管頭，或者液體推出後拇指不要鬆開，用拇指後方之力道，將微量吸管頭退入盛有消毒劑之容器。 注射器抽取感染性材料後，如需推出筒內之空氣，針頭必須插入填塞棉花之滅菌小試管以防濺射。

P1級實驗室-實驗實施要項 -基因重組實驗室守則規定- 進行實驗時，宜關閉實驗室的門窗。 每日實驗結束時需滅菌實驗台，如實驗中發生污染，需立即加以滅菌。 實驗所產生之所有生物材料廢棄物，在丟棄之前需滅菌。被污染的器具需先經滅菌後，再清洗使用或丟棄。 不得用口做吸量操作。 實驗室內禁止飲食、吸煙及保存食物。 操作重組體之後，或離開實驗室之前要洗手。 在所有操作中，應儘量避免產生氣霧。 要從實驗室搬離被污染物品時，必需將其放入堅固且不漏的容器，在實驗室內密封後才可運出。 防除實驗室的非實驗用生物，如昆蟲及鼠類等。 若有其他方法可用，應避免使用針頭。 實驗用衣物的使用，需遵從計畫主持人的指示。 需遵守計畫主持人所訂之其他事項。

生物安全等級第二級 - BSL2 or P2 Lab - 適合對人員及環境會造成中度危險物質的操作 實驗室設施：(第二道防護) 生物安全等級第一級實驗室設施，加上高溫高壓滅菌箱及沖洗眼睛設備 實驗室要與公共區域分離，要有可以上鎖的門 空氣流入實驗室不可再循環到其他非實驗室區域 具有Class I或II生物安全操作櫃 安全防護設施：(第一道防護) 依照生物安全等級第一級安全防護設施 人員訓練要求： 監督管理者：具有能力勝任相關責任 實驗室人員：具有對病原的相關知識 要有實驗室專用生物安全手冊 視需要實施免疫措施及人員血清採集 其不同點在於： 工作進行中，不可進入工作場所 某些會造成感染性氣泡的操作，須在生物安全箱(Class I或II)或其他隔離設施中進行

P2級防護實驗室 -硬體要求- 實驗室除了具備跟一般微生物學實驗室相同等級的設備外，需設置生物安全操作箱(第一級或第二級)，且要做定期檢查 為了處理第二級危險群微生物，而使用容易產生氣霧的磨碎機、冷凍乾燥器、超音波細胞打碎機及離心機等儀器時，需把這些儀器放置在安全操作裝置中(第一級)。但若機器已經有防止氣霧外洩的裝置，則不在此限 實驗室需具備處理污染物及廢棄物滅菌用之高壓滅菌器，最好放置於同一房間，如有困難，則可置放於鄰近處 實驗室宜置有UV燈及雙重門，如無雙重門，則門必須為密閉式 實驗室宜設有可用腳或肘操作或自動的洗手的裝置 若在此級實驗室內同時進行P1級的實驗時，需明確劃分實驗區域，小心進行操作。非基因重組的實驗，亦需明確劃分實驗區域 進行實驗時，須關閉實驗室的門窗 防除實驗室的非實驗用生物，如昆蟲及鼠類等

生物安全等級第二級 -標準微生物操作程序- 依照生物安全等級第一級的標準微生物操作程序規定 實驗室入口必需貼有生物危害警告標誌，要有進出的規定及流程 針及尖銳物的預防措施： 使用過的針頭不要折斷、彎曲、套上蓋子或重覆使用，應單獨放置於堅固容器內，不可丟棄在一般廢棄物容器內 不要用手接觸破碎的玻璃 使用防漏運送容器 廢棄物需消毒滅菌才能移出實驗室 若有液體濺灑或發生意外，應報告 處理高濃度、大量體積、易潑濺或氣霧的感染病原時，必需在Class II生物安全操作櫃內進行

