实验五 （一 ）化学因素对微生物生长的影响 （二）细菌的生理生化反应
碘的杀菌力强，3－7％碘溶于70－83％的乙醇中 成碘酒。 实验一 化学因素对微生物生长的影响 实验目的： 了解常用化学消毒剂对微生物的作用 实验原理： 1 氧化剂：通过强烈的氧化作用杀死微生物。 碘的杀菌力强，3－7％碘溶于70－83％的乙醇中 成碘酒。 2 重金属盐类：使蛋白质变性、沉淀，使酶失活。 0·02－0·2％Hgcl2（升汞）溶液对大多数细菌有致死作用。
3 有机溶剂：使蛋白质及核酸变性、破坏细胞膜透性，抑制脱氢酶，氧化酶活性。 乙醇（70%） 4 表面活性剂：具有降低表面张力效应的物质 ，可抑菌或杀菌。 甲酚杀菌力最强 煤酚皂液（来苏尔）为甲酚和肥皂的混合液。 新吉尔灭：破坏细胞的渗透性
实验材料 1 菌种： 大肠杆菌 2 培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基 3 消毒剂： 2.5%碘酒，0.1%升汞，75%乙醇， 100%乙醇，1%来苏尔， 0.25%新洁尔灭，无菌生理盐水
实验步骤 实验结果 P102 ：1（1）；2 1 倒牛肉膏蛋白胨平板 2 取0.2ml大肠杆菌菌液加入平板中，涂布均匀。 3 将平板(皿底）划分为6等份，分别将浸有各种消毒剂的小圆滤纸片贴在平板的每一等份中。 4 将贴好滤纸片的含菌平板，置37℃倒置培养24h。 5 测量并记录抑菌圈的直径，根据其直径的大小，可初步确定测试药品的抑菌效能。（自带尺子） 实验结果 P102 ：1（1）；2
实验二：细菌的生理生化反应 （IMViC 与硫化氢试验） 吲哚（I）、甲基红（M）、V.P.试验（Vi）柠檬酸盐利用（C）试验。用以将大肠杆菌与其形状十分相近的肠杆菌属的细菌鉴别开来。 实验目的： 1 学习几种主要微生物的生理代谢试验及检验方法 认识微生物代谢类型的多样性。 2 了解IMViC反应在肠道菌鉴定中的意义和方法
实验原理： 1 吲哚试验 ： 用来检测吲哚的产生，有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙氨酸。 吲哚 + 对二甲基氨基苯甲醛 红色的玫瑰吲哚 2 甲基红试验（M.R） ：大肠杆菌与产气杆菌在利 用葡萄糖进行发酵时，前者可产生大量的混合酸，使pH﹤4.5；后者则产生大量的中性化合物丁二醇，pH﹥4.5，因此在发酵液中加入甲基红试剂时，前者呈红色，后者呈黄色。
3 V.P.试验 红色化合物 发酵途径： 葡萄糖 一些细菌具有-乙酰乳酸合成酶系而进行丁二醇发酵。 乳酸 丙酮酸 大肠杆菌 乳酸 丙酮酸 乙醛 乙酰CoA 甲酸 乙醇 乙酰乳酸 二乙酰 3-羟基丁酮 2,3-丁二醇 一些细菌具有-乙酰乳酸合成酶系而进行丁二醇发酵。 EMP 大肠杆菌 大肠杆菌 产气杆菌 -乙酰乳酸合成酶 CO2 H2 -乙酰乳酸脱羧酶 碱性条件 氧 红色化合物 （与培养基中精氨酸的胍基结合） 2,3-丁二醇脱氢酶
4 柠檬酸盐利用试验： 有些细菌能利用柠檬酸盐作为碳源，产生碱性化合物，使培养基的pH 升高，当加入溴麝香酚蓝指示剂时，培养基会由绿色变为深蓝色。 5 硫化氢试验： 有些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，当其遇到培养基中的铅或铁盐时，形成黑色的沉淀物。
实验材料 菌种： 大肠杆菌 、产气杆菌、变形杆菌 培养基： 蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、柠檬酸 盐斜面培养基、醋酸铅培养基
实验步骤 一 接种与培养 1 用接种针将大肠杆菌 、变形杆菌分别穿刺接入2支醋酸铅培养基 一 接种与培养 1 用接种针将大肠杆菌 、变形杆菌分别穿刺接入2支醋酸铅培养基 2 将大肠杆菌、产气杆菌分别接种于2支蛋白胨水培养基（吲哚试验）、 4支葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红试验和V.P.试验）中，置37℃培养24 h 。 3 对照（所有同学共用） 二 结果观察
3 思考题：见书p123 试验结果检查：时间 1、检测试剂，每16个同学一套。 ①甲基红试剂 （M.R试验） ②40％NaOH，5%α萘酚、肌酸(V.P反应) ③吲哚试剂、乙醚（吲哚试验） 2、学生按实验书所介绍的操作方法进行生化反应试验，将实验 结果填入下表中（四人一组结果共享） 菌种 吲哚试验 甲基红试验 V.P.试验 产H2S 大肠杆菌 + - 产气杆菌 变形杆菌） 3 思考题：见书p123