实验二.DNA浓度与纯度的测定.

Slides:



Advertisements
Similar presentations
肿瘤知识点滴 湘潭市中心医院体检中心 周伏初. 一 肿瘤的概念 肿瘤是机体组织细胞在某些内在因素影 响的基础上,由于外界致病因素(物理、 化学、生物)的作用而发生一系列质的 改变,形成一种异常的增生。这种异常 增生一旦形成,即使外界至病因素停止 作用,也还能继续自然发展,这说明肿 瘤是整体性疾病的一种局部表现。
Advertisements

实验十 DNA片段从琼脂糖凝胶 中的分离 DNA fragment recovery from the agrose gel.
第三章 非细胞微生物 【知识目标】 1 .掌握病毒及噬菌体的形态结构及化学组成,理 解病毒的增殖过程。 2 .了解噬菌体的检测方法及与发酵工业的关系。 【技能目标】 1 .学会识别噬菌体在发酵工业中造成的污染。 2 .学会噬菌体检测的方法并处理噬菌体的污染。
“ 十五 ” 国家级规划教材 新世纪全国高等中医院校规划教材 中 医 妇 科 学 总 论 主讲人 李朝平.
玉田三中 化学组. 生活中的这些物质 …… 酸的 食醋、酸奶和某些水果都是 酸的,你是如何知道的?
行政院原住民族委員會 法規暨訴願審議委員會 102 年度原住民身分法實例演練講習: 原住民身分認定及救濟程序.
狂犬病 狂犬病晚期的犬. 一、狂犬病病原 : 狂犬 病毒属于弹状病毒, 75×180nm 大小,外层为含脂 质的囊膜,内部为含核蛋白的 核心,对脂溶剂敏感,为单链 RNA 病毒。病毒主要存在于感 染动物的唾液和脑组织。 狂犬病病毒结构.
化疗知识讲座 台州博爱肿瘤医院 陈国卿. 一、化疗药物的抗癌机制 1 、抑制细胞增殖和肿瘤的生长是其主要作 用机理。 2 、对于新陈代谢旺盛的正常组织同样具有 毒性,如骨髓细胞,粘膜细胞。 3 、理想的药物 — 最大程度的抑制肿瘤细胞, 最小程度的影响正常细胞。 4 、基因药物是发展方向。
第二节 基因在亲子代间的传递. 1. 什么叫做遗传? 2. 什么叫做性状? 3. 性状是由什么决定的?
主题二 生命的基础 细胞的结构和功能. 细胞壁 细胞膜 细胞质 细胞核 化学组成 功能 成分 结构 基质 细胞器 结构 功能.
客家娘酒 生命科学院 062 第二组 组长:李宗权 组员:林立强 李嘉豪 郑灿明 李耀斌 程惠源.
氨基酸转换反应 ( 一 ) 血液中转氨酶活力的测定 一. 目的 : 了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临 床诊断中的意义, 学习转氨酶活力测定的原理和方 法。 二. 原理 : 生物体内广泛存在的氨基转换酶也称转氨酶, 能 催化 α – 氨基酸的 α – 氨基与 α – 酮基互换, 在氨基酸 的合成和分解尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中.
第三节 发酵工程简介 学习目标: 1、发酵工程的概念和内容(A:知道)。 2、发酵工程在医药工业和食品工业中的 应用(A:知道)。
第二章:生物科學與食品 第三節:基因改造食品.
药物溶媒 生理盐水还是葡萄糖?.
生物化学实验 海南大学海洋学院水产学系.
学案6 基础实验 [题型剖析] 教材中基础实验的考查是近几年试题命制的一个趋势,本类试题主要考查考生对相关实验的目的、原理、方法、操作步骤和相关技能的掌握情况。主要分为显微观察类、物质鉴定类、探究设计类、调查模拟类。 [突破策略] 首先要将教材中的实验分类归纳;然后对教材中每个实验的目的、原理、材料、步骤及注意事项等进行比较记忆,要认真领悟每个实验的设计意图,并从其中提炼总结实验方法和技术。
