临床 血液实验诊断 黄伏生.

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1 临床 血液实验诊断 黄伏生

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3 概述: 血细胞的来源与生成

4 第一节 血液一般检验 （blood routine test）
血液： 有形成分：红细胞、白细胞、血小板（某些病理物质如MP）。 无形成分：水、无机物、有机物。

5 RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW、Ret、ESR等
一、红细胞检查 RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW、Ret、ESR等

6 用稀释液将血液稀释一定的倍数，混匀后冲入计数池，在显微镜下计数一定体积的红细胞数，再换算成每升血液中红细胞数量。
红细胞计数（手工） 〔原理〕 用稀释液将血液稀释一定的倍数，混匀后冲入计数池，在显微镜下计数一定体积的红细胞数，再换算成每升血液中红细胞数量。

7 〔器材〕显微镜、计数板、微量吸管、试管等。
〔试剂〕红细胞稀释液（Hayem液） NaCl1.0g 、Na2SO42.5g 、HgCl20.5g、蒸馏水加至1000ML

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11 〔操作〕 1.稀释液2ML+全血10μL混合均匀 2.充池 3.计数 4.换算

12 公式 RBC/L=N*5*200*10*106 N－－RBC个数/5个中方格中 1/5×25－－换成1个大方格 200――稀释倍数 10――换算成mm3 106――由1mm3换算成1L体积 RBC/L＝1/100N*1012/L (*1012 /L ----T/L)

13 临床意义 1.生理变化 2.病理变化 （应与HGB等指标同时进行分析）

14 血红蛋白测定（HGB） （一）氰化高铁血红蛋白测定（HiCN）法 HiCN的mmol消光系数――44mmol/L/cm stab

15 〔原理〕 血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，再与CN－结合生成稳定的 综红色复合物－氰化高铁血红蛋白（HiCN），HiCN在波长540nm处有一吸收峰，通过分光光度计测定该处的吸光度，再换算成每升血中血红蛋白浓度，也可制备标准曲线供查阅其含量。

16 2.比色：分光波长为540nm，杯径1.0cm测定 光密度A 3.计算Hb=A*64458/(44*1000)*251=367.7A
blood: [操作] 1.试剂5ml+全血20μl混匀放置放置5min 2.比色：分光波长为540nm，杯径1.0cm测定 光密度A 3.计算Hb=A*64458/(44*1000)*251=367.7A 4.标准曲线法：简易标准曲线K=∑Hb/ ∑A 还可采用回归方程法

17 （二）其他方法 1.Sahli法 2.HiN3法 3. SDS法 （三）  临床意义：与RBC相结合

18 红细胞比容测定 温氏法原理（Wintrobe）(手工)

19 〔操作〕 1.将抗凝血注入温氏管刻度处，用橡皮塞塞紧管口 2.离心：3000r/min离心30min 3.结果观察：读取最下面红细胞层

20 〔参考值〕男性：（0.40～0.54）L/L 女性：（0.37～0.47）L/L 〔临床意义〕主要用于计算红细胞的3个 平均指数 1.增高：多见于各种原因引起的血液浓缩 2.降低：主见于各种贫血

21 微量法： 与常量法基本相同 不同的是离心管改用微量管 离心速度为12000r/min*5 仪器法：HCT=MCV*RBC

22 红细胞平均指数 红细胞平均容积 红细胞平均血红蛋白含量 红细胞平均血红蛋白浓度 （MCV,men corpuscular volume）
（MCH, men corpuscular hemoglobin） 红细胞平均血红蛋白浓度 （MCHC, mem corpuscular hemoglobin concentration）

23 〔计算公式〕 MCV=HCT/RBC(fL) 2.      MCH=HGB/RBC(pg) 3.      MCHC=HGB/HCT(g/L)

