食品微生物学实验 食品学院 张华江
实验一 显微镜的使用
一、目的要求 二、实验材料、用品 了解普通光学显微镜的构造，学会显微镜的使用和维护方法，熟悉细菌的基本形态。 显微镜、香柏油和二甲苯二重瓶、镜头纸、大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌。
实验二 细菌的革兰氏染色法及其形态观察 一、目的要求 二、实验材料、用品 掌握细菌涂片技术及革兰氏染色法原理及基本操作，熟练油镜的使用技术。 实验二 细菌的革兰氏染色法及其形态观察 一、目的要求 掌握细菌涂片技术及革兰氏染色法原理及基本操作，熟练油镜的使用技术。 二、实验材料、用品 显微镜、酒精灯、大肠杆菌、枯草杆菌。
原理： ① 经过初染和媒染后，在细菌的细胞膜或细胞质上染上结 晶紫碘的大分子复合物。 ② G+由于细胞壁比较厚，肽聚糖含量较高、肽聚糖结构较 紧密，所以用95%乙醇脱色时，肽聚糖网孔会因脱水反 而明显收缩；加上G+细胞壁基本上不含脂类，乙醇处理 时不能在壁上出现溶出缝隙（脱水）。因此，结晶紫-碘 复合物仍被牢牢阻留在细胞壁以内，使菌体呈现紫色； ③ 反之，G-细胞壁较厚肽聚糖含量较低，其结构疏松，用乙 醇处理后，细胞壁上就会出现叫大缝隙而使其透性增大 （脱脂），所以结晶紫-碘复合物就会被溶出细胞壁。 ④ 再用番红等红色染液进行复染，就可以使G-细菌的细胞壁 呈现复杂的红色。而G+仍呈紫色。
步骤：初染――>媒染――>脱色――>复染 涂片→干燥→固定→草酸铵结晶紫初染（1min）→水洗 →碘液媒染(1min)→水洗→95%乙醇脱色（30s） →水洗→沙 黄复染（1min） →水洗→滤纸吸干→油镜检查
革兰氏染色 实验结果
实验四 培养基的制备——常用灭菌设备的使用 及玻璃器皿的准备 一、目的要求 二、原理、原则： 固体 天然 基础、加富 1.种类：状态 半固体 成分 合成 功能 液体 半合成 鉴别、 选择 2.原则： ①必须含有营养素，不含抑菌物质、重金属。 ②pH值适宜。 ③严格无菌。 ④透明。
三、制备过程： 不加琼脂 配料→温水溶解→校正pH值→ → 过滤→ 加琼脂 分装→加棉塞→包扎→灭菌→无菌检查 注意事项： 1.配溶液：按配方，称量以外的各种成份：※先称盐，后称蛋白胨，最后称牛肉膏。 2.调pH值：先溶解各成份，※并冷却至室温，再测初始pH值，最后加稀酸、碱，※缓慢少量，不断搅拌。 3.固体培养基的制备：加入剪碎的琼脂条，加热使完全溶化，※并加水补足水分。 4.过滤：可略。 5.分装，加塞，包扎：每人倒一支试管。 6.灭菌：1kg/cm2，0.7 kg/cm2，0.5 kg/cm2 7.无菌检查：
四、常用培养基的制备 五、实验室常用灭菌设备的使用： 六、玻璃仪器和平皿的准备： 普通营基琼脂培养基的制备 1.配方：牛肉膏 5g， 蛋白胨 10g，NaCI 5g 琼脂 20g，水 1000ml， 酵母膏 5g 2.制法：每组200ml，校正pH7.2～7.4，分装三角瓶，分装四支试管，灭菌1kg/cm2，15～20min。 注意： ①牛肉膏称完后要放回原处。 ②转化为200ml时要除以5。 ③灭菌时，要有一人专门负责。 ④用桌上HCI、NaOH（1M）调pH值。 ⑤有一部分同学包扎棉塞。 ⑥琼脂直接用，高压灭菌时溶化。 五、实验室常用灭菌设备的使用： 手提式压力灭菌器：加水过加热电阻，不要超过水分标记，100℃排汽，3～5min，自动降压。 六、玻璃仪器和平皿的准备： 1、洗涤 2、干燥 平皿 3、包扎 吸管 三角瓶
三、生物的分离培养：1#、2#沙门氏菌或大肠杆菌 实验五 细菌的分离培养和纯培养 一、目的要求： 二、基础原理: 三、生物的分离培养：1#、2#沙门氏菌或大肠杆菌 （一）、需氧菌的分离、培养： 平板划线 刮棒涂布（液体） 稀释倾注法 平板划线分离：样品适当稀释，无菌操作，平皿底标注菌名、日期、班级、组别、姓名。 刮棒涂布法：取样0.1～0.2ml。 （二）、厌氧菌的分离、培养：
四、微生物的纯培养： 五、微生物常用接种技术 （一）、选菌：菌落光滑，半透明，微隆起，边缘整齐，圆形，灰白色 （二）、斜面纯培养:目的菌落，以记号笔标记，一半革兰染色，另一半接种。 五、微生物常用接种技术
细菌的纯培养
实验十二 细菌平板菌落总数的测定
实验十三 大肠菌群的测定 注意： 1.菌落计数在倒平板的时候先加样，再倒培养基，而且要动作迅速些，防止凝固。 2.培养基最好在上课之前先用高压锅融化开。 3.到平板时不要倒反，往小盖里倒，培养时小盖在上。