第四章 微生物的生化试验和血清学试验

第一节 细菌的生化试验

一、概述 （一）、什么是生化试验? 指通过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的试验。

（二） 检验细菌的生化试验范围 1、糖（醇）类代谢试验 2、氨基酸和蛋白质代谢试验 3、有机酸盐和铵盐的利用试验 4、呼吸酶类试验 5、毒性酶类试验

（三）生化试验的方法 在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培养后,观察培养基的PH值变化。 在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。 根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。 根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。

（四）生化试验的注意事项 1、待检菌应是新鲜培养物。培养18~24h。 2、待检菌应是纯种培养物。 3、遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为24或48小时。 4、应做必要的对照试验。 5、提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑似菌落分别进行试验。

二、糖醇类代谢试验 （一）糖醇类发酵试验 （二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验 （三）V-P试验 （四）甲基红（Methyl Red）试验 MR （五）七叶苷水解试验 （六）甘油品红试验

（一） 糖醇类发酵试验 1.原理：不同的细菌对各种糖醇的分解能力及所产生的代谢产物各不同，有的能分解多种糖醇），有的只能分解1~2种糖醇 ，有的分解糖醇能产酸产气，有的分解糖醇只产酸不产气，根据这些特点，可鉴别细菌。

常用的糖醇 单糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖 双糖：乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖 三糖：棉子糖 多糖：菊糖、肝糖、淀粉 醇类：甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇

2、试验方法： 用接种针或环移取纯培养物少许，接种于糖发酵管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。置36±1.0℃ 培养1~3天，每天观察结果。

3、结果观察和记录 记录： 产酸不产气，阳性，以“+”表示 产酸产气，阳性，以“⊕”表示 不产酸产气，阴性，以“-”表示

气泡 气泡 气泡 导管 阳性 阴性 阳性 培养基变为黄色 培养基未变色、无气泡产生

（二）葡萄糖氧化发酵（O/F）试验 1、原理： 　1、原理： 细菌对葡萄糖的分解，分为氧化型和发酵型。氧化型细菌在有氧的条件下才能分解葡萄糖，无氧的条件下不能分解葡萄糖；发酵型细菌在有氧无氧条件下均可分解葡萄糖；不分解葡萄糖的细菌称为产碱型。根据糖管的色泽变化可鉴别细菌。　

2、方法 取待检菌，以穿刺法接种于两管葡萄糖半固体培养基上，在其中一管加入一层（约1Cm）灭菌的液体石蜡以隔绝空气，在37℃培养2~4h天，每天观察结果。

3、结果观察与记录 封油管 未封油管 发酵型 产酸（黄色） 氧化型 不产酸（绿色） 产碱型

（三） V-P试验 1、原理：某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为双乙酰，在α-萘酚和肌酸的催化作用下，双乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。

2、试验方法 （1）奥梅拉（O’Meara）法 （2）贝立脱（Barritt）氏法 （3）快速法

（１）奥梅拉法： 将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于36±1 ℃培养48h， 每1ml培养液加奥梅拉O’Meara试剂0.1ml，摇动试管1~2min，静置于37℃恒温箱4h ，或在48~50 ℃水浴放置2h后判定结果。

（2）贝立脱法： 将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于36±1℃培养2天，每2ml培养液先加入6%a-萘酚纯酒精溶液1ml，再加40%氢氧化钾水溶液0.4ml，摇动2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1 ℃培养 4h ，如显现红色为阳性，呈黄色或有类似铜色者，可判定为阴性。

（3）快速法： 将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中，挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5%α-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果。不产酸的培养物不能使用。

3、结果观察与记录 （1）发酵管出现红色者，为阳性， 记V-P + （2）发酵管为黄色或铜绿色者，为阴性，记 V-P -

（四）甲基红试验（MR） 1、原理　细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后，由于代谢的途径不同，有的细菌可使丙酮酸转化生成乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红色，为甲基红试验阳性 ；有的细菌使丙酮酸脱羧后形成酮、醇类中性产物，培养液pH＞5.4，甲基红指示剂呈桔黄色，为甲基红试验阴性。