24 参考值] 手工法 仪器法 [临床意义] 可作为贫血的红细胞形态学分类 MCV (80-92)fl (80-100)fl
参考值] 手工法 仪器法 MCV (80-92)fl (80-100)fl MCH (27-31)pg (27-34)pg MCHC ( )g/l ( )g/l [临床意义] 可作为贫血的红细胞形态学分类

25 红细胞体积分布宽度 红细胞体积分布宽度 （RDW,red blood cell distribution width）是血液分析仪特有的检测项目

26 〔原理〕 利用coulter原理测定红细胞体积，根据红细胞不同体积的大小在坐标上排列成一条曲线（直方图）将曲线的底部的宽与曲线的高度的比所得值。

27 coulter原理测定血细胞示意图

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29 不同时间段所测红细胞频数(t) µL 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 组 段 31～50 3
组 段 31～50 3 1 2 4 51～70 5 6 19 7 8 71～90 10 49 51 53 11 50 45 34 27 38 21 26 28 15 20 91～110 18 63 29 67 14 111～130 128 119 169 261 338 209 112 205 113 96 114 164 333 324 290 131～160 360 43 2 2 95 398 451 454 331 267 262 228 325 115 236 392 302 161～190 456 475 444 442 4 29 463 401 335 354 362 366 364 353 322 415 191～240 436 623 378 550 346 356 387 122 358 407 457 414 311 326 241～270 339 381 129 198 254 213 12 109 210 237 158 271～300 121 118 217 17 141 116 301～330 120 170 310 25 22 23 35 331～360 111 361～390 24 32 13 391～440 441～470 16 470～ 9 Sum=7151

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32 〔计算方法〕 RDW=图底宽/图峰高 〔参考值〕 成人 11.6％－14.6% 〔临床意义〕 贫血分类

33 红细胞形态检查 1 . 红细胞大小 2 . Hb含量改变 3 . 红细胞形状改变 4 . 红细胞内出现异常结构

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35 二、白细胞检测 白细胞计数（WBC） 与红细胞计数基本相同 略

36 四、白细胞形态 （一）正常白细胞形态 （二）异常白细胞形态

37 正常白细胞形态

38 各类异常白细胞

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41 五、白细胞分类计数 （DC ，differential count）（手工）
〔原理〕 各类不同的白细胞对染料中不同成份着色程度不同，通过染色后可以显示不同颜色，在镜下可计数各类白细胞占整个白细胞的比例。

42 〔器材〕显微镜等 〔试剂〕瑞氏染液 〔标本〕血涂片

43 〔操作〕 1.染色：在血涂片上加染液数滴再加缓冲液适量。 2计数：在油镜下计数100个白细胞，记录其中各类白细胞数所占总数的百分比。

44 〔报告方式〕 N ％ L ％ M ％ E ％ B ％ 〔参考值和临床意义〕见下表：

45 E B L 白细胞计数及各类白细胞临床意义 N M 参考值 增高 减低 WBC G/L 成人：4～10 初生儿：15～20
参考值 增高 减低 WBC G/L 成人：4～10 初生儿：15～20 1/2～2岁：11～12 急性细菌感染、组织损伤、失血、中毒、类白血病、白血病、生理性增高 病毒感染、某些传染病、某些血液病（再障）、放化疗、脾亢、自身免疫性疾病 N 50～70％ 同上 E 0.5～5％ 过敏性疾病、寄生虫感染、嗜酸性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病猩红热、恶性肿瘤、如肺癌、霍奇金氏病等。 某些传染病，如伤寒、术后严重组织损伤、使用肾上腺皮质激素 B <1％ 慢粒、真性红细胞增多症、变态反应、甲退等。 Ⅰ型变态反应、促肾上腺皮质激素和糖皮质激素过量、甲亢、科兴氏综合症等 L 20～40％ 病毒感染、传单、结核、肾移植、再障、淋巴细胞白血病等 放射线、使用肾上腺皮质激素，促肾上腺皮质激素、某些感染引起的白细胞增高而相对减低 M 3～8％ 传染病、EB病毒感染、寄生虫、结核、慢性炎症、处理抗原、免疫应答、MDS、恶组、淋巴瘤 免疫功能低下

