实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 2012-12 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 1

一、实验目的 掌握动物组织中核酸提取与鉴定的基本原理及方法 通过实验掌握核酸的基本组成 熟悉移液枪、离心机、匀浆器的使用 2012-12 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 2

二、实验原理 核酸（DNA、RNA）+ 蛋白质 → 核蛋白质 2012-12 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 3

二、实验原理 三氯醋酸 1.核蛋白的提取： 肝组织匀浆 核蛋白沉淀 原因：三氯醋酸可沉淀蛋白质 2 .从核蛋白中提取核酸 10%NaCl 肝组织匀浆 核蛋白沉淀 原因：三氯醋酸可沉淀蛋白质 2 .从核蛋白中提取核酸 10%NaCl 核蛋白 蛋白质沉淀 + 核酸钠 95%乙醇 原因：10%的NaCl溶液中： 核酸的溶解度高 蛋白质的溶解度低 核酸钠沉淀 2012-12 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 4

二、实验原理 3.核酸（DNA、RNA）成分的鉴定 硫酸 核酸钠 碱基 + 戊糖 + 磷酸 水解 （嘌呤、嘧啶） （核糖、脱氧核糖） 核酸钠 碱基 + 戊糖 + 磷酸 水解 （嘌呤、嘧啶） （核糖、脱氧核糖） 2012-12 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 5

2.嘌呤碱 + 硝酸银 絮状嘌呤银化合物（灰褐色） 钼酸铵 氨基萘酚磺酸 1.磷酸 磷钼酸 钼蓝（蓝色） 2.嘌呤碱 + 硝酸银 絮状嘌呤银化合物（灰褐色） 浓硫酸 3，5-二羟基甲苯 3.核糖 糠醛 绿色化合物 浓酸 二苯铵 4.脱氧核糖 ω-羟基-γ-酮基戊醛 蓝色化合物 2012-12 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 6

三、实验操作 核酸钠沉淀 1.制备匀浆： 处死小鼠 取肝组织 生理盐水冲洗、吸干 生理盐水2ml 三氯醋酸2ml 肝匀浆 匀浆管(小试管) 处死小鼠 取肝组织 生理盐水冲洗、吸干 生理盐水2ml 三氯醋酸2ml 肝匀浆 匀浆管(小试管) 搅拌 研磨 2.分离提取： 弃上清 10%NaCl 2ml 静置3’ 3000转/分,3’ 沸水浴3’ （搅拌） 沉淀 逐滴加95% 冷酒精2ml 冷却 上清倒入 小试管 白色沉淀 3000转/分,3’ ①静置5’ ②3000转/分,5’ 弃上清 核酸钠沉淀 3.核酸的水解： 5%H2SO43.5ml 核酸的水解液 （搅拌） 沸水浴加热10分钟 2012-12 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 7

三、实验操作 4.RNA与DNA成分鉴定： （1）嘌呤碱的鉴定 放入沸水浴4分钟，观察变化，静置15分钟，比较沉淀 管号 水解液 5%H2SO4 浓氨水 5%AgNO3 颜色变化 测定管 20d _ 2d 10d ? 对照管 放入沸水浴4分钟，观察变化，静置15分钟，比较沉淀 嘌呤碱 + 硝酸银 絮状嘌呤银化合物（灰褐色） 2012-12 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 8

三、实验操作 （2）磷酸的鉴定 放置3分钟，沸水浴4分钟，观察比较颜色差别 钼酸铵 氨基萘酚磺酸 磷酸 磷钼酸 钼蓝（蓝色） 管号 水解液 5%H2SO4 钼酸铵 氨基萘酚磺酸 颜色变化 测定管 10d _ 5d 20d ? 对照管 放置3分钟，沸水浴4分钟，观察比较颜色差别 钼酸铵 氨基萘酚磺酸 磷酸 磷钼酸 钼蓝（蓝色） 2012-12 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 9

三、实验操作 （3）核糖的鉴定 沸水浴加热5~10分钟，观察比较颜色差别 浓硫酸 3，5-二羟基甲苯 核糖 糠醛 绿色化合物 管号 水解液 5%H2SO4 3，5-二羟基甲苯 颜色变化 测定管 4d _ 6d ? 对照管 沸水浴加热5~10分钟，观察比较颜色差别 浓硫酸 3，5-二羟基甲苯 核糖 糠醛 绿色化合物 2012-12 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 10

三、实验操作 （4）脱氧核糖的鉴定 沸水浴5~10分钟，观察比较颜色差别 浓酸 二苯铵 脱氧核糖 ω-羟基-γ-酮基戊醛 蓝色化合物 管号 水解液 5%H2SO4 二苯胺 颜色变化 测定管 20d （可用完） _ 30d ? 对照管 沸水浴5~10分钟，观察比较颜色差别 浓酸 二苯铵 脱氧核糖 ω-羟基-γ-酮基戊醛 蓝色化合物 2012-12 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 11

四、实验结果、现象 五、实验分析 2012-12 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 12

特别说明： 处死小鼠、取肝方法 移液枪使用方法 离心机使用方法 匀浆器使用方法 2012-12 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 13