血站核酸检测存在的问题 探讨 天水市中心血站 杨俊鹏.  天水市中心血站核酸检测实验室简介  核酸检测实验室的管理  核酸检测样品的采集、运输、保存  血液核酸检测模式简介 主 要 内 容.

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1 血站核酸检测存在的问题 探讨 天水市中心血站 杨俊鹏

2  天水市中心血站核酸检测实验室简介  核酸检测实验室的管理  核酸检测样品的采集、运输、保存  血液核酸检测模式简介 主 要 内 容

3 天水市中心血站核酸 检测实验室简介

4 总面积： 120 平米 实验分区：分 4 个室 ( 区 ) ：试剂准备室 ( 区 ) ，为蓝 色标记；标本制备室 ( 区 ) ，为绿色标记；核酸扩 增检测室 ( 区 ) ，为黄色标记；产物分析室 ( 区 ) ， 为灰色标记。 采用的检测系统：罗氏检测系统

5 实验室基本设备 ——  罗氏 COBASs201 核酸检测系统，为 1 ： 1 ： 1 配 置，即 1 台混样仪、 1 台核酸提取仪、 1 台荧光 PCR 仪。  相关设备、设施：生物安全柜、 UPS 电源、移 动紫外车等。  2010 年 7 月 15 开始检测

6 天水市中心血站核酸检测实验室布局图 试剂准备室 缓冲间 空气流向 缓冲间 专用走廊工作流向 标本制备室扩增室产物分析室

7 核酸检测实验室 的管理

8 12 个质量管理体系文件 —— 《核酸检测实验室的设置和管理》管理 《核酸检测实验室人员岗位职责》 《核酸实验室标本管理程序》 《安全与卫生、职业暴露的预防与控制程序》 《核酸实验室的消毒、清洁及废弃物处理程序》消毒、清洁及废弃物处理程序 《核酸实验室试剂、耗材管理程序》试剂、耗材管理程序 《仪器与设备使用、维护和校准程序》 《检测结果分析、报告签发、记录及信息上报》 《核酸检测阳性标本的追踪和处理》 《 核酸检测实验室室内质量控制程序》 《核酸实验室室间质量考评程序》 《抱怨处理程序》 1 个 SOP 文件 —— 《 COBASs201 核酸检测系统操作规程》 质量管理体系文件

9 核酸实验室的分区管理 试剂准备室 用于合格核酸检测试剂、混样管及吸头等消耗品的 储存，储存试剂的准备，试剂的分装和主反应混合 液的准备。试剂准备应带手套操作。 样本制备室 用于样本的离心、保存、开盖（生物安全柜内）， 样本混合，核酸提取。在本区实验时，应经常更换 手套，在下列情况之后必须更换手套：清洁工作台 面、处理样本、执行过维护程序、手套出现破漏、 疑有污染、处理过废物等。

10 核酸实验室的分区管理 扩增室 用于核酸扩增检测及结果分析；应带手套操作, 严禁打开 PCR 扩增管，扩增产物及 PCR 管用塑 料袋密封后处理。 核酸提取及扩增检测。在本区实验时，应经常 更换手套，在下列情况之后必须更换手套：清 洁工作台面、处理样本、执行过维护程序、手 套出现破漏、疑有污染、处理过废物等。

11 核酸实验室的分区管理  进入核酸检测实验室的一切人员、物品均 须严格遵守从试剂准备室 ( 蓝色 )→ 样本制 备室 ( 绿色 )→ 核酸扩增检测室 ( 黄色 ) 单一 方向顺序, 不得逆向进入前一工作区。  各区配备的专用仪器设备、工作服、实验 耗材和清洁用具等，均应贴有相应的标识， 不可混用。

12 核酸实验室的分区管理  各区配备的专用仪器设备、工作服、实验耗 材和清洁用具等，均应贴有相应的标识，不 可混用。  进入实验室各区时，应先开启给风（内排风） 设备，再开启外排风设备，最后打开空调。 在缓冲区穿好各区专用工作服，穿一次性鞋 套，戴好一次性口罩后方能进入实验区。实 验完毕后，离开本区时，依次关闭空调，外 排风设备，并将工作服留在本区缓冲间，最 后关闭给风（内排风）设备。

