Mechanism of RNAi (shRNA/miRNA）) FulenGen
Comparison of shRNA and miRNA properties Architecture short hairpin Single-strand Original Exogenous Endogenous No. of intended target 1 Many Degree of gene silence High Low Complementary to mRNA target Perfect Imperfect Effect on mRNA Endonucleolytic cleavage Repressed translation FulenGen
shRNA 表达克隆的载体 针对不同的细胞，选择相应的载体 FulenGen
经过验证的人类激酶组shRNA表达克隆 350个人类激酶基因的确证shRNA表达克隆 表达抑制效应都经过验证，达70％以上 低的脱靶效应。 FulenGen
——用于在mRNA水平验证shRNA的干扰效率 荧光定量PCR验证引物库 ——用于在mRNA水平验证shRNA的干扰效率 FulenGen
MicroRNAs 由RNA Polymerase II转录 Exonic Non-coding Intronic Non-coding and coding Lee, et al., EMBO J. 23:4051-60 2004 FulenGen
mature and primary microRNA 的结构 5‘ 3’ Mature Drosha Cleavage site Pri-miRNA /~-OH FulenGen
miRNA克隆表达载体 现有808个Precursor miRNA 装在这个表达载体上 FulenGen
miRNA与肿瘤 microRNA 肿瘤发生 miR-9 神经母细胞瘤 miR-10b 乳腺癌 miR-15、miR-15a 肿瘤发生 miR-9 神经母细胞瘤 miR-10b 乳腺癌 miR-15、miR-15a 白血病、垂体腺瘤 miR-16、miR-16-1 miR-17-5p、miR-17-92 肺癌、淋巴瘤 miR-20a miR-21 乳腺癌、胆管腺癌、 头颈癌、白血病、宫颈 癌 miR-29、miR-29b 白血病，胆管腺癌 miR-31 结肠直肠癌 miR-34a 胰腺癌 miR-96 miR-98 头颈癌 miR-103 胰腺癌 miR-107 白血病、胰腺癌 miR-125a、miR-125b 神经母细胞瘤、乳腺癌 miR-128 胶质母细胞瘤 miR-133b miR-135b
FulenGen miR-143 结肠癌、宫颈癌 miR-145 乳腺癌、结肠直肠癌 miR-146 甲状腺癌 miR-155 乳腺癌、白血病、胰腺癌 miR-181、miR-181a、miR-181b、miR-181c 肺癌、白血病、胶质母细胞瘤、甲状腺癌 miR-183 直肠结肠癌 miR-184 神经母细胞瘤 miR-196a-2 胰腺癌 miR-221 胶质母细胞瘤、甲状腺癌、胰腺癌 miR-222 miR-223 白血病 miR-301 miR-376 let-7、let-7a、 let-7a-1、hsa- let-7a-2、let-7a-3 肺癌、结肠癌 FulenGen
利用PAP（Poly A Polymerase） 加尾法 Mature miRNA的检测 利用PAP（Poly A Polymerase） 加尾法 通用性高；适用于同一样本检测多种miRNA 经济、方便 FulenGen
miRNA Primer Array 个性化Primer Array提供的六种排布形式，如上所示（不同颜色代表检测样品，同色中的各孔代表检测的各个基因）：A.每96-well-Plate可进行8基因、12个样品的检测； B.每96-well-plate 可进行16基因、6样品检测； C.每96-well-Plate可进行24基因、4样品检测； D.每96-well-Plate可进行32基因、3样品检测； E. 每96-well-Plate可进行48基因、2样品检测； F.每96-well-Plate可进行96基因、单样品检测。 FulenGen
结果 FulenGen
miRNA Target的分析 研究发现，在哺乳动物中，miRNAs的基因抑制作用是通过其5’一段长为6－8nt的核苷酸与mRNAs3’端非翻译区域相结合实现的。一般这段核苷酸位于 miRNA序列5’的2~8个nt，被称为seed区。 FulenGen
miRNA Target Sequence (3’ UTR) Expression Clones SV40 hLuc RLuc CMV polyA pUC ori Kan/Neo 3’ UTR pEZX-MT01 FulenGen
polyA hLuc RLuc CMV SV40 3’ UTR o pUC ori Kan/Neo pEZX-MT01 microRNA Translation Degradeation Or Translation inhibition hLuc No Light Light FulenGen
谢谢！ FulenGen