46 重要名词解释 1.核左移 2.核右移 3.异型淋巴细胞

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49 三、血小板检测 血小板计数（PLT）： 同红细胞计数（RBC）

50 PLT临床意义 参考范围（100～300）G/L PLT减少 PLT增高

51 血小板平均体积（MPV） Men platlet volume 检测同RBC 参考范围：7～11fL 临床意义：与PLT的数量不一定成比例

52 血小板比容（PCT） 检测同RBC 参考范围 0.1～0.3）％ 临床意义：与PLT数量相关

53 血小板体积分布宽度（PDW） 检测同RBC 参考范围(15~17)％ 临床意义：PLT体积大小 不等

54 PLT直方图的分布

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56 激光式血液分析仪的工作原理 激光鞘流术血细胞分类计数原理

57 激光鞘流技术的血细胞计数原理

58 激光鞘流术血细胞分类计数原理 多角偏振光散射白细胞分类技术（MAPSS）。 0度与10度光散射白细胞散点图分布。
根据光散射理论，当激光照射到流动室内流过的每一个细胞时，由于细胞的物理特性，部分光线从细胞上经不同的角度散射。其中，前向小角度散射光的光强可以反应细胞体积；大角度散射光的光强可以反应细胞核，浆复杂度和细胞颗粒的信息；而侧向散射光的光强可以反应细胞膜、核膜、细胞质的变化。因此，可以依据细胞表明光散射的特点对细胞进行分类。用激光光源产生的单色光束直接进入计数池的敏感区，在不同角度(10度～70度)对每个细胞进行扫描分析，测定其散射光强度，从而提供细胞结构、形态的光散射信息。由于粗颗粒细胞的散射强度比细颗粒细胞更强，故光散射对细胞颗粒的构型和颗粒质量具有很好的区别能力

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60 MAPSS技术临床报告散点图

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62 解读血液常规报告

63 临床病例讨论 1997年11月,中南医院收到从武汉市江夏区转来的一批患者，共12人，均为某小工厂工人,由于诊断不明确而入我院内科。

64 主诉 12人同时发热1周。 症状和体征:发热不退,有时寒颤,热型不典型，无明显消化道和呼吸道症状,但食纳差。胸透和心电图基本正常,血常规WBC均不高,部分患者白细胞反而偏低,白细胞分类计数中,部分患者嗜中性粒细胞偏低,淋巴细胞、单核细胞以及嗜碱性粒细胞基本正常,嗜酸性粒细胞低。

65 由于当时情况较急,在仅有上述临床资料情况下,院领导召集全院各科相关人员会诊,通过到会专家反复讨论,大部分专家意见偏向于这批患者很可能是病毒感染。但也有不同意见。
大家思考：？？？

66 作者散会后回到实验室调出该12位患者的血液常规结果，对每一项指标进行了横向分析，发现这12位患者的结果中，有11位患者的嗜酸性粒细胞分类计数明显低于参考值，只有一位在正常参考范围内。因此，对这12份全血标本，用手工方法进行嗜酸性白细胞直接计数，结果其中11份标本嗜酸性粒细胞直接计数为0，只有1份标本为正常参考范围内0.044G/L。 大家思考：此时，你认为？？？

67 将此结果向内科和医院有关领导作了汇报，并提出了诊断参考意见（伤寒）。
院领导重新召集各科专家会诊，结果仍然有分歧，但还是采纳了上述意见，作为伤寒观察治疗，每天坚持做肥达实验：结果第一天、第二天肥达实验仍然是阴性，直到第三天其中有4位患者呈阳性，到第四天、第五天全部为阳性结果。其后这批病人转入感染科经伤寒治疗痊愈出院。