2、试验方法： 挑取新鲜的待试培养物少许，接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于36±1 ℃或30 ℃（以30 ℃较好）培养3~5天，从第48h起，每日取培养液1ml，加入甲基红指示剂1~2滴，立即观察结果。

MR-VP试验原理及照片 V-P

3、结果观察与记录 （1）呈鲜红色或橘红色为阳性，呈淡红色为弱阳性，记MR +；

MR + MR -

（五） 七叶苷水解试验 １、原理：七叶苷被细菌分解后，生成葡萄糖和七叶素，七叶素与Fe2+结合，生成黑色化合物，使培养基呈黑色，以此鉴别细菌。

2、试验方法： 将待试纯培养物少许，接种于七叶苷培养基，于36±1 ℃培养24h,观察结果。

3、结果观察与记录 （1）培养基变为黑色或棕黑色者，为阳性，记录为 + （2）培养基不变色者，为阴性，记录为 -

（六） 甘油品红试验 1、原理： 某些细菌可分解甘油成为丙酮酸，并进一步脱羧生成乙醛，乙醛与无色品红生成醌式化合物，呈深紫红色，以此鉴别细菌。

2、试验方法： 取待检菌的新鲜纯培养物，接种于甘油品红肉汤培养基中，于36±1 ℃培养8天,并用未接种的培养基在相同条件下培养作为阴性对照，观察结果。

3、结果观察与记录 （1）出现紫色或紫红色者,为阳性，记录为+； （2）与对照管颜色相同者,为阴性，记录为-

复习题 1、什么是生化试验? 2、做生化试验要注意哪些事项？ 3、简述糖醇类发酵试验的原理，写出其试验方法和结果的记录 5、简述甲基红试验（MR）的原理，写出其试验方法和结果的记录

三、氨基酸和蛋白质代谢试验 （一）靛基质（吲哚）试验 （二）H2S试验 （三）尿素酶试验 （四）氨基酸脱羧酶试验 （五）苯丙氨酸脱氨酶试验 (六) 明胶（Gelatin）液化试验

（一） 靛基质试验 1、原理：某些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚）。吲哚与对二甲氨基苯甲醛结合，可形成红色化合物，即玫瑰吲哚，以此鉴别细菌。　

2、试验方法： 所用试剂: （1）柯凡克(Kovacs)试剂; 或 （2）欧—波试剂

将待检菌小量接种于培养基中，于36±1 ℃培养24~48h时后，加入柯凡克试剂数滴，轻摇试管，呈红色者为阳性。 或沿试管壁缓慢加入欧-波试剂约0.5ml覆盖液面，两液接触处呈现玫瑰红色者，为阳性反应，无红色者为阴性反应。

靛基质试验原理及照片 靛基质+

3、结果观察与记录 呈现玫瑰红色，为阳性反应，记+ 无红色者，为阴性反应，记-

（二） 硫化氢（H2S）试验 1、原理： 某些细菌可分解培养基中的含硫氨基酸或含硫化合物，产生硫化氢，硫化氢遇铅盐或铁盐可生成黑色沉淀物PbS或FeS，以此鉴别细菌。

2、试验方法： 挑取待检菌，用穿刺接种法接种于三糖铁培养上，于36±1℃培养24~48h，观察结果。

3、结果观察与记录 培养基底部呈黑色，为阳性，记+ 培养基底部无黑色，为阴性，记-

（三） 尿素酶试验 1、原理： 某些细菌能产生尿素酶，将尿素分解产生氨，氨使培养基变为碱性，使培养基中的酚红指示剂呈粉红色，培养基由黄色变为红色，为阳性。以此鉴别细菌。　

2、试验方法： 挑取大量培养18~24h的待试菌，浓密涂布接种于尿素琼脂斜面上，不要到达底部，留底部作变色对照。培养2、4和24h分别观察一次结果，培养基变为粉红色为阳性，颜色不变者为阴性。如阴性应继续培养至4天，作最终判定。

