药物分析实验十 氯霉素眼药水的高效液相色谱分析
眼药水中的氯霉素的测定 氯霉素滴眼液其主要成份氯霉素，辅料为硼酸、硼砂、氯化钠、防腐剂等，为无色或几乎无色的澄明液体。 测定氯霉素滴眼液中氯霉素的含量，由于滴眼液中存在的辅料的干扰，首先要分离得到氯霉素的纯样品。因此，采用高效液相色谱法来进行测试，用外标标准曲线法定量。 氯霉素
外标标准曲线法 色谱定量： 眼药水稀释液 峰面积与样品浓度成正比。 峰面积A样品 一系列已知浓度的氯霉素溶液 Ai 峰面积A对照 浓度： C1，C2，C3，C4，C5 峰面积：A1，A2，A3，A4，A5 C
液相色谱的基本流程图 流动相 预备柱 A B C D G E 进样阀 色谱柱 F 检测器 高压泵 泵输液 进样 分离 检测 计算机
氯霉素含量的测定 1、对照品溶液配制 精密称取5.0mg氯霉素样品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容，配成0.1mg/mL母液。分别移取1mL，2mL，3mL，4mL，5mL母液于10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配成0.01，0.02，0.03，0.04，0.05mg/mL的标准溶液。 2、眼药水样品配制 精密吸取眼药水0.5mL于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。
色谱操作步骤： 1、依次打开检测器、泵的开关 2、打开电脑主机，打开操作界面 3、排气泡 4、设置色谱条件，打开泵开关 5、让流动相冲洗色谱系统，至色谱基线水平，约半小时 6、基线调零，填写数据文件名及信息 7、进样并记录数据 8、数据处理及打印报告 9、冲洗色谱系统约半小时，关机。
色谱条件： 色谱仪 岛津LC-15C高效液相色谱 色谱柱 C18柱（5µm，150×4.6mm或250×4.6mm） 柱温 室温 流动相 甲醇∶水（60∶40）（150短柱） 甲醇∶水（80∶20）（250长柱） 流速 1.000ml/min 波长 272nm
泵 泵 3、色谱测试 柱 柱 用清洗溶剂清洗微量进样针三次，用待测溶液润洗三次，吸取待测溶液25μL，进样，得色谱图。 排放 排放 进样 进样 六通阀 定量环 Inject：插入针头 Load：打入样品 Inject：样品进入色谱
数据记录 标准曲线：隔两分钟进样一次，浓度从低到高，记录在一张谱图上。第二次进样时断开六通阀进样感应。 样品曲线：单独进样，单独记录谱图。