第一次實驗課程- 市售果汁之還原糖定量 (DNS法)
實驗原理 3,5-dinitrosalicylic acid(DNS)試劑之反應是利用DNS具還原力之特性,因此碳水化合物只要具有游離或游離趨勢之醛或酮基,即能在鹼性溶液下有還原的能力而進行以下反應: Reduction 3,5-dinitrosalicylic acid 3-amino-5-nitrosalicylic acid (orange-red) (yellow) 於一定範圍內,顏色的深淺強度和還原糖濃度成正比,故以標準葡萄糖檢量線來定量樣品中還原糖的比例。
實驗試劑 3,5-二硝基水楊酸溶液(3,5-dinitrosalicylic acid;DNS): 3, 5-dinitrosalicylic acid 1 g 酒石酸鉀鈉(Potassium sodium tartrate) 30 g NaOH 1.6 g 溶於100 ml蒸餾水中並於水浴加熱使其溶解,最後置於棕色瓶 避光儲存備用。
Standard solution glucose standard solution (1000 μg /ml):配置每ml含100、200、 400、800和1000 μg之葡萄糖溶液以製作葡萄糖之標準曲線。 glucose standard solution (ml) 0.5 1 2 4 5 H2O (ml) 4.5 3 Conc. (μg /mg) 100 200 400 800 1000
實驗步驟 (1)葡萄糖標準曲線 a. 取 5支試管分別加入0.5 ml葡萄糖標準溶液 及 0.5 ml DNS呈色劑。 b. 於100℃恆溫水浴加熱5分鐘後,置冷水浴 冷卻。 c. 加入3 ml蒸餾水,測 540 nm波長之吸光值。 d. 扣除空白值(以水取代葡萄糖溶液者)後,以吸 光值對葡萄糖量(μg)作圖可得一標準曲線圖。
(2)樣品之還原糖定量 將樣品溶液經過適當稀釋,使還原糖含 量落在校正曲線範圍內,依上述方法, 測定540 nm吸光值,由吸光值對照校 正曲線,換算樣品之還原糖含量。