实验二 细菌分离培养与生化鉴定 李立伟 lilw2@zju.edu.cn
实验目的 了解常用基础培养基种类和用途 熟悉细菌在三种培养基中的生长状态 掌握细菌的各种分离培养技术和纯种细菌接种方法 熟悉细菌常用生化反应
培养基分类 按营养组分和用途分类 基础培养基 营养培养基 鉴别培养基 选择培养基 厌氧培养基
按物理状态分类 液体培养基 固体培养基 琼脂斜面培养基 琼脂平板培养基 半固体培养基
任务1-空气中的细菌 普通琼脂平板一只(8人/组) 启开皿盖,培养基面向上 空气中暴露10-15min,立即盖上皿盖。 37℃培养18-24h,观察结果。
空气中菌落总数 空气中细菌数(CFU)/m3 = 5000N/A T A:平板面积(cm2) T:平板暴露时间(min) N:平板平均菌落数
任务2-手指皮肤上的细菌 普通琼脂平板一只(8人/组) 于背面玻璃面划成八等份,并编号 每人在培养基面相应部位轻轻按上指印,随即盖上皿盖。 37℃培养18-24h,观察结果。
任务3-细菌接种 液体培养基(8人/组)
琼脂平板培养基(1人/组)
琼脂斜面培养基(8人/组)
半固体培养基(8人/组)
任务4-咽喉部细菌的分离 取灭菌棉签一支,在咽喉部轻轻涂擦(1人/组)后,再涂于血琼脂平板一区 改用灭菌接种环作分离划线接种 37℃培养24h,观察结果
咽喉部优势细菌
任务5-细菌在培养基中的生长状态 (示教观察) 液体培养基
菌膜 菌沉淀 均匀浑浊 对照
固体培养基 菌落 菌苔
半固体培养基
任务6-细菌生化反应(示教观察) 糖发酵试验 大肠埃希菌 产酸产气 + 产碱杆菌 不发酵 — 伤寒沙门菌 产酸不产气 +
Indol试验 大肠杆菌 出现红色 + 肖氏沙门菌 不出现红色 -
硫化氢试验 大肠杆菌:不变色 阴性 变形杆菌:穿刺线部位呈黑褐色 阳性
尿素分解试验 痢疾杆菌:不变色 阴性 变形杆菌: 红色 阳性
任务7-实验报告 细菌在液体、固体斜面、半固体和平板上的生长状态 空气中、手指细菌的分布 咽喉部细菌的分离 细菌生化反应(培养基、原理和结果) 思考题:咽喉部细菌分离鉴定程序