尿素酶试验图 阳性

3、结果观察与记录 培养基变呈粉红色，为阳性，记 + 培养基颜色不变，为阴性，记 -

（四） 氨基酸脱羧酶试验 1、原理： 某些细菌能产生氨基酸脱羧酶, 可使赖氨酸、鸟氨酸生产脱羧作用, 生成胺类物质和CO2。胺类物质使培养基呈碱性变紫色，为阳性, 如呈黄色为阴性，以此鉴别细菌。

2、试验方法 取待检菌，分别接种于含有氨基酸的培养基内和不含氨基酸的对照培养基内，在36±1 ℃培养1~4天，每天观察结果。

3、结果观察与记录 试验管呈紫色，对照管呈黄色，为阳性，记 + 试验管、对照管都呈黄色，为阴性，记 -。

对照管变黄 试验管变黄 试验管 对照管 阳性+ 阴性-

阳性反应试验管颜色变化过程 紫色→黄色→紫色 原理： 对照管呈黄色，说明有细菌生长。在培养的早期（10~12h），细菌发酵葡萄糖产酸使培养液PH下降，指示剂溴甲酚紫由紫色变为黄色，以后由于氨基酸脱羧生成胺，PH又回升至碱性，指示剂显紫色。

阳性反应试验管颜色变化过程： 紫色→黄色→紫色

（五） 苯丙氨酸脱氨酶试验 1、原理： 某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，苯丙酮酸与氯化铁作用生成绿色化合物，以此鉴别细菌。

2、试验方法 从待检菌琼脂斜面上挑取大量培养物，接种于苯丙氨酸培养基上，在36±1 ℃培养18~24h后，加入氯化铁溶液4~5滴，转动试管，使试剂与菌苔表面充分接触，立即观察结果。

3、结果观察与记录 试验管立即出现绿色，为阳性，记 + 无色为阴性，记 -。

加氯化铁试剂 出现绿色+

（六） 明胶液化试验 　1、原理 　有些细菌具有明胶酶（亦称类蛋白水解酶），能将明胶先水解为多肽，又进一步将多肽水解为氨基酸，明胶失去凝胶性质，使培养基由固态变为液态。

2、试验方法 挑取培养18~24h的待试菌，以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度。于20~22℃培养7~14天。明胶高层亦可培养于36±1℃。另取一支未接种的培养基一同培养作对照，每天取出两支试管，放入冰箱放置20~30min后，再观察结果。

3、结果观察与记录 明胶液化，为阳性，+。 明胶凝固，为阴性，-。

复习题 1、简述靛基质试验的原理，写出其试验方法、结果的记录和注意事项 2、简述硫化氢试验的原理，写出其试验结果的记录和注意事项 3、简述尿素酶试验的原理，写出其试验方法、结果的记录 4、简述氨基酸脱羧酶试验的原理，写出结果的记录、阳性反应试验管颜色变化过程和原理

四、 有机酸盐和铵盐的利用试验 枸橼酸盐利用试验 丙二酸盐利用试验

（一） 枸橼酸盐利用试验 1、原理： 某些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一碳源，分解枸橼(柠檬)酸盐生成碳酸盐；同时分解培养基的铵盐生成氨，使培养基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿转为深蓝色，为阳性。

2、试验方法 挑取待检菌，在西蒙枸橼酸盐培养基斜面上密集划线接种，在36±1 ℃培养1~4天，每天观察结果。

3、结果观察与记录 斜面有菌苔生长，培养基斜面变为蓝色或深蓝色，为阳性，记+； 无菌苔生长，培养基斜面仍为绿色者，为阴性，记-

枸椽酸盐试验原理及斜面照片 阳性+

（二） 丙二酸盐利用试验 1.原理: 某些细菌可以利用培养基中的丙二酸盐作为唯一碳源,丙二酸盐被分解成碳酸钠,使培养基变为碱性,培养基由草绿色变成蓝色，为阳性，以此鉴别细菌。