课 题 2 酸和碱的中和反应 课 题 2 酸和碱的中和反应 第 二 课 时.
第三章 现代教育与人的发展.
癌 症 發 生 的 秘 密 食 品 與 癌 症 授課教師:吳進益 老師.
第一章 基因操作的主要技术原理 第二节 凝胶电泳.
神创造万物及人类.
孩子腹泻病的预防与治疗.
欢迎各位老师莅临指导! 高中一年级生物 授课人:刘敏 授课班级:C332.
食品分析 实验.
生命科学发展趋势、优先发展领域与资助思考
上饶师范学院 生物化学实验 主讲: 林弘 张勇 上饶师范学院生命科学系 生物科学实验教学中心.
单元九 种猪常见疾病(4).
第五章 微生物与发酵工程.
必修二 生物 (人教版).
高二生物 绪论 制作人:李 绒.
食品的卫生管理.
第6章 细胞的生命历程 第4节 细胞的癌变 王楠楠 赤峰二中. 第6章 细胞的生命历程 第4节 细胞的癌变 王楠楠 赤峰二中.
动物细胞工程 儋州市一中 金兆娜.
实验复习专题 城东中学 刘学琴.
一轮复习 细胞的增值.
生物技术实践重要考点有:果酒和果醋的制作;腐乳的制作;制作泡菜;微生物的实验室培养;土壤中分解尿素的细菌的分离;分解纤维素的微生物的分离;菊花的组织培养;月季的花药培养;植物芳香油的提取;胡萝卜素的提取。 高考命题的切入点有:①果酒和果醋的制作原理和过程;②培养基的种类、营养要求及配制方法;③无菌技术的内容及方法;④分离纯化微生物的研究思路、方法;⑤腐乳的制作方法;⑥植物组织培养的原理、过程和影响因素;⑦植物芳香油的提取方法及流程。
1.还原糖 2.脂 肪 3.蛋白质 10叶绿素 4.质流动 5.分 裂 6.酶温度 7.酶- PH 8.酶效率 9.酶水解 11.分 离 12.复 原 13.取DNA.
病原:痘病毒属于痘病毒科、脊椎动物痘病毒亚科,该亚科现有8个属,各属成员对动物的致病作用有明显的差异,但它们构造差异不大。
寻找生命的螺旋 深圳市育才中学 黄俊芳.
导入新课 波能绕过障碍物产生衍射。既然光也是一种波,为什么在日常生活中难以观察到光的衍射现象呢?.
基因对性状的控制.
问题探讨 同一株水毛茛,裸露在空气中的叶和浸在水中的叶,表现出了两种不同的形态。 1.这两种叶形有什么区别?
第二节 基因对性状的控制.
13-14学年度生物学科教研室总结计划 2014年2月.
第六章 科学观察与科学实验.
中药注射剂 中药制剂学教研室 刘 莉
三峡大学化学与生命科学学院微生物学教学组
必修1 分子与细胞 第二章 第三节 细 细胞溶胶 内质网 胞 核糖体 质 高尔基体 线粒体 第一课时 浙江省定海第一中学 黄晓芬.
突變 突變是指遺傳物質發生改變, 而影響到性狀的表現 例:白化症.
· 全球变暖 · 臭氧的破坏与保护 · 酸雨危害与防治
动物和人体生命活动的调节(一).
学时 32 指导老师:文国琴 西华师范大学生命科学学院
兔肝脱氧核糖核酸的提取.
第一部分 碱裂解法提取质粒.
试验三 用于大分子分离的电泳技术 孔忠新
3.2细胞器的结构与功能.
第二节 核酸的分离纯化.
第五章 核酸的分离纯化.
基因工程实验指导书 THE EXPERIMENTAL GUIDE FOR GENE ENGINEERING.
分子生物学实验.
基于高中生物学理性思维培养的实践性课例开发
核酸抽取及杂交 上海交通大学医学院 李莉 讲师.
ELISA综合性实验一.
第3节 细胞核——系统的控制中心 本节聚集: 1.细胞核有什么功能? 2. 细胞核的形态结构是怎样的?
第二节 核酸与细胞核.
复习:蛋白质的形成 几条肽链盘曲折叠形成的蛋白质 氨基酸 …….
遗传信息的携带者——核酸 授课教师:王建友.
第四章 病毒 一、 病毒的一般特性 二、 噬菌体.
实验性质:设计 实验类别:本科基础 实验学时:4 实验教师:温晓玫
Presentation transcript:

实验二.DNA浓度与纯度的测定

(一)DNA浓度的分光光度计测定 实验原理: 核酸的紫外吸收 实验原理: 核酸的紫外吸收 碱基含有共轭双键,使相关化合物在240-290 nm的紫外波段有强烈的吸收峰,最大吸收值在260nm左右

OD260的应用: 1. DNA或RNA的定量: OD260= 1.0相当于 2.判断核酸样品的纯度 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA(或RNA) 20μg/ml单链寡聚核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 含杂蛋白及苯酚, OD260/OD280降低

注意事项: 1.为防止读数漂移: 2.紫外分光光度法只用于测定浓度大于0.25 g/mL的核酸溶液。 选用TE缓冲液为溶剂(PH一定,离子强度低) 合适的稀释浓度,保证吸光值在0.1-1.5范围内 混合要均匀,无气泡和悬浮物,视窗干净 2.紫外分光光度法只用于测定浓度大于0.25 g/mL的核酸溶液。

操作步骤: 以TE缓冲液为空白对照; 将基因组DNA溶液分别用TE缓冲液稀释50倍、80倍、100倍至4ml,分别测OD260和OD280 ; 基因组DNA浓度为: OD260 ×核酸稀释倍数×50(μg/mL);样品各稀释级别算得的浓度平均值,即作为该样品的实际DNA浓度。 以OD260/OD280初步判断提取基因组DNA的纯度。

(二)DNA质量与浓度的琼脂糖 凝胶电泳法测定 实验原理: Ⅰ. pH>DNA PI,DNA带负电荷,阴极→阳极 Ⅱ. DNA在琼脂糖凝胶中的迁移率取决于: 1. DNA分子的大小 DNA迁移的速率与其碱基对数的常用对数成反比.

2. 琼脂糖浓度 浓度越大,DNA迁移率越低 3. DNA的构象 超螺旋环状>线状> 开环状 4.凝胶中、电泳缓冲液中的溴化乙锭 降低DNA的迁移率

5.电压: 低电压时,迁移率与电压成正比 适宜电压:5-8V/cm 6.电泳缓冲液: 离子强度适中 主要:TAE, TBE,TPE PH 7.5-7.8

TAE TBE和TPE 成 本 低 稍高 缓冲容量 低 高 DNA迁移率 快 慢 高分子量的 DNA分辨率 > 低分子量的 DNA分辨率 <

不同浓度琼脂糖分离DNA分子的范围 琼脂糖浓度(%) 分离范围(kb) 0.5 0.7-25 0.8 0.5-15 1.0 0.25-12 0.5 0.7-25 0.8 0.5-15 1.0 0.25-12 1.2 0.15-6 1.5 0.08-4

操作步骤 琼脂糖凝胶的制备:溶化,冷却,EB 凝胶板的制备:加梳子,倒胶 样品的制备:样品+1/5体积溴酚蓝 加样:加样端为负极(黑) 电泳:5V/cm 观察:紫外灯下观察,照相

准备胶槽

溶 胶

凝胶冷却至50°C,加EB至终浓度0.5μg/ml

铺 胶

凝胶凝固后取出梳子

加缓冲液

准备样品

凝胶上样缓冲液(6×) 蔗 糖    40% 溴酚蓝    0.25% (迁移率≈300bp双链DNA)

点 样

电 泳

注意观察溴酚蓝染液的迁移

紫外灯下观察电泳结果

照 相