细胞因子的检测

第一节 细胞因子检测概述 一、细胞因子的类型与作用特点 二、细胞因子检测的特点与方法

细胞因子 由非神经—内分泌细胞产生的一大类与免疫应答活动密切相关的低分子蛋白与多肽。

细胞因子的类型与作用特点 1、细胞因子的分类 2、细胞因子的作用特点

以生物学作用进行划分的分类 白细胞介素（Interleukin）—— IL-1、IL-2、…… IL-18 干扰素（Interferon）—— IFN-、IFN-、IFN- 肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor）—— TNF- 、 TNF-  集落刺激因子（Colony-stimulating factor）—— M-CSF、G-CSF 转化生长因子（Transforming growth factor）—— TGF-  趋化因子（Chemokine）—— IL-8、GROs、MCP-1 生长因子（Growth factor）—— EGF、FGF、IGF、PDGF

各类细胞因子间关系 ILs IFNs TNFs TGFs CSFs Chemokines

1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性 2、多源与同源性 3、高效性 4、多效性（pleiotropy） 5、丰余性（redundancy） 6、协同性 7、拮抗性 8、网络性

细胞因子检测的特点与方法 1、检测的特点 2、检测的方法

细胞因子检测的特点 免疫原性较弱 样品含量低 样品具有时效性 生物效应特异性差

细胞因子检测的方法 免疫学检测方法——抗原性检测 细胞生物学检测方法——生物活性检测 分子生物学检测方法——基因表达检测

第二节 细胞因子检测的方法与原理 一、细胞因子的细胞生物学检测 二、细胞因子的免疫学检测 三、细胞因子的分子生物学检测

细胞因子的细胞生物学检测 1、检测方法与原理 2、检测中的操作注意要点

检测方法与原理 细胞增殖或增殖抑制试验 细胞病变抑制试验 细胞毒试验 细胞趋化试验

细胞 趋化因子 滤膜：计数受趋化细胞 趋化试验原理示意

检测中的操作注意要点 靶细胞的选择与培养 检测标本的制备 显示检测结果

靶细胞的选择与培养 1、对所测的细胞因子有特异的敏感性 2、易培养、保存、生物学特性稳定 3、有良好的生长状态 4、种属适配

各类细胞因子检测的常用靶细胞 细胞因子 实验系统 干扰因素 IL-1 D10（M）增殖法 IL-2、IL-4 EL-4（M）增殖法 IL-4 细胞因子 实验系统 干扰因素 IL-1 D10（M）增殖法 IL-2、IL-4 EL-4（M）增殖法 IL-4 A352（H）增殖抑制法 IL-2 CTLL（M）增殖法 IL-4 IL-3 KG-1（H）增殖法 TF-1（H）增殖法 GN-CSF、IL-5 IL-6、EPO IL-4 CTLL（M）增殖法 IL-2 IL-5 BCL-1（M）增殖法 IL-4

各类细胞因子检测的常用靶细胞 细胞因子 实验系统 干扰因素 IL-6 B9（M）增殖法 IL-4、IL-11 BM60（H）增殖法 细胞因子 实验系统 干扰因素 IL-6 B9（M）增殖法 IL-4、IL-11 BM60（H）增殖法 IL-7 Clone-IXN/2b（M）增殖法 IL-8 中性粒细胞（M、H）趋化法 GM-CSF TF-1（H）增殖法 IL-3、IL-5 IL-6、IL-5 TNF/ L929 （M、H）细胞毒法 IFN wish（H）病变保护法 IFN- 、 IFN-  L929（M）病变保护法 IFN- 、 IFN- 

检测标本的准备 1、分离特定的产生细胞 2、对产生细胞进行诱导、激活 3、选择适当的收集时间

显示检测结果 1、细胞增殖状态的显示： 放射性核素掺入法、 胞内酶活性显示法 活细胞染色法 细胞荧光测定法 2、细胞毒或细胞病变状态的显示 DNA断片测定法

细胞因子的免疫学检测 分泌型细胞因子的检测 细胞内细胞因子的检测

ELISPOT

细胞内细胞因子标记 膜抗原标记 激活 细胞内细胞因子检测技术

细胞因子的分子生物学检测 原位杂交技术 Rt-PCR技术

第三节 常用细胞因子的检测方法 一、IL-2的检测 二、IFN-γ的检测 三、TNF的检测

白细胞介素-2的测定示意图 待检样品（细胞上清） 指示细胞（CTLL-2） 按不同稀释度加入 37ºC，16-20小时 加入3HTdR（1-5Ci） 37ºC，4-6小时 收集细胞 测定

干扰素的测定示意图 待检样品（细胞上清） 指示细胞（L929） 按不同稀释度加入 37ºC，4小时 弃取上清，加入VSV 观察细胞病变（镜检或比色）

肿瘤坏死因子的测定示意图 待检样品（细胞上清） 指示细胞（L929） 按不同稀释度加入 37ºC，24小时 弃取上清，洗涤 加入结晶紫染液，洗涤 加入细胞裂解液，比色

第四节 细胞因子受体的检测 一、细胞因子受体的类型 二、细胞因子受体的检测

细胞因子受体的类型 膜型细胞因子受体 分泌型细胞因子受体

细胞因子受体的检测方法 膜型细胞因子受体的检测 配体检测法 抗体检测法 分泌型细胞因子受体的检测 标记抗体检测法

本章小结 1、细胞因子的作用特点与检测特点 2、细胞因子检测的原理与方法 3、常用的细胞因子检测 4、细胞因子受体的检测