2、试验方法 取待检菌新鲜纯培养物，接种于丙二酸钠培养基上，于36±1 ℃培养48h，观察结果。

3、结果观察与记录 培养基由草绿色变成蓝色,为阳性,记+; 培养基无颜色变化,为阴性,记-

五、 呼吸酶类试验 氧化酶试验 过氧化氢酶试验 硝酸盐还原试验 氰化钾试验

（一） 氧化酶试验 1.原理: 氧化酶使细胞色素C氧化后，氧化型细胞色素C再使盐酸二甲基对苯二胺氧化，使生成玫瑰红色到暗紫色的醌类化合物,再和α-萘酚结合,生成吲哚酚蓝,呈蓝色反应，为阳性。

试剂 1% α-萘酚-乙醇液 1%盐酸二甲基对苯二胺

2、试验方法 用滴管直接滴加1%盐酸二甲基对苯二胺试剂1~2滴在培养物上,再加入1% α-萘酚-乙醇液1~2滴, 在30秒内判定试验结果。

3、结果观察与记录 在30秒内呈蓝色反应,为阳性,记 + 不变色或为红色者,为阴性,记 -

不变色或为红色为- 成蓝色为+

（二） 过氧化氢酶试验 1.原理： 某些细菌可分泌过氧化氢酶，加入过氧化氢后，可将过氧化氢分解生成水和氧气，产生气泡，即为阳性反应。

2、试验方法 挑取固体培养基上的新鲜菌落一环，置于洁净玻片上（或试管），滴加3%过氧化氢液数滴，或在琼脂斜面培养物上直接滴加过氧化氢液，立即观察结果。

3、结果观察与记录 产生气泡者，为阳性，记+ 不产生气泡者，为阴性，记-

（三）硝酸盐还原试验 1、原理：某些细菌具有还原硝酸盐的能力，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐，在酸性条件下，亚硝酸盐可生成亚硝酸，亚硝酸与对氨基苯磺酸作用，生成重氮苯磺酸，重氮苯磺酸再与α-萘胺作用，生成红色的化合物，呈红色反应，为阳性反应。

试剂 A、对氨基苯磺酸试剂 B、α-萘胺试剂

2、试验方法 取待检菌新鲜纯培养物，在硝酸盐培养基上接种，在36±1 ℃培养1~4天，每天取2mL培养液,加入A、B试剂的等量混合物各二滴混匀，立即观察结果。

3、结果观察与记录 呈现红色，为阳性，记+ 若无红色出现，为阴性，记-

（四） 氰化钾试验 1.原理： 氰化钾是细菌呼吸酶系统的抑制剂,可与呼吸酶作用使酶失去活性,抑制细菌的生长,但有的细菌在一定浓度的氰化钾存在时仍能生长,以此鉴别细菌.

2、试验方法 取培养20～24h的营养肉汤培养液或菌落1环，接种至对照培养基及氰化钾培养基内，立即以橡胶塞塞紧，36±1 ℃培养24～ 48h，观察结果。

3、结果观察与记录 对照管有菌生长，试验管有菌生长为阳性，记+。 对照管有菌生长，试验管无菌生长为阴性。记-。

六、毒性酶类试验 溶血试验 链激酶试验 卵磷脂酶试验 血浆凝固酶试验

（一） 溶血试验 1、原理： 某些细菌在代谢过程中能产生溶血素，可使人或动物的红细胞发生溶解，不同的细菌有不同的溶血反应，借此可鉴别细菌。

2、试验方法 有二种： 平板法 试管法

平板法 将培养物接种于血平板培养基上，36±1 ℃培养24～ 48h，观察结果。

溶血试验的溶血类型及现象 （1） α（甲型）溶血: 菌落周围出现较窄的半透明的草绿色溶血环。 （2） β （乙型）溶血: 菌落周围出现较宽的透明溶血环。 （3）γ（-丙型）溶血: 菌落周围无溶血环。

丙型（γ-）溶血 乙型（β-）溶血 甲型（α-）溶血

试管法 将待检菌培养液与等量的2%羊血球混合，在36±1 ℃培养16～ 18h，观察结果。如溶血，培养液可出现透明状。

3、结果观察与记录 有溶血现象，为阳性，记+； 无溶血现象，为阴性，记 -

（二） 链激酶试验 1、原理： A群链球菌群能产生链激酶，该酶能使血液中的纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶，而后溶解纤维蛋白，使血凝块溶解 ,为阳性反应。 此试验用于测定链球菌的致病性。阳性反应具有致病性。

