野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 药 物 分 析 实 验 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 1

一、实验目的 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 掌握复方化学药片剂质量检验的项目和方法 熟悉复方制剂含量均匀度和溶出度检查方法 野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 掌握复方化学药片剂质量检验的项目和方法 熟悉复方制剂含量均匀度和溶出度检查方法 一、实验目的 2

实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 复方左炔诺孕酮片, 每片含: 左炔诺孕酮应为0.135～0.1725mg (0.15mg) 野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 复方左炔诺孕酮片, 每片含: 左炔诺孕酮应为0.135～0.1725mg (0.15mg) 炔雌醇应为27.0～34.5μg(0.03mg) C21H28O2=312.45 C20H24O2=296.41 3

野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 二、性状 本品为糖衣片或薄膜衣片, 除去包 衣后显白色或类白色 4

三、鉴别 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 1. 三硝基苯酚反应——左炔诺孕酮 野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 三、鉴别 1. 三硝基苯酚反应——左炔诺孕酮 三硝基苯酚在碱性条件下与左炔诺孕酮结构中的α,β-不饱和酮反应 取本品5片, 研细, 加三氯甲烷10ml充分搅拌后, 滤过, 取滤液2ml, 加碱性三硝基苯酚溶液2ml, 放置30min后, 溶液呈棕黄色 5

三、鉴别 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 2. 旋光度测定法——左炔诺孕酮 左炔诺孕酮为左旋体, 具有旋光性 野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 三、鉴别 2. 旋光度测定法——左炔诺孕酮 左炔诺孕酮为左旋体, 具有旋光性 取本品细粉适量(约相当于左炔诺孕酮15mg), 分次加三氯甲烷约200ml, 充分搅拌, 用G4垂熔漏斗减压滤过, 用三氯甲烷洗涤滤渣与滤器, 合并滤液, 水浴蒸干, 放冷, 精密加三氯甲烷2ml, 用1dm的微量旋光管测定, 应为左旋, 并不得低于0.18° 6

三、鉴别 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 3. TLC法 野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 三、鉴别 3. TLC法 取本品5片, 研细, 加三氯甲烷10ml, 搅拌, 滤过, 滤液蒸干, 加三氯甲烷1ml使溶解, 作为供试品溶液 取左炔诺孕酮与炔雌醇对照品, 加三氯甲烷制成每1ml含左炔诺孕酮0.75mg与炔雌醇0.15mg的对照品溶液 吸取各30μl, 点于同一硅胶G板, 以三氯甲烷-甲醇(9:1)为展开剂, 展开, 晾干, 喷以硫酸-无水乙醇(1:1)混合液, 105℃加热使显色 两个成分主斑点的位置和颜色应相同 7

三、鉴别 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 4. HPLC法 野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 三、鉴别 4. HPLC法 含量测定项下记录的色谱图: 供试溶液与对照溶液色谱中左炔诺孕酮和炔雌醇的保留时间tR一致 3与4任选一项 8

四、检查 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 1. 含量均匀度 野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 四、检查 1. 含量均匀度 复方左炔诺孕酮片中两个成分的标示量均小于25mg, 均需检查含量均匀度, 限度15.0% 以含量测定项下测得的每片含量计算, 应符合规定 9

四、检查 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 2. 溶出度 野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 四、检查 2. 溶出度 取本品，照溶出度测定法(第二法), 以0.0005%聚山梨酯80溶液500ml为溶出介质, 转速75rpm, 依法操作, 经60min时, 取溶液30ml, 滤过, 弃去初滤液20ml, 续滤液作为供试品溶液 含量测定HPLC条件, 左炔诺孕酮的检测波长为247nm; 炔雌醇激发波长285nm, 发射波长310nm 理论板数按左炔诺孕酮峰计算不低于5000 精密量取供试品溶液l00µl注入液相色谱仪, 记录色谱图 10

四、检查 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 2. 溶出度 野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 四、检查 2. 溶出度 另取左炔诺孕酮对照品, 加乙醇超声处理溶解并定量稀释制成每1ml中含0.75mg的溶液, 作为对照品贮备液(1) 炔雌醇对照品, 同法制成每1ml含0.15mg的对照品贮备液(2) 精密量取对照品贮备液(1),(2)各2ml, 置100ml量瓶, 乙腈-溶出介质(1:1)稀释至刻度, 摇匀; 精密量取2ml, 置100ml量瓶, 用溶出介质稀释至刻度, 摇匀, 作为对照品溶液, 同法测定 按外标法以峰面积计算每片的溶出量; 左炔诺孕酮与炔雌醇的限度均为标示量的60%, 应符合规定 11

野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 四、检查 3. 其他 应符合片剂项下有关的各项规定 12

四、含量测定——HPLC 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 1. 色谱条件与系统适用性试验 野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 四、含量测定——HPLC 1. 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂; 以乙腈-水(60:40)为流动相; 检测波长为220nm。理论板数按左炔诺孕酮峰计算不低于5000, 左炔诺孕酮峰与炔雌醇峰的分离度应不小于2.5 13

四、含量测定——HPLC 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 2. 测定法 野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 四、含量测定——HPLC 2. 测定法 取本品10片, 分别置10ml量瓶中, 加流动相适量, 超声处理40min(不时振摇)使左炔诺孕酮与炔雌醇溶解, 放冷, 用流动相稀释至刻度, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液50µl注入液相色谱仪, 记录色谱图 另取左炔诺孕酮与炔雌醇对照品, 精密称定, 加乙腈, 超声处理使溶解, 放冷, 定量稀释制成每1ml含左炔诺孕酮0.75mg与炔雌醇0.15mg溶液; 精密量取2ml, 置100ml量瓶, 流动相稀释至刻度, 摇匀, 同法测定 14

四、含量测定——HPLC 3. 结果计算 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 按外标法以峰面积分别计算每片的含量, 求出平均标示量, 即得 野菊花注射液色谱指纹图谱的研究 实验八 复方左炔诺孕酮片质量检验 四、含量测定——HPLC 3. 结果计算 按外标法以峰面积分别计算每片的含量, 求出平均标示量, 即得 15

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