实验10 泡菜的腌制和亚硝酸的测定

实验目的: 1.进行泡菜的腌制 2.测定泡菜中亚硝酸的含量

泡菜的制作 泡菜是一种以湿态发酵方式加工制成的浸制品，为泡酸菜类的一种。泡菜制作容易，成本低廉，营养卫生，风味可口，利于贮存。目前较受欢迎的是川味和韩味泡菜，在许多风味餐馆里，都有其踪影，它鲜嫩清脆，可以增进食欲，帮助消化与吸收。

①作用 一、泡菜制作的微生物（1）乳酸菌 空气、土壤、植物体表、人或动物的肠道内都有分布 ①分布 ②种类 常见的有乳酸链球菌和乳酸杆菌（用于制作酸奶）。 ③作用 在无氧条件下，将葡萄糖分解成乳酸。 ④类型 异养厌氧型细菌 （2）假丝酵母 ①作用 发酵初期较为活跃，消耗氧气，产生有机酸。形成厌氧，酸性环境，为乳酸菌繁殖奠定基础。

设备及用品 泡菜罐、菜刀及菜板

二、制作泡菜实验操作过程 修整、洗涤、晾晒、切分成条状或片状 原料加工 加调味料装坛 盐水冷却 泡菜盐水 加盐 发酵 成品 测亚硝酸盐含量 在 成品 两字 有超链接 发酵 成品 测亚硝酸盐含量

材料（1） 各种蔬菜均可，一般用白菜、洋白菜、黄瓜、柿子椒、胡萝卜、白萝卜等。 三、制作泡菜实验 材料（1） 各种蔬菜均可，一般用白菜、洋白菜、黄瓜、柿子椒、胡萝卜、白萝卜等。 （2） 添加的调味品，如花椒、八角等。 （3） 白酒。 （4） 食糖和盐（水与盐质量比4：1配制） 作用：抑制泡菜表面杂菌生长，调味剂增加醇香 作用：灭菌。渗出蔬菜中水分，调味。 注意：盐含量过多，抑制乳酸菌自身繁殖；过少，杂菌滋生繁殖

（2）将泡菜坛洗净，并用热水洗坛内壁两次。 步骤 （1）各种菜洗净并切成3～4cm长的小块。 注意：选择无砂眼、无裂纹、无渗水的坛。 （2）将泡菜坛洗净，并用热水洗坛内壁两次。 （3）将各种蔬菜、盐水、糖及调味品放入坛，混合均匀。如果希望发酵快些，可将蔬菜在开水中浸1分钟后入坛，再加上一些白酒。 （4）将坛口用水封好，防止外界空气进入。 （5）腌制1周左右即可开坛食用，可不断取用。 作用：造成无氧环境的方法，这样，坛内可利用蔬菜中天然存在的乳酸菌进行乳酸发酵。如不封闭，则会有许多需氧腐生菌生长，蔬菜会腐烂变质。 （6）如果加入一些已经腌制过的泡菜汁更好，这相当于接种已经扩增的发酵菌，可减少腌制时间。

发酵过程 发酵前期：蔬菜刚入坛时，表面带入的微生物，主要是以不抗酸的大肠杆菌和酵母菌等较为活跃，它们进行异型乳酸发酵和微弱的酒精发酵产生较多的乳酸、酒精、醋酸和二氧化碳等，二氧化碳以气泡从水槽内放出，逐渐使坛内形成嫌气状态。 发酵产物中除乳酸外，还有其他，如乙醇、CO2等称异型乳酸发酵

发酵后期：继续进行乳酸发酵，乳酸积累达1.2％以上时，乳酸杆菌的活性受到抑制，发酵速度逐渐变缓甚至停止。 发酵中期：由于前期乳酸的积累，pH下降，嫌气状态的形成，乳酸杆菌活跃进行活跃的同型乳酸发酵，乳酸积累pH达3.5~3.8.大肠杆菌、酵母菌、霉菌等的活动受到抑制。这一期为完全成熟阶段，泡菜有酸味且清香品质最好。 发酵产物中只有乳酸，称为同型乳酸发酵 发酵后期：继续进行乳酸发酵，乳酸积累达1.2％以上时，乳酸杆菌的活性受到抑制，发酵速度逐渐变缓甚至停止。 酵母菌 在发酵前期先增加 后减少 。乳酸菌含量在 发酵中期增加，后减少。 思考：1、在整个发酵过程，乳酸菌、酵母菌含量怎么变化？ 2、在哪个时期取用泡菜口味最好？