2、试验方法 吸取草酸钾血浆0.2 mL(0.01 g草酸钾加5 mL兔血浆混匀，经离心沉淀，吸取上清液)，加入0.8 mL生理盐水，混匀后，再加入待检菌36℃下培养18-24h肉汤培养物0.5 mL和0.25％氯化钙0.25 mL，混匀，放37℃水浴中，2 min观察一次。

待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2 h内不溶化，继续放置24 h后观察。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。

3、结果观察与记录 如凝块全部溶化,为阳性+， 凝块24 h仍不溶化,为阴性-

（三）卵磷脂酶试验 1、原理： 某些微生物能产生卵磷脂酶，在钙离子存在时，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸胆碱，在卵黄琼脂平板上菌落周围形成不透明的乳浊环或混浊白环，或使血清、卵黄液变混浊，以此鉴别细菌。

2、试验方法 （1）卵黄平板法： A法： 将待检菌培养物划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，36±1 ℃培养3～ 6h，观察结果。

菌落 白色混浊环，

B 法： 先用卵黄磷脂酶抗血清将平板涂一半，置于36 ℃待干后，将待检菌接种于未涂抗血清的一半卵黄琼脂平板上，再转划已涂过抗血清的一半，36±1 ℃厌氧培养24～ 48h，观察结果。 在未涂抗血清的一半平板上，菌落周围形成较大的不透明乳白色混浊区，在涂抗血清的一半平板上，菌落周围无不透明混浊区，为阳性。 两边均无不透明区，为阴性。

菌落周围 有混浊白环 菌落周围 无混浊白环 乳糖卵黄琼脂平板,借以确定该菌可否产生卵磷脂酶。卵磷脂酶具抗原性，其活性可被相应抗血清所抑制，

（2）卵黄盐水法 将庖肉培养基培养物经除菌过滤，收集滤液。在两支灭菌试管内，每管加入1%卵黄盐水0.4mL,在一管中加入滤液0.2mL，另一管加入生理盐水0.2mL作对照。在36 ℃ 水浴中，经2h、 4h、 8h、 24h观察结果。 管底发生混浊沉淀，对照管无沉淀者，为阳性。

3、结果观察与记录 菌落周围形成较大的不透明区，为阳性。 两边均无不透明区，为阴性。 管底发生混浊沉淀，对照管无沉淀者，为阳性。 两管无沉淀者，为阴性。

（四） 血浆凝固酶试验 1、原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，附着在细菌的表面，形成凝块；或作用于血浆凝固酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使抗凝的血浆发生凝固现象,为阳性。

2、试验方法 （1）玻片法： 取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔（人）血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，5 min内,如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊，则为阳性;如两者呈均匀混浊，无凝固则为阴性。

有凝块 均匀混浊 血浆 生理盐水 血浆凝固酶试验

（2）试管法 取灭菌小试管3支，各加入血浆①－无菌水(1:1)0.5ml，1支加入被检菌株的营养肉汤培养液（或浓菌悬液）0.5ml；其余2支作对照管，1支加入金黄色葡萄球菌的营养肉汤培养液或菌悬液0.5ml作阳性对照;另1支加入营养肉汤或0.9％氯化钠溶0.5ml作空白对照。将3管同时放37℃温箱或水浴中培养，每0.5 h观察一次， 4 h 内无凝固现象者，观察直至24小时。

阳性反应 阴性反应 不凝固 少量、零散凝固 明显的块状凝固 完全凝固，倒置不流动 巨大块凝固

金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验

3、试管法的结果观察与记录 空白对照管的血浆流动自如，阳性对照管血浆凝固，试验管血浆凝固者为阳性； 均无凝固则为阴性。

七、 三糖铁（TSI）试验

1、三糖铁试验的原理 如果细菌可利用乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气，培养基全部变黄；如果只可以利用葡萄糖，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面最后为红色，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，仍保持黄色。 如果细菌又能分解含硫化合物，产生硫化氢，培养基底部变黑。