P2級防護實驗室 -基因重組實驗室守則規定- 每日實驗結束時，需滅菌實驗台，如實驗中發生污染，需立即加以滅菌消毒 與實驗有關之生物材料之廢棄物，需先滅菌後再依院方「感染性廢棄物管理」相關辦法丟棄。被污染的器具需先經高壓滅菌後，再清洗使用或丟棄 實驗室內禁止飲食、吸煙及保存食物 操作第二級危險群微生物時，需戴手套以防污染，操作完畢後及離開實驗室前，需洗手或消毒 在所有的操作中，應儘量避免產生氣霧(例如，把燒熱的接種用白金環及接種針插入培養基時，若發生大量氣霧，就可能造成污染)。亦應避免將吸管或針筒內之液體用力射出 要從實驗室搬離被污染物品時，必需將其放入堅固且不外漏的容器，並在實驗室內密封之後，才可運出

P2級防護實驗室 -基因重組實驗室守則規定- 不得用口做吸量操作 若有其他方法可用，應避免使用針頭 實驗室內，要穿著實驗衣，離開前要脫掉 禁止對實驗性質不了解的人進入實驗室 實驗進行中，要在實驗室之入口，標示「P2級實驗室」，並掛上「P2級實驗進行中」的標示。而且保存重組體之冰箱及冷凍庫也要做同樣的標示 實驗室要經常清理，保持清潔，不得放置與實驗無關的物品 安全操作裝置內的HEPA過濾器，在更換前、定期檢查時及實驗內容變更時，需密封安全操作裝置，每立方公尺用10公克的甲醛燻蒸1小時，去除污染 需遵守計畫主持人或實驗室負責人所規定之其他事項

P1及P2級實驗室比較表 隔間 洗手設備 安全操作裝置 滅菌鍋 標示 P1:需要；進行實驗時宜關閉門窗 P2:需要完善隔間；進行實驗時須關閉門窗，如果能裝置UV燈及雙重門尤佳 洗手設備 P1:需要 P2:需要(必須是能以足、肘或電子操作) 安全操作裝置 P1:實驗台(適當防污)，或用第一級安全箱櫃 P2:第一級或第二級安全箱櫃(若同時進行P1級實驗，需明確劃分實驗區域) 滅菌鍋 P1:不需要(如果有需滅菌的廢棄物，請裝在紅色滅菌袋，滅菌後才可丟棄) P2:需要(實驗相關之生物材料之污染物及廢棄物，請密裝於紅色滅菌袋，滅菌後再行清洗或丟棄) 標示 P1:不需要 P2:需要(含冰箱、冷凍庫)

生物安全等級第三級 - BSL3 or P3 Lab - 適用於有關會因吸入而造成嚴重致死的本土性或外來病原(RG3及RG4)的試驗，如臨床、診斷、研究或製造 實驗室設施設施： 為獨立建築或單獨隔離的區域 實驗室要密閉，設置緩衝區及雙門，雙門設定不可同時開啟 牆壁、天花板及地板需防水及易於清潔 需要密閉式供氣設備，單向氣流，空氣需向內流入實驗室方向(負壓)，每小時氣體交換十至十二次，廢氣不循環 高溫高壓滅菌箱需有雙門開啟(穿牆式) 具有Class I、II或III生物安全操作櫃 人員訓練要求： 實驗室人員對處理病原性及致死性病原需有特別訓練，並受具對此病原有關的操作非常熟練的研究人員的監督 視需要實施免疫措施，工作人員必須採集血清 所有感染性物質的操作，必須在生物安全箱(Class I、II或III)中進行，工作人員亦須穿戴合適的防護衣

P3級實驗室 -硬體要求- 操作重組體時，需有安全操作裝置（第一級、第二級或第三級），供產生氣霧之操作及機器在其中使用。但若機器已有防止氣霧外洩的裝置，則不在此限。 設置安全操作裝置時，需做安全檢查。HEPA過濾器之更換及使用甲醛燻蒸等操作時，需不必移動安全操作裝置就可操作。 實驗區域之入口應有緩衝室，其前後二扇門不能同時開啟，而且應有更衣室的設計。 實驗區域內需有廢水收集及滅菌之設備。 實驗區域內需放置高壓滅菌器，以供污染物及廢棄物之滅菌用。 實驗區域之地面、牆壁及天花板之表面，需使用容易清洗及可燻蒸之材料及結構。