资料： 泡菜含较多亚硝酸盐 具致癌作用危害身体 健康，所以不宜多吃。 ①特点 亚硝酸盐主要指亚硝酸钠，亚硝酸钠为白 色至淡黄色粉末或颗粒状，味微咸，易溶于水。 ②作用 用于食品加工业中的发色剂和防腐剂。 ③分布 （使肉 制品呈现一种漂亮的鲜红色） 腌制肉制品、泡菜及变质的蔬菜含量较高。 ④危害 使血液中正常携氧的低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白。食入0.3～0.5克的亚硝酸盐即可引起中毒甚至死亡， 转化成亚硝胺是致癌物。

泡菜、氯化铵缓冲液、硫酸锌溶液、氢氧化钠溶液、对氨基苯磺酸溶液、 N-1－萘基乙二胺溶液、亚硝酸钠标准溶液 四、亚硝酸盐含量的测定 1、测定亚硝酸盐含量的原理 在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，再与N-1－萘基乙二胺偶联，形成玫瑰红溶液。将经过反应显色后的待测样品与标准液比色，即可计算出样品中的亚硝酸盐含量。 我们还学过哪些颜色反应？ 2、材料 泡菜、氯化铵缓冲液、硫酸锌溶液、氢氧化钠溶液、对氨基苯磺酸溶液、 N-1－萘基乙二胺溶液、亚硝酸钠标准溶液 材料及 溶液配制 见书上。 提醒 显色剂 组成。

①样品处理 称量（泡菜25g） 打成匀浆（用匀浆机） 过滤（用滤纸） 调PH至8（用氢氧化钠） 产生沉淀（加入硫酸锌） 水浴加热 过滤 3、步骤 ①样品处理 称量（泡菜25g） 打成匀浆（用匀浆机） 过滤（用滤纸） 调PH至8（用氢氧化钠） 产生沉淀（加入硫酸锌） 水浴加热 过滤 定容（滤液和洗涤液定容到500ml） 沉淀成分？ 【答案】沉淀成分 蛋白质， 去除它 避免影响 光密度值 的准确测定。

②、测定 取10ml样品溶液，加入4.5ml氯化铵缓冲液，2.5ml60%的乙酸溶液和5ml显色液，定容于25ml的容量瓶中，暗处静置25min，用光程为1cm的比色杯在550nm处测定光密度值。 显色液成分？ ③、标准曲线 取0、0.5、1、3、5亚硝酸钠标准溶液，加入4.5ml氯化铵缓冲液，2.5ml60%的乙酸溶液和5ml显色液，定容于25ml的容量瓶中，暗处静置25min，用光程为1cm的比色杯在550nm处测定光密度值。 以亚硝酸钠质量为横坐标，以光密度值为纵坐标，作标准曲线。

【注意】超链接

④、计算     m2×1000 ×V1 X1= m1× 1000 × V2 式中： X1——样品中亚硝酸盐含量 单位：mg/kg m1——样品中亚硝酸的含量 单位：g m2——标准曲线中亚硝酸盐含量 单位：ug V1—— 样品处理液总体积。 V2—— 测定用的样品处理液体积。

思考：为什么日常生活中要多吃新鲜蔬菜，不吃存放时间过长、变质的蔬菜？ 当这些蔬菜放置过久时发生变质（发黄、腐烂）或者煮熟后存放太久时，蔬菜中的硝酸盐会被微生物还原成亚硝酸盐，危害人体健康。 思考：腌制过程中，要注意控制腌制的时间、温度和食盐的用量。 温度过高、食盐用量不足10％、腌制时间过短， 容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。 一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降。

知识小结 30~35℃，通入氧气 果酒 果醋 泡菜 微生物类型 原理 反应条件 检测方法 酵母菌，真菌，兼性厌氧 醋酸菌，细菌，好氧菌 乳酸菌，细菌，厌氧菌 乳酸菌无氧呼吸产生乳酸 醋酸菌的有氧呼吸产生醋酸 酵母菌的无氧呼吸产生酒精 30~35℃，通入氧气 常温，无氧条件 20℃，无氧 重铬酸钾与其反应呈灰绿色 品尝、pH试纸检测 pH检测，亚硝酸盐的检测方法

思考： 1、加入白酒有什么作用？ 白酒可抑制泡菜表面杂菌的生长，它也是一种调味剂，可增加醇香感。

2、用水封闭坛口起什么作用？不封闭有什么结果？ 水封闭坛口起着使坛内与坛外空气隔绝的作用，空气中21％是氧气，这是最简易的造成无氧环境的方法。这样，坛内可利用蔬菜中天然存在的乳酸菌进行乳酸发酵。如不封闭，则会有许多需氧菌生长，蔬菜会腐烂。

3、厌氧发酵和有氧发酵的产物有什么不同？ 乳酸菌产生乳酸属厌氧发酵；酵母菌产生乙醇属厌氧发酵；醋酸菌产生乙酸属有氧发酵，如继续进行有氧发酵，则产物被氧化而产生乙酸。此外，需氧微生物的作用也可使蔬菜腐烂。