13 核酸实验室的分区管理  非本实验室工作人员，未经许可不得入 内, 其他科人员需在本室进行相关实验， 须在本实验室人员指导下进行。  实验前和完毕后应严格对实验室进行清 洁、消毒。并做好实验室使用记录。

14 核酸实验室清洁、消毒及废弃物处理  各实验区的清洁消毒工具均专用，不可混用， 清洁消毒人员必须按照单一流向的原则进行。  当日工作前用新鲜制备的 0.5% 次氯酸钠水溶 液（ 100ml84 消毒液原液加水至 1000ml ，原 液的有效氯含量应 ≥5% ）擦拭所有工作表面， 保持至少 15 分钟, 再用清水擦拭一遍。  实验过程中如发生样本外溅，应用吸水纸吸 除后用 0.5% 次氯酸钠水溶液喷洒被污染的表 面，保持 30 分钟, 再用水清洗干净，将任何与 废物接触过的材料丢入生物危害废物容器中。

15 核酸实验室清洁、消毒及废弃物处理  每天工作结束后，对生物安全柜内的移液器 用 0.5% 次氯酸钠水溶液对其消毒。打开生物 安全柜内的紫外灯照射 60 分钟。  每天工作结束后，用 0.5% 次氯酸钠水溶液泼 洒实验室地面，并用 0.5% 次氯酸钠水溶液浸 泡的拖把拖洗地面，最后用紫外消毒车距离 台面 60-90cm 对台面进行消毒 60 分钟，打开 紫外灯对实验室空气消毒过夜。

16 核酸实验室清洁、消毒及废弃物处理  每天工作结束后，用 70% 的酒精喷洒实验室， 进行空气消毒，以使 DNA 气溶胶沉降。  每周将工作服用 2%84 消毒液浸泡后洗衣机洗 涤，不同实验区的工作服请勿同一天洗涤。  核酸检测过程中产生的废弃物，包括：废弃 移液枪头、八联管、 PCR 管等。试验完成后， 由核酸实验室工作人员装入黄色垃圾袋内， 用扎带封口紧实、严密后，交办公室人员统 一集中送医疗废弃物处理中心处理。

17 核酸检测样品的采 集、运输、保存

18 血站核酸检测试点实验室技术指导意见 ( 卫生部临检中心 )

19 血站核酸检测试点实验室技术指导意见 ( 卫生部临检中心 )  标本的采集 原则上建议必须使用无菌、无 DNA 酶、无 RNA 酶的耗材。 用于血液核酸扩增检测的标本包括血 清和血浆（ EDTA 或枸橼酸钠抗凝） 等。血液标本采集后，应尽量在 4 小 时以内离心，以避免 RNA 的降解。

20 血站核酸检测试点实验室技术指导意见 ( 卫生部临检中心 ) 标本的运输 : 通常在运送时，应采用 不易破碎的容器装载标本，运送温度 2-8 ℃，应符合生物安全要求。 标本的保存 : 血液标本离心后， 4 天 内进行检测的可存放于 2-8 ℃；如需 长期保存的样本， 3 个月以内存放于 -20 ℃以下。 3 个月以上置于 -70 ℃以 下。反复冻融不超过 3 次。

21 血站核酸检测试点实验室技术指导意见 ( 卫生部临检中心 )  标本的接收 核对样品与送检单，检查样品管有无破损 和溢漏。 检查样品的状况 接收样品时应填写样品接收表。 样品必须在具有处理感染性材料能力的实 验室内、由经过培训的、穿戴防护衣、戴 口罩、防护眼镜的工作人员在生物安全柜 中开盖。