P3級實驗室 -硬體要求- 實驗室及實驗區域的主要出口，需設有可用腳或肘操作或自動的洗手、噴臉和沖眼的設備。 實驗區域的窗戶需保持密封狀態。 實驗區域之門需能自動開關。 實驗室內之換氣裝置，需與實驗區域以外之區域分別獨立，需有實驗專用裝置的設計，換氣裝置抽氣口需備有過濾器及滅菌液之收集器。 實驗區域需設置空氣的排換氣裝置。此系統的設計需為負壓，空氣需從緩衝室流向實驗區域。從實驗區域之排氣需經過濾及其他必需處理之後方可排出。

生物安全等級第三級 -標準微生物操作程序- 依照生物安全等級第一、二級的標準微生物操作程序規定 抽氣移液管線要以含液體消毒液之U型管或以高效率顆粒空氣濾片過濾保護，以防止污染 處理感染性物質需在Class II或III生物安全操作櫃內進行

P3級實驗室-實驗實施要項 -基因重組實驗室守則規定- 基本實施要項同P1和P2級實驗室。 進入此級實驗室需戴口罩、鞋套及帽套。實驗操作時，要使用實驗用手套。使用過之手套在作業完成之後，需在不污染其他物品的情況下脫掉，滅菌處理。 實驗區域內所穿著之實驗衣需為長袖且胸前不開口，無鈕扣，從上向下套之形式。離開實驗區域時，需把實驗衣脫掉，滅菌處理後再行清洗。 實驗區域需從緩衝室進出，禁止與進行實驗無關之人員進入。 實驗進行中，要在實驗室及實驗區域之入口處，標示「P3級實驗室」，並掛上「P3級實驗進行中」的標示。而且保存重組體之冰箱及冷凍庫，也要做同樣的標示。

生物安全等級第四級 - BSL4 or P4 Lab - 適合會造成死亡的病原體之有關工作 P3實驗室規格 須於Class III的生物安全箱，或Class I或II的生物安全箱再配上一套具陽壓工作服的條件下工作

P4級實驗室 -硬體要求- 設置操作重組體用的第三級安全操作裝置，但若在特別的實驗區域內，用生命維持裝置來換氣，且穿著維持正壓之上下連接的實驗衣時，則可用第一級或第二級安全操作裝置來代替。 在實驗專用之建築物範圍或在建築物內，要明確劃分出一實驗區域，限制實驗人員以外的人靠近該地區。 實驗區域之入口需有緩衝室，其前後二扇門不能同時開啟。而且應有更衣室及沐浴室設備。 將試驗材料及其他物品搬入實驗區域時，不可經過人員出入之緩衝室及更衣室，必需另經由有紫外線照射之緩衝室。 實驗區域之地面、牆壁及天花板，應具有容易清洗、能夠燻蒸，及防止昆蟲及鼠類等侵入之結構。讓實驗區域處於適當的封閉情況，但這並不表示一定要密閉。

P4級實驗室 -硬體要求- 實驗室及實驗區域的主要出口，要設有可用腳或肘操作或自動的洗手、噴臉和沖眼的裝置。 實驗區域之大門，需能自動開關，並可上鎖。 設置中央真空系統時，在儘量靠近各使用場所配置實驗區域專用之HEPA過濾器。HEPA過濾器，應不需移動就可滅菌，並且可以改換。 供應實驗區域水及瓦斯之配管，需有防止逆流的裝置。 從實驗區搬出之物品，必需先經過高壓、浸漬或燻蒸滅菌處理。滅菌設備為通過式且兩邊門不能同時開啟。 實驗區域需有專用之空調裝置。這個裝置需為負壓，空氣從外面流入時，要設計逐漸往危險性高的區域流，同時要維持其壓力差，並且防止空氣逆流。而且需有告知錯誤情況發生的警報裝置。 在每個實驗室，空氣的再循環，需用HEPA過濾器過濾。

P4級實驗室 -硬體要求- 從實驗區域排出之氣體，需經過HEPA過濾器過濾，並避免其向附近建築物之空氣進口處擴散。所裝置之HEPA過濾器，需在不移動的情況下，就可滅菌，而且更換之後立刻做其性能檢查。 經第三級安全操作裝置處理之後的廢氣需往戶外排出。 實驗區域內需有廢水收集及滅菌之設備。 在實驗區域應設立緊急避難空間。 需備有警報裝置及緊急用的空氣供應桶。 在入口處設置空氣鎖。 需設置去除化學藥品之沐浴室。 需備有緊急用的電源，照明及電話裝置。 需備有將該區廢棄物滅菌的高壓滅菌器等。 在實驗區域內需具備兩套以上之發電設備，以使在電力供給不足時，可維持負壓狀態。