斜面红色，底面黄色 培养基全黄色 斜面、底部黄色，并产生H2S 制好的培养基 斜面红色，底部黄色，产生H2S 底面黄色，并产生CO2 对照管

2、试验方法 以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。

思考题 提问： 志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。在培养基上应该产生什么现象？

下面照片所示2-3-4，可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏菌？ 答案： 2－志贺氏菌　3－沙门氏菌　　4－大肠杆菌

复习题 1、什么是生化试验? 2、做生化试验要注意哪些事项？ 3、简述糖酵解试验的原理，写出其试验方法和结果的记录 4、简述甲基红试验（MR）的原理，写出其试验方法和结果的记录 5、简述靛基质（Imdole） (吲哚)试验的原理，写出其试验方法、结果的记录和注意事项 6、简述硫化氢（H2S）试验的原理，写出其试验结果的记录和注意事项

7、简述尿素酶（Urease）试验的原理，写出其试验方法、结果的记录 8、简述氨基酸脱羧酶试验的原理，写出结果的记录、阳性反应试验管颜色变化过程和原理 9、简述氰化钾试验的原理，写出其试验方法、结果的记录和注意事项

10、写出溶血试验的溶血类型及现象 11、简述链激酶试验的原理， 12、简述血浆凝固酶试验的原理，并写出玻片法的试验方法 13、简述三糖铁（TSI）试验的试验的原理

第二节 血清学试验 血清学反应： 指相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，所出现肉眼可见的沉淀、凝集现象。

一、抗原与抗体

（一）抗原 1、抗原的概念 　　 抗原(Ag)：是指凡能刺激机体免疫系统诱导免疫应答，并能与应答产生的抗体或致敏淋巴细胞发生特异反应的物质。

2、抗原的特性 免疫原性 免疫反应性

（二）抗体 1、抗体 是指机体内的淋巴系统细胞在抗原物质的激发下，所合成的一种具有特异性免疫功能的球蛋白(免疫球蛋白)。

2、抗体的理化性质 （1）抗体是球蛋白 （2）免疫球蛋白

                                                                                                   图2-1 兔血清电泳分离图

其后，经对不同免疫血清的电泳分析，超速离心分析和分子量测定等方法，发现大部分抗体活性存在于γ球蛋白内，但有小部分抗体活性可存在于β球蛋白内。它们的离心常数分别为7S和平共处9S，分子量分别为16万和万。因此它们分别被命名为7Sγ球蛋白分子（16万）19S,β2巨球蛋白分子(β2M,90万)和β2A球蛋白分子，所以从早期对抗体性质的研究证明抗体不是由均质性球蛋白组成，而是由异性球蛋白组成。 图2-2 不同类免疫球收白的电泳分离图

（三）抗原抗体反应   抗原抗体反应： 是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应

1、抗原抗体反应的化学本质 （1）结构基础

（2）、化学变化： ① 四种分子间作用力参与并促进Ag-Ab的反应 电荷引力 范登华引力 氢键结合力 疏水作用

抗原抗体反应的胶体状态的变化过程总结如下。 ②理化性质改变：亲水胶体转化为疏水胶体 抗原抗体反应的胶体状态的变化过程总结如下。 Ag+Ab (AgAb) n 特异性结合 AgAb 电解质 亲水胶体 带电荷的疏水胶体 疏水胶体凝集

　　2. 反应过程： ①不可见阶段 ②可见阶段

二、血清学反应的特点： 1、具有特异性与交叉性 2、具有敏感性 3、具有定理特性。 4、反应的两个阶段性 5、反应的稳定性与可逆性的。

图9-1沉淀反应中没淀量与抗原抗体的比例关系                          图9-1沉淀反应中没淀量与抗原抗体的比例关系 Ag：抗原；Ab：抗体

三、影响血清学试验的的因素 1.抗体 2.抗原 3. 电解质: 常用:0.85％氯化钠或各种缓冲液 作用:中和胶体粒子上的电荷，使胶体粒子的电势下降，促使抗原抗体复合物从溶液中析出，形成可见的沉淀物或凝集物。 4. 酸碱度: pH为6～8进行 5. 温度:一般以15~40℃为宜，最适为37℃，

