实验三、细胞内过氧化物酶的显示 实验三、细胞内过氧化物酶的显示 『目的要求』 1 、掌握原位显示细胞内某种酶的原理。 1 、掌握原位显示细胞内某种酶的原理。 2 、掌握原位显示细胞内某种酶操作过程。 2 、掌握原位显示细胞内某种酶操作过程。 『实验用品』 光学显微镜、解剖盘、染色缸、微量注射器、解剖 器械、 0.5%CuSO4 、 0.2% 联苯胺、 1% 番红、小 白鼠 光学显微镜、解剖盘、染色缸、微量注射器、解剖 器械、 0.5%CuSO4 、 0.2% 联苯胺、 1% 番红、小 白鼠

『实验原理』 细胞内存在的过氧化物酶能把许多胺类氧化成 细胞内存在的过氧化物酶能把许多胺类氧化成有色化合物，联苯胺可被细胞内的过氧化物酶氧化成蓝色或棕色产物（蓝色物质为中间产物联苯胺蓝，很不稳定，可自然转变为棕色的联苯胺腙），因而显示出细胞内过氧化物酶的分布。

过氧化物酶染色意义 过氧化物酶主要存在于粒细胞系，除原粒细胞外， 过氧化物酶主要存在于粒细胞系，除原粒细胞外，随细胞成熟，阳性反应增强（嗜碱性粒细胞反应阴性）。 单核细胞系从幼单核细胞起呈弱阳性反应，淋巴细胞 单核细胞系从幼单核细胞起呈弱阳性反应，淋巴细胞系、红细胞系及巨核细胞系则任何阶段均呈阴性反应。 1. 中性粒细胞 强阳性 2. 嗜酸粒细胞 强阳性 1. 中性粒细胞 强阳性 2. 嗜酸粒细胞 强阳性 3. 单核细胞 弱阳性或阳性（弥散状） 3. 单核细胞 弱阳性或阳性（弥散状） 4. 淋巴细胞、红细胞、浆细胞、组织细胞、巨核细胞等 4. 淋巴细胞、红细胞、浆细胞、组织细胞、巨核细胞等 阴性 阴性

本染色法最主要用于鉴别急性白血病细胞 本染色法最主要用于鉴别急性白血病细胞类型，急性粒细胞性白血病呈强阳性，单核细胞性白血病呈弱阳性，急性淋巴细胞性白血病呈阴性反应。 临床上通常将染色阳性率 3% 作为淋巴与非 临床上通常将染色阳性率 3% 作为淋巴与非淋巴的分界标准。若能结合其他化学染色、细胞免疫标记、遗传学和分子生物学检测则更好。

小白鼠 小白鼠 小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。 小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。 1 ．捉拿方法： 1 ．捉拿方法： 将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后 将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。

2 ．给药方法： 2 ．给药方法： 小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、 尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。 我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住 小鼠 ( 如前所述 ) ，在其腹正中线稍外侧 ( 避开膀胱 和血管 ) 用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方 向刺入皮下，进针 1 ～ 2mm 后，再以 45° 角刺穿腹 部肌肉而进入腹腔 ( 刺穿腹肌时有一落空感 ) 。针 头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或肝 脏。注意每次注入的液体量应为 0.1 ～ 0.2ml ／ 10 克体重。 小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、 尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。 我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住 小鼠 ( 如前所述 ) ，在其腹正中线稍外侧 ( 避开膀胱 和血管 ) 用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方 向刺入皮下，进针 1 ～ 2mm 后，再以 45° 角刺穿腹 部肌肉而进入腹腔 ( 刺穿腹肌时有一落空感 ) 。针 头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或肝 脏。注意每次注入的液体量应为 0.1 ～ 0.2ml ／ 10 克体重。

3 ．处死方法： 3 ．处死方法： 处死应以安乐死为原则，即使之无痛苦而迅速 死亡。常用的方法有颈椎脱位法，断头法和二氧 化碳吸入法等。断头法需用特殊的断头器，二氧 化碳吸入法则将小鼠放入盛有二氧化碳的容器内 即可。颈椎脱位法的具体方法是：左手拇指和食 指按住小白鼠的头部，右手捉住其尾巴迅速向后 猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。 处死应以安乐死为原则，即使之无痛苦而迅速 死亡。常用的方法有颈椎脱位法，断头法和二氧 化碳吸入法等。断头法需用特殊的断头器，二氧 化碳吸入法则将小鼠放入盛有二氧化碳的容器内 即可。颈椎脱位法的具体方法是：左手拇指和食 指按住小白鼠的头部，右手捉住其尾巴迅速向后 猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。

小鼠的脱臼处死法

常用手术器械及操作方法： 1 ．解剖针：用于挑、刺等。常用来捣髓处死蟾蜍，持法 如执笔法。 1 ．解剖针：用于挑、刺等。常用来捣髓处死蟾蜍，持法 如执笔法。 2 ．解剖刀 ( 即外科手术刀 ) ：用于各种皮肤切口和组织切 除等。持法有执弓法与执笔法两种。前者用于较大力量 切开较长距离的坚韧的组织，如大动物的皮肤切口等； 后者则用于小力量的短距离切开，或分离皮肤和肌肉等。 2 ．解剖刀 ( 即外科手术刀 ) ：用于各种皮肤切口和组织切 除等。持法有执弓法与执笔法两种。前者用于较大力量 切开较长距离的坚韧的组织，如大动物的皮肤切口等； 后者则用于小力量的短距离切开，或分离皮肤和肌肉等。 3 ．大剪刀：用于剪毛、皮肤、皮下组织和肌肉等。 3 ．大剪刀：用于剪毛、皮肤、皮下组织和肌肉等。 4 ．眼科剪刀：用于剪断神经、血管、筋膜等细软组织。 4 ．眼科剪刀：用于剪断神经、血管、筋膜等细软组织。 5 ．眼科镊子：用于提取神经、血管和筋膜等细软组织。 5 ．眼科镊子：用于提取神经、血管和筋膜等细软组织。 6 ．钝头镊子：用于提取脏器、组织等。 6 ．钝头镊子：用于提取脏器、组织等。 7 ．有钩镊子：用于提取皮肤切口等。 7 ．有钩镊子：用于提取皮肤切口等。

『实验内容和方法』 1 、取材：处死小白鼠取股骨，剪断两头，用微量注射 器吹出骨髓细胞于载玻片上，涂片，晾干。 2 、固定：将涂片放入 0.5% 硫酸铜染缸中固定 30s— 1min 。 3 、氧化：取出涂片直接转入 0.2% 联苯胺染缸中氧化 3—6min 。 4 、冲洗：蒸馏水或自来水冲洗。 5 、染色：滴 1 、 2 滴 1% 番红溶液于涂片上，染色 1min 。 6 、冲洗：蒸馏水或自来水冲洗，晾干。 7 、镜检：可见骨髓细胞内有被染成蓝色或棕色的颗粒， 就是过氧化物酶的部位。