生物化学临床检验型实验 血清总胆固醇测定 (Total Cholesterol) 医学院生物化学教研室

Purpose 掌握血清总胆固醇测定的方法（酶法） 熟悉测定原理 了解血清总胆固醇的正常范围及临床意 义

血脂测定方法很多，目前临床实验室 基本检验项目有：血清外观分析， TC ， TG ， HDL-C ， LDL-C 测定。 进一步可做 HDL 亚组分， IDL ， Apo （如 ApoA Ⅰ 、 ApoB 100 ）， Lp （ a ）及 脂蛋白电泳， LPL ， LCAT 测定。 为保证分析结果的可靠性，标本的采 集应在餐后 12h 以上。

血清外观分析（血清冷置试验） 混浊 （ TG 增高） 下层浊（ VLDL 增高）Ⅴ型 下层清（ VLDL 正常）Ⅰ型 均匀混浊 （ VLDL↑ ） TC 正常 Ⅳ型 上层奶油样 （ CM↑ ） TC 增高 Ⅱ a 型 TC 正常 正常人 清亮 （ TG 正常） TC↑ Ⅱ b ，Ⅲ型 空腹血清空腹血清 测 TC 4 ℃过夜 测 TC

正常 罕见 常见 常见 较少 常见 不常见 正常 CM LDL LDL+VLDL IDL VLDL CM+VLDL

血清总胆固醇测定 胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重要的生理 功能，如合成类固醇激素，维生素 D3 ，胆汁酸， 并构成细胞膜成分。 血液中的胆固醇仅有 10-20% 是直接从食物中摄取， 其余是由肝和肾上腺等组织合成。 胆固醇与动脉粥样硬化有密切关系，故胆固醇测定 是最常用的实验室检测项目之一。 TC (total cholesterol) 包括 FC （ free cholesterol, 1/3 ）和 CE （ cholesterol ester 2/3 ）。 血清中胆固醇在 LDL 中最多，其次是 HDL 和 VLDL ， CM 最少。

Cholesterol(Ch) and Cholesteryl Ester(CE) CholesterolCholesteryl Ester

血清总胆固醇测定 TC 测定方法很多，分为化学测定法、酶法、 气相色谱法、高效液相色谱法等。 化学法一般包括：抽提、皂化、毛地黄皂 苷沉淀纯化、显色与比色五个阶段。 目前临床上常用的是胆固醇氧化酶法。

化学测定法 在胆固醇的比色分析中，一类是先经抽提、分离； 然后再显色定量。另一类是直接向血清中加入显 色剂。 由于胆固醇的呈色反应特异性较差，直接测定往 往受血清中其它因素的干扰，故测得结果不如先 抽提、分离后再显色准确。 目前常用的化学测定法有醋酐 - 硫酸显色法和三氯 化铁 - 硫酸法。 – 前者操作简便快速，但显色稳定性较差，血清色素的 干扰较大； – 后者灵敏度高，显色稳定，较醋酐 - 硫酸法优越。

醋酐 - 硫酸显色法 醋酐能使胆固醇脱水，再与硫酸结合生成绿色化 合物，反应式如下：

高铁 - 硫酸显色法 用异丙醇沉淀血清蛋白质，提取上清液中 的胆固醇，再用氧化铝吸附胆红素、磷脂、 甘油等干扰物，离心后于上清液中加入高 铁 - 硫酸试剂，反应产物显紫红色，其显色 程度与 TC 含量成正比。

胆固醇酯 胆固醇 ＋ 脂肪酸 胆固醇 ＋ O 2 胆甾烯酮 ＋ H 2 O 2 H 2 O 2 ＋ 4AAP ＋酚 红色醌亚胺 ＋ H 2 O 胆固醇酯酶 (CHE) 胆固醇氧化酶 (CHOD) 过氧化物酶 (POD) 可通过比色法求得血清总胆因醇的含量。上述三个酶的催化 作用呈连锁反应，实验中把三个酶配成单一试剂，便于使用。 试剂中除上述三种酶外，还有胆酸钠和表面活性剂，胆酸钠 用于激活胆固醇酯酶，表面活性剂促进胆固醇从脂蛋白中释放。 酶法操作简便，快速，专一性强，不需抽提，试剂无腐蚀性， 是目前常规方法，但也存在有一些不足，如胆固醇酯酶对胆固 醇酯水解不完全，表面活性剂影响胆固醇酯酶活性，黄疸血清 中过高的胆红素可还原 H 2 O 2 使结果偏低等。 酶 法

血清总胆固醇（ TC ）测定 【参考值】 3.00 ～ 5.20mmol/L ； 危险阈值： 5.20 ～ 6.20mmol/L ； 高胆固醇血症： ≥6.20mmol/L 。 【临床意义】 1.TC 升高 甲状腺功能减退症、糖尿病、肾病综合征、胆 总管阻塞、长期高脂饮食、精神紧张或妊娠等。 TC 增高是冠心病的危险因素之一。 2.TC 降低 重症肝脏疾病，如急性重型肝炎、肝硬化等， 严重贫血、甲状腺功能亢进症或重症营养不良等。

What Are Some Ways To Control Blood Cholesterol and Triglycerides? Healthy Eating Physical Activity Weight Loss Medication

Specimens & Materials Specimen: serum （血清） Reagent: –R 1 : Phosphate buffer (pH 7.4) ， Phenol( 酚 ) –R 2 : 4-AAP, Cholesterolesterase(CHE), Cholesterol oxidase(CHOD), Peroxidase (POD) Working reagent: –R 1 (10ml) + R 2 (1ml) Standard: cholesterol ； C S =5.2mmol/L Water bath, Test tubes, Pipettes Spectrophotometer

Method BST Working reagent0.6ml dH 2 O 10  l -- Standard- 10  l - Serum-- 10  l Mix well, incubate for 15mins at 37  C dH 2 O1.0ml Mix well, measure the absorbance of T and S setting zero with B, λ=510nm.

Calculation C T (mmol/L)=A T /A S x C S Normal value of T-cho: 3.1~5.7 mmol/L

Next experiment 血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离 – 书写预习报告 – 制作 ppt 并发言 组长安排本次做清洁的同学