实验三、细胞内过氧化物酶的显示 实验三、细胞内过氧化物酶的显示 『目的要求』 1 、掌握原位显示细胞内某种酶的原理。 1 、掌握原位显示细胞内某种酶的原理。 2 、掌握原位显示细胞内某种酶操作过程。 2 、掌握原位显示细胞内某种酶操作过程。 『实验用品』 光学显微镜、解剖盘、染色缸、微量注射器、解剖.

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1 实验三、细胞内过氧化物酶的显示 实验三、细胞内过氧化物酶的显示 『目的要求』 1 、掌握原位显示细胞内某种酶的原理。 1 、掌握原位显示细胞内某种酶的原理。 2 、掌握原位显示细胞内某种酶操作过程。 2 、掌握原位显示细胞内某种酶操作过程。 『实验用品』 光学显微镜、解剖盘、染色缸、微量注射器、解剖 器械、 0.5%CuSO4 、 0.2% 联苯胺、 1% 番红、小 白鼠 光学显微镜、解剖盘、染色缸、微量注射器、解剖 器械、 0.5%CuSO4 、 0.2% 联苯胺、 1% 番红、小 白鼠

2 『实验原理』 细胞内存在的过氧化物酶能把许多胺类氧化成 细胞内存在的过氧化物酶能把许多胺类氧化成有色化合物，联苯胺可被细胞内的过氧化物酶氧化成蓝色或棕色产物（蓝色物质为中间产物联苯胺蓝，很不稳定，可自然转变为棕色的联苯胺腙），因而显示出细胞内过氧化物酶的分布。

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4 过氧化物酶染色意义 过氧化物酶主要存在于粒细胞系，除原粒细胞外， 过氧化物酶主要存在于粒细胞系，除原粒细胞外，随细胞成熟，阳性反应增强（嗜碱性粒细胞反应阴性）。 单核细胞系从幼单核细胞起呈弱阳性反应，淋巴细胞 单核细胞系从幼单核细胞起呈弱阳性反应，淋巴细胞系、红细胞系及巨核细胞系则任何阶段均呈阴性反应。 1. 中性粒细胞 强阳性 2. 嗜酸粒细胞 强阳性 1. 中性粒细胞 强阳性 2. 嗜酸粒细胞 强阳性 3. 单核细胞 弱阳性或阳性（弥散状） 3. 单核细胞 弱阳性或阳性（弥散状） 4. 淋巴细胞、红细胞、浆细胞、组织细胞、巨核细胞等 4. 淋巴细胞、红细胞、浆细胞、组织细胞、巨核细胞等 阴性 阴性

5 本染色法最主要用于鉴别急性白血病细胞 本染色法最主要用于鉴别急性白血病细胞类型，急性粒细胞性白血病呈强阳性，单核细胞性白血病呈弱阳性，急性淋巴细胞性白血病呈阴性反应。 临床上通常将染色阳性率 3% 作为淋巴与非 临床上通常将染色阳性率 3% 作为淋巴与非淋巴的分界标准。若能结合其他化学染色、细胞免疫标记、遗传学和分子生物学检测则更好。

6 小白鼠 小白鼠 小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。 小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。 1 ．捉拿方法： 1 ．捉拿方法： 将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后 将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。

7 2 ．给药方法： 2 ．给药方法： 小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、 尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。 我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住 小鼠 ( 如前所述 ) ，在其腹正中线稍外侧 ( 避开膀胱 和血管 ) 用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方 向刺入皮下，进针 1 ～ 2mm 后，再以 45° 角刺穿腹 部肌肉而进入腹腔 ( 刺穿腹肌时有一落空感 ) 。针 头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或肝 脏。注意每次注入的液体量应为 0.1 ～ 0.2ml ／ 10 克体重。 小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、 尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。 我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住 小鼠 ( 如前所述 ) ，在其腹正中线稍外侧 ( 避开膀胱 和血管 ) 用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方 向刺入皮下，进针 1 ～ 2mm 后，再以 45° 角刺穿腹 部肌肉而进入腹腔 ( 刺穿腹肌时有一落空感 ) 。针 头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或肝 脏。注意每次注入的液体量应为 0.1 ～ 0.2ml ／ 10 克体重。

8 3 ．处死方法： 3 ．处死方法： 处死应以安乐死为原则，即使之无痛苦而迅速 死亡。常用的方法有颈椎脱位法，断头法和二氧 化碳吸入法等。断头法需用特殊的断头器，二氧 化碳吸入法则将小鼠放入盛有二氧化碳的容器内 即可。颈椎脱位法的具体方法是：左手拇指和食 指按住小白鼠的头部，右手捉住其尾巴迅速向后 猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。 处死应以安乐死为原则，即使之无痛苦而迅速 死亡。常用的方法有颈椎脱位法，断头法和二氧 化碳吸入法等。断头法需用特殊的断头器，二氧 化碳吸入法则将小鼠放入盛有二氧化碳的容器内 即可。颈椎脱位法的具体方法是：左手拇指和食 指按住小白鼠的头部，右手捉住其尾巴迅速向后 猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。

9 小鼠的脱臼处死法

10 常用手术器械及操作方法： 1 ．解剖针：用于挑、刺等。常用来捣髓处死蟾蜍，持法 如执笔法。 1 ．解剖针：用于挑、刺等。常用来捣髓处死蟾蜍，持法 如执笔法。 2 ．解剖刀 ( 即外科手术刀 ) ：用于各种皮肤切口和组织切 除等。持法有执弓法与执笔法两种。前者用于较大力量 切开较长距离的坚韧的组织，如大动物的皮肤切口等； 后者则用于小力量的短距离切开，或分离皮肤和肌肉等。 2 ．解剖刀 ( 即外科手术刀 ) ：用于各种皮肤切口和组织切 除等。持法有执弓法与执笔法两种。前者用于较大力量 切开较长距离的坚韧的组织，如大动物的皮肤切口等； 后者则用于小力量的短距离切开，或分离皮肤和肌肉等。 3 ．大剪刀：用于剪毛、皮肤、皮下组织和肌肉等。 3 ．大剪刀：用于剪毛、皮肤、皮下组织和肌肉等。 4 ．眼科剪刀：用于剪断神经、血管、筋膜等细软组织。 4 ．眼科剪刀：用于剪断神经、血管、筋膜等细软组织。 5 ．眼科镊子：用于提取神经、血管和筋膜等细软组织。 5 ．眼科镊子：用于提取神经、血管和筋膜等细软组织。 6 ．钝头镊子：用于提取脏器、组织等。 6 ．钝头镊子：用于提取脏器、组织等。 7 ．有钩镊子：用于提取皮肤切口等。 7 ．有钩镊子：用于提取皮肤切口等。

11 『实验内容和方法』 1 、取材：处死小白鼠取股骨，剪断两头，用微量注射 器吹出骨髓细胞于载玻片上，涂片，晾干。 2 、固定：将涂片放入 0.5% 硫酸铜染缸中固定 30s— 1min 。 3 、氧化：取出涂片直接转入 0.2% 联苯胺染缸中氧化 3—6min 。 4 、冲洗：蒸馏水或自来水冲洗。 5 、染色：滴 1 、 2 滴 1% 番红溶液于涂片上，染色 1min 。 6 、冲洗：蒸馏水或自来水冲洗，晾干。 7 、镜检：可见骨髓细胞内有被染成蓝色或棕色的颗粒， 就是过氧化物酶的部位。