四、 血清学反应的种类 1、凝集反应 2、沉淀反应 3、中和反应 4、标志抗体技术

（一）凝集试验 颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应

鲜血者红细胞 受血者血清 O型(抗A、抗B) A型(抗B) B型(抗A) AB型(无) O型 - A型 + B型 AB型 注:“+”表示有凝集反应,“-”表示无凝集反应

（二）、 凝集试验的方法 1．直接凝集法 　 2．间接凝集法 　 3．抗球蛋白试验

（三）、直接凝集试验 1、玻片凝集法 （1）原理:用已知抗体作为诊断血清，来检测未知抗原,以鉴定相应的抗原。

（2）方法步骤: ①、于洁净玻片的一端加诊断血清1滴，另一端加生理盐水1滴作为阴性对照。 ②、用接种环取待检菌或血细胞的悬液分别涂于诊断血清和生理盐水中。 ③、轻轻转动玻片，使其充分混匀，静置数分钟，观察结果。

待检菌 抗血清 生理盐水 凝集者为+ 未凝集

（4）诊断血清及类型 诊断血清：将已知的抗原注射于动物体，使其产生相应的抗体，采出动物的血液，分离出含有大量抗体的血清，称为诊断血清（或抗血清、免疫血清） 抗O血清：用菌体抗原（O抗原）免疫动物后所获得的血清。 抗H血清：用鞭毛抗原（H抗原）免疫动物后所获得的血清。 表面抗原血清：用含有表面抗原的菌体免疫动物后所获得的血清。

多价诊断血清：用含有两种（型）的菌体免疫动物后所获得的血清。 单价诊断血清：只含有一种（型）特异性抗体的血清。 因子诊断血清： 把含有多种抗体的混合免疫血清，用具有共同抗原成分的有关细菌将其共同抗体吸收，只留下一种或几种所需的特异性抗体的血清。

诊断血清的使用与保存 保存：2~10 ℃冰箱； 无菌取用，有效期2年

（四）试管凝集法 操作方法 1、制备待检菌悬浮液： 1~2×108个/ml，

2、稀释待检血清： 取10支试管，依次编号，用吸管加入生理盐水，第1管0.9ml，其余各管均为0.5ml。然后吸取0.1ml待检血清加入第1管内，吹打3次，使混匀，该管含1:10稀释血清。接着用同一吸管从第1管吸出0.5ml加入第2管内，按上法混合，以同法连续稀释至第9管，从该管内吸取0.5ml弃去。如此每管内所含受检血清浓度为前一管的一半，即1:10、1:20、1:40…1:2560，最后一管留作对照。

3、加入抗原：各管加入诊断菌液0.5ml，振摇试管架，充分混匀 4、保温静置：鞭毛凝集反应最好先37℃静置2h，初步判读结果，然后移放冰箱过夜，再次判读。菌体凝集试验需较高的温度和较长的时间，最好是放37℃后，移置55℃ 24h。而布鲁菌凝集反应以放置55℃2天最佳。

试管凝集试验稀释步骤 试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 对照 生理盐水（ml) 0.9 0.5 稀释血清（ml) 0.1 血清稀释度 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 菌悬浮液（ml) 血清最后稀释度 1:5120

结果记录 （1）完全凝集：凝集块完全沉于管底。上层液体澄清，以++++记录 （2）凝集块沉于管底。上层液体稍混浊，以+++记录 （3）部分凝集，上层液体混浊以++记录 （4）很少凝集，液体较混浊以+记录 （5）与对照管相同，无变化，以-记录

复习题 1、血清学反应、抗原、抗体、抗原抗体反应的概念 2、影响血清学试验的因素有哪些？ 3、血清学试验常用的电解质有哪些，有什么作用？ 4、写出血清学试验中玻片凝集法的原理和试验的方法步骤。 5、诊断血清、抗O血清、抗H血清、多价诊断血清、单价诊断血清、因子诊断血清的概念

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