P4級實驗室-實驗實施要項 -基因重組實驗室守則規定- 基本實施要項同P1、P2和P3級實驗室。 從第三級安全操作裝置及實驗區域要把生物試驗材料在活的狀態搬出時，必需放在堅固不漏的容器，並且要通過浸漬槽或是燻蒸滅菌室。搬入時需做同樣的處理。 進入此級實驗室需戴口罩、鞋套及帽套。穿著包括內衣、褲子、襯衫、實驗衣、鞋子、頭巾及手套的完整實驗服裝。從實驗區域出去時，在進沐浴室之前要把這些衣物脫掉，放入收集箱內。 實驗區域所有的門，及保管重組體的冷凍庫和冰箱，要懸掛「生物性危險品」標示。 從安全操作裝置及實驗室洗滌處流出之廢液，要加熱滅菌。浴室、洗手及衛生設備的排水，需經過化學處理滅菌。 在該實驗室內，禁止同時進行級數較低的其他實驗。

Laminar Flow "Clean Bench"

HEPA Filter HEPA (High Efficiency Particulate Air) filter filters particles to 0.3 microns at 99.97% efficiency. Where particulates such as toxic powders and fibers are of concern, a HEPA filter may be installed.

Class I Biological Safety Cabinet & Chemical Fume Hood The Class I BSC provides personnel and environmental protection, but no product protection.

The Class II, Type A1 BSC 30% 70% 下吹氣流 >0.5 m/sec 通常可分為一般生物性作業時使用之A型，及操作含有少量有害危險化學物質、放射性物質、氣體、致癌物質等HEPA過濾器無法有效捕集去除之物質之作業時使用之B型 下吹氣流 >0.5 m/sec

The Class II, Type B1 BSC 70% 70% 30% 30% 下吹氣流 >0.5 m/sec

The Class II, B2 & B3 BSC 排氣管路與氣室、循環管道需設計為負壓 30% 100% 70% Type B2 Type B3 (A2) 下吹氣流 >0.5 m/sec

The Class III BSC P4 lab必備 負壓值通常約為0.124 kPa

Biological Safety Cabinet

Chemical or Radiological Hazards in the BSC BIBO

操作放射性同位素 放射性同位素的保存 操作應注意事項 防護訓練及防護設備 專用儀器及微量分注器 廢棄物處理 污染清除 蓋氏計數器(Geiger counter) 同位素半衰期 3H: 12.26 years 32P: 14.3 days 35S: 87.4 days 14C: 5760 years 125I: 60 days 60 Co: 5.27 years

生物安全操作箱內物品的置放

Aspirator bottles or suction flasks

基因重組實驗室安全防護標誌

滅菌及消毒 高壓蒸氣滅菌(Autoclave) 紫外光滅菌 70% Ethanol or 50% Isopropanol 滅菌方法：高壓蒸汽滅菌121℃，15 p.s.i.，15~40 min 適合所有污染物之殺菌 滅菌指示帶、滅菌專用塑膠袋、滅菌用不銹鋼桶或盤 紫外光滅菌 無菌室或BSC使用前後，或污染區域照射 至少30 min 70% Ethanol or 50% Isopropanol 皮膚或桌面和地面的污染 次氯酸鈉(Hypochloride, 高力士漂白水) 1~20%稀釋液 桌面和地面污染；器械、塑膠和玻璃器皿之殺菌處理 中性肥皂或洗手乳 洗手用

實驗室物品的清洗 一般玻璃器皿先以清潔劑（沙拉脫）浸泡刷洗，自來水洗淨，二次去離子水沖洗後，陰乾或烘乾備用 有培養或污染病原微生物、或其他重組DNA實驗使用的微生物時，應先將器皿滅菌後，再清洗 有沾染蛋白質的器皿，應在使用後清洗前，浸泡於含清潔劑的水中 有沾染微生物或病毒的器皿，在使用後清洗前，應浸泡於含次氯酸鈉（漂白水）的水中

