第32章 分节段的负股RNA病毒 主要包括以下病毒： 正粘病毒科 布尼病毒科 嵌沙样病毒科 都是： 分节段的单股负股RNA病毒

第一节 正粘病毒科 第二节 布尼病毒科 第三节 嵌沙样病毒科 正粘病毒科 布尼病毒科 嵌沙样病毒科

分节段单负股RNA病毒的部分特性 病毒 形状 大小(nm) 囊膜 核衣壳 核酸 正粘病毒科 布尼病毒科 嵌沙样病毒科 圆形 或丝状 80~120 ＋ 螺旋 单股,负链, 6~8节段,线状 布尼病毒科 90~120 单股,负链,3节段,环状 嵌沙样病毒科 100~300 单股,负链,2节段,线状/环状

第一节 正粘病毒科 Orthomyxoviridae 本科病毒为： 圆形或丝状 80~120nm 有囊膜 核衣壳螺旋对称 核酸RNA为单股、负链、6~8节段、线状

一、正粘病毒科的分类 目前：本科分为4个属 甲型流感病毒属 Influenzavirus A 乙型流感病毒属 Influenzavirus B 丙型流感病毒属 Influenzavirus C 托高土病毒属 Thogotovirus 感染：人、禽、猪、马、貂、海豹、鲸等 感染：人 感染：人、猪，极少引起严重的疾病极少 感染：人及家畜，虫媒（蜱）

二、正粘病毒科的特性 Orthomyxoviruses 圆形或多形（丝状） 80~120nm 有囊膜 核衣壳螺旋对称 核酸RNA： 单股、负链、6~8节段、线状 甲型、乙型8节段，丙型7节段，托高土6节段

多形性 pleomorphic 圆形

血凝素(H)和神经氨酸酶(N)是流感病毒的2个重要的分类指标 M1 蛋白 螺旋对称的核衣壳 (RNA＋NP蛋白) 血凝素：HA 聚合酶 (3种) 脂质双