Liquid Chromatography 《仪器分析实验》 高效液相色谱法 High Performance Liquid Chromatography For Short：HPLC
实验目的 实验内容 了解HPLC仪器基本结构,掌握实验仪器的一般使用方法； 加深对色谱分离原理的理解，掌握主要实验条件的选择； 掌握液相色谱定性定量分析技术。 实验内容 反相高效液相色谱法分离测定烷基苯系物
实验讲解要点 一、色谱分离原理 二、色谱分析技术 三、 HPLC仪器和使用方法 四、 HPLC和GC的比较 五、 RP-HPLC测定烷基苯化合物原理 建议在实验过程中，对比前面的气相色谱实验技术，进一步巩固和提高所学知识和实验技能。
一、色谱分离原理 色谱法是一类高效分离方法。 色谱分离原理是什么？ HPLC和GC仪器的分离部件是什么？它们有什么不同？
二、色谱分析技术 色谱分析是一类重要的仪器分析方法，其特点是分离能力强、定量准确，适合于复杂样品或多组分样品分析。 常见的色谱定性方法？ 色谱定量分析的依据？ 气相色谱实验采用那种定量分析方法？有何特点？ HPLC和GC的应用特点
三、 HPLC仪器和实验技术 HPLC仪器的基本组分？ 主要部件的工作原理？ HPLC和GC仪器的比较 HPLC和GC实验技术的比较 有人认为色谱分析实验很简单，就是打一针样品而已，你是怎么认为的？你是否给病人打过针？为什么没有？
四、高效液相色谱仪的基本组成 分几个系统？ 和GC有何不同？ 高压泵工作原理？ GC是如何进样的？ 记录系统和GC一样吗？
高压泵工作原理（单向阀） 高压液体有危险吗？ 高压泵如何改变流速？
高压泵工作原理（单向阀） 六通阀工作原理（流路切换） HPLC进样针与GC有何不同？ 为什么HPLC与GC进样要求不同？
五、 RP-HPLC测定烷基苯化合物原理 什么是正相色谱？什么是反相色谱？ 什么是键合固定相？ 预测一下苯和甲苯在C18反相柱上的保留顺序？ 什么是反相色谱疏水机理？ 本实验的主要色谱分析条件有那些？ 流动相组成对保留时间有何影响？举例说明？ 改变检测波长对色谱图有何影响？
HPLC的溶剂选择 本实验采用什么流动相？ 什么是HPLC级甲醇、乙腈溶剂？ 如何获得超纯水？ 本实验所用的流动相如何配制？ 流动相为什么要除气？如何除气？
六、实验部分 一、溶液配制 1 配制标准系列溶液 2 流动相的配制、过滤和除气。 五组分混标液：含适量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁苯。 三组分混标液：每mL溶液分别含1.00mg苯、甲苯和乙苯。 分别准确移取0.40、0.80、1.20、1.60和2.00mL三组分混标液于10mL容量瓶中，用流动相溶剂定容。 2 流动相的配制、过滤和除气。 五组分混标液：含适量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁苯。 标准苯测试液。 未知样品1号、2号和3号。
二、色谱实验条件 A组：Waters HPLC仪 B组：TSP HPLC仪 色谱柱：Nova Pak C18 (3.9×150mm, 4μm) 流动相：CH3OH-H2O (70/30, v/v) 流速：0.8 mL/min 检测波长：254nm 进样体积：20μL B组：TSP HPLC仪 色谱柱：Hypersil BDS C18 (4.0×200mm, 5μm) 流动相：CH3OH-H2O (80/20, v/v)
三、实验内容与主要步骤 1 更换流动相。 2 开动仪器，让色谱柱平衡。 3 设置色谱工作站参数。 4 进样、采集色谱图。 1）五组分混标液 2）标准溶液系列 3）未知样品 5 色谱数据分析，打印色谱图及分析报告。 6 更换甲醇流动相，清洗色谱柱。 7 关闭仪器。