人乳头状瘤病毒16型E6基因的小分子干扰RNA对子宫颈癌细胞生长的影响

Presentation on theme: "人乳头状瘤病毒16型E6基因的小分子干扰RNA对子宫颈癌细胞生长的影响"— Presentation transcript:

1 人乳头状瘤病毒16型E6基因的小分子干扰RNA对子宫颈癌细胞生长的影响
张晓宇

2 子宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，仅次于乳腺癌。是迄今为止唯一找出致病原因的癌症。

3 哈拉尔德·楚尔·豪森：德国埃朗根-纽伦堡大学病毒学教授，现任职于德国癌症研究中心。他用十多年时间发现了导致子宫颈癌的人乳头状瘤病毒（HPV），并凭此获得2008年诺贝尔生理学或医学奖。

4 人乳头瘤状病毒（HPV）导致子宫颈癌的致病机理
激活 表达 E6基因癌蛋白 HPV16 E6基因 结合 p53蛋白降解 干扰表达 导致 p53蛋白 HPV16 E6 siRNA 细胞无限增殖 Thomas M;Pim D;Banks l The role of the E6-p53 interaction in the molecular pathogenesis of HPV Zomore PD;Tusch1 T;Sharp PA RNAi:double-standaded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21to 23 nucleotide intervals

5 本研究通过观察子宫颈癌CaSki细胞增殖、凋亡和细胞周期的变化，以了解HPVl6 E6 基因小分子干扰RNA（ siRNA）对子宫颈癌细胞生长的影响。

6 实验方法 1、细胞培养 2、细胞转染 3、细胞生长曲线及活细胞的检测 4、转染后细胞形态变化的观察 5、转染后细胞超微结构变化的观察 6、转染后细胞凋亡和细胞周期变化的检测

7 细胞培养 HPV16阳性的宫颈鳞癌细胞株CaSki细胞 培养条件：37℃ 5%CO2
培养液：含15%小牛血清、青霉素10kU/L的RPMI1640培养液中。

8 细胞转染 通过脂质体lipofectamine2000介导，将HPV16 E6 siRNA 转入CaSki细胞。

9 细胞生长曲线及活细胞的检测 实验组：转染组 对照组：脂质体组（仅加脂质 体） 空白组（不加任何 干扰措施）
每组有3孔细胞，每孔取3滴计平均数，再取3孔平均数，绘制细胞生长曲线。

10 细胞生长曲线及活细胞的检测

11 转染后细胞形态变化的观察

12 转染后细胞超微结构变化的观察 收集转染后48h、72h的细胞2~4ml，细胞数量约8×106个
离心后以3%戊二醛固定液、1%四氧化锇进行固定 丙酮逐级缩水，环氧树脂Epon812包埋，醋酸铀及枸橼酸铅双重染色 H-600IV型透射电镜观察细胞超微结构的变化

13 转染后细胞超微结构变化的观察

14 转染后细胞凋亡和细胞周期变化的检测 分别取转染后24、48、72h的细胞，碘化丙啶(PI)染色，流式细胞仪检测DNA含量，利用计算机软件分析细胞凋亡和细胞周期分布情况。

15 转染后细胞凋亡和细胞周期变化的检测 细胞凋亡情况：HPV16 E6 siRNA组：细胞凋 亡率40.5%（最高峰） 空白组：（15.4±0.5）% 细胞周期变化：

16 总结 本研究从定性和定量多方面检测了HPV16 E6 siRNA诱导CaSki细胞凋亡的作用。 实验目的明确

17 研究限制与展望 肿瘤细胞增殖是通过细胞增殖实现的，正常细胞周期中，在细胞DNA受损的情况下，p53蛋白表达升高，可将受损细胞阻滞在G1期。但前面研究结果显示， HPV16 E6 siRNA并未将细胞阻滞在G1期。 目前从细胞周期调控角度来研究HPV16 E6 siRNA对子宫颈癌CaSki细胞作用的报道不多，尚需更多的实验研究来进一步证实。 预示利用RNAi（RNA interference即RNA干扰）技术治疗与HPV感染相关的恶性肿瘤将是一种有效的治疗策略。

18 科学方法借鉴之处 实验设计严谨 科学方法论 实验目的明确

19 参考文献 Thomas M;Pim D;Banks l The role of the E6-p53 interaction in the molecular pathogenesis of HPV 人乳头状瘤病毒16型E6基因的小分子干扰RNA对子宫颈癌细胞生长的影响

20 谢 谢 ！