22 天水市中心血站检测样品的 采集、运输、保存方法  标本的采集 : 采用无 DNA 酶、无 RNA 酶、 带分离胶、 EDTA-K2 抗凝、无菌真空采血 管 ( 上海科华血浆制备管）。  制定核酸检测标本采集手册，并对血液采 集人员进行全员培训，以确保标本采集质 量。

23 天水市中心血站检测样品的 采集、运输、保存方法 采血点采集的标本由用低温运输箱冷链运送，每天 运送一次，集中运送到实验室后，由实验室人员 立即离心处理。

24 天水市中心血站 献血者样品处理流程 检测标本处理流程记录样品处理流程 检测标本处理流程记录

25 血液核酸检测 模式简介

26 血液核酸检测模式  单样品核酸检测（ ID-NAT ）： 诺华公司的 Procleix TIGRIS 系统  混样汇集核酸检测（ MP-NAT ）： 罗氏 COBAS s201 系统（ MP-6-NAT ） 上海科华核酸检测系统（ MP-8-NAT ） 上海浩源核酸检测系统（ MP-8-NAT ） 中山达安核酸检测系统（ MP-8-NAT ）

27 血液核酸检测模式 ID-NAT ：与现在的常规血液筛检可同时进 行，也可常规血液筛检完成后，只对常规血 液筛检合格标本进行 ID-NAT 。 MP-NAT ：一般情况下（血液充足）在常规 血 液筛检完成后，再对常规血液筛检合格标本 进行 MP-NAT 。血液应急时，只要与常规血 液 筛检合理调配进行，同样可取得 ID-NAT 的 效 果，如血液的检测时间相当等。下面还作介 绍。

28 检测模式： 全血标本采集后及时进行常规酶免检测，单酶免 试剂反应性的待复试标本与酶免合格标本同时 进行混样核酸检测，如混样检测有反应性，马 上进行拆分检测。与此同时将待复试标本进行 酶免复试。这样可大大缩短检测时间，加快血 液放行。 血液库存量不足下的混样核酸检测 （ MP-NAT ）

29 检测模式： 对血液标本进行常规血清学（酶免）和核酸平行 检测。两者均阴性者马上进行血液放行，对待 查标本随后再进行相应处理。但这需要核酸检 测与血清学检测两个信息系统的有效整合。我 血站现已着手这方面的工作。 突发事件的混样核酸检测 （ＭＰ－ＮＡＴ）

30 人员选择：说话要有亲和力，最好是检验科主任 亲自承担。 基本流程： 首先要做自我介绍，接下来对其无偿 献血行为表示感谢，告知其血液的检测结果，特 别要说明国家规定的常规筛查项目，现又补充了 病毒核酸检测，告知其血液的检测结果可能的原 因，为了您的健康和血液安全负责，我们想 1 个月 后为您再抽血样进行检测。如果您愿意，到时间 我们再与您联系，在交谈中注意不要引起献血者 的过度恐慌。 核酸检测阳性献血者的追踪随防及合理解释

31  7 月 15 日正式启动核酸检测试点工作  工作模式：血液检测分 2 个班次完成，每 天上午 8 ： 30-12 ： 00 上午班次，对前 1 天 的全血标本进行 2 遍酶免检测。下午 2 ： 30 点的班次，将上午待复试的全血标本（单 试剂有反应性）、酶免检测合格标本同时 进行混样核酸检测。第二天早对酶免复检 标本进行检测。  运行 6 个多月来，工作较顺畅。 天水市中心血站核酸检测工作

32  2010 年 7 月 15 日 —12 月 31 日，应用罗氏 COBASs201 核酸检测系统及配套的 Cobas®TaqScreen MPX Test 和 MPX Control 试剂， 采用 6 混样核酸检测（ MP-6-NAT ）模式，共检测 8631 份血液标本，其中拆分检测 12 次，检出 6 份酶 免阴性、 NAT 阳性标本，卫生部临检中心已确认为 HBV-DNA 阳性标本。  数据证实，现采用的 NAT 检测工作模式合理可行。 天水市中心血站核酸检测工作

33 谢谢