實驗室沖洗裝置 全身淋浴沖洗裝置 洗眼器 沖洗裝置的日常保養 勿把玩沖洗裝置 沖洗器 洗眼器 洗眼器

污染或感染的處理 立即報告老師 污染面除污、洗淨和消毒 脫下污染衣物，浸泡於漂白水中至少30分鐘，再以洗衣機洗淨並烘乾 必要時，就醫觀察，並告知污染病原種類，或投予預防性抗生素 必要時，通知疾病管制局或動植物防疫檢疫局

實驗室成員安全管理 基本的生物和化學實驗安全訓練 無菌操作技術訓練 儀器使用訓練和儀器使用紀錄 實驗物品清洗、準備、和滅菌訓練 第二級及以上病原的操作防護訓練 平時清潔維護工作 必要時，得於實驗前及計畫結束後，採集操作者血清，並作抗體測試 必要時，得準備特定抗生素、抗病毒藥物、抗血清或疫苗備用

管理制度和人 前述實驗室感染個案 醫療院所群聚感染事件 合宜且易於執行的管理制度 安排合理的工作量，工作不宜太累 竹東榮民醫院疑似發生退伍軍人病的群聚感染，其護理之家也發生Norovirus感染 反映了護理、看護人員的照護及衛生觀念有待加強 院內空調設施的清洗，熱水管路的消毒 振興醫學復健中心院內員工感染肺結核群聚事件 合宜且易於執行的管理制度 安排合理的工作量，工作不宜太累

儀器使用應注意事項 第一次使用前，須經資深人員講解，並詳讀使用手冊或接受訓練講習並考核通過： 注意儀器使用的電壓及接地。 如超高速離心機、高壓蒸氣滅菌鍋爐、放射性儀器、電泳設備、蒸餾設備等。 注意儀器使用的電壓及接地。 使用前，注意儀器設定情形，和上次使用紀錄。 使用後，復原設定(即歸零)，並紀錄使用情形。

實驗室常發生的意外 觸漏電意外 地震：化學藥品墜落、實驗儀器傾倒 火災：如Oven過熱、電線走火、酒精燈使用不當、化學反應爆炸等。 離心機使用不當導致的意外：如離心座未掛好、離心樣品未平衡、離心座腐蝕、低溫跑CsCl等密度離心等。

實驗室常發生的意外 酸、鹼、腐蝕性、毒性藥品所導致的傷害 實驗桌面污染所導致的傷害 切割所導致的傷害 紫外光(UV light)傷害 如SDS、acrylamide、 phenol (酚)、CH3HgOH(氫氧化甲基汞)、EtBr等 Phenol蒸餾時，不能以水來冷卻 實驗桌面污染所導致的傷害 殘留化學藥物或病原性微生物 切割所導致的傷害 紫外光(UV light)傷害 放射性同位素污染 自殺、殺人：感情因素、工作或學業壓力 墜樓意外

實驗室藥品存放注意事項 揮發性藥品需存放於有排氣裝置的儲存櫃。 有機或酸鹼藥品的操作，須於Chemical hood中進行。 易潮解的藥品需存放於乾燥箱。 液體化學品勿置放於高處。 會相互作用，產生劇烈化學反應的藥品，應分開儲存。 避免以金屬箱櫃儲存具金屬腐蝕性的藥物。 藥品應儲存於建議的溫度，如4~8℃、-20℃等。 放射性同位素應存放於有鎖的-20℃冰櫃。

毒性化學物質操作場所標示

Ethidium Bromide (EtBr)的處理 一種突變原(Mutagen)，用於核酸電泳染色 Less than 0.1% ethidium bromide: place in laboratory trash More than or equal to 0.1%: place in biohazard bags and tag for pickup and incineration Aqueous solutions containing <10 ug/ml EtBr can be released to the sanitary sewer. (Make sure you maintain a drain log) 可用波長~300 nm的UV來作污染偵測，用沾水紙巾來除污

EtBr Deactivation Methods:

EtBr Deactivation Methods:

預防環境污染 排水 空氣排放 病材或生物性材料的輸送 防蟲鼠 自我管理 獨立系統、滅菌處理、污水處理 過濾 避免出入牧場或接觸其他可能被感染的動植物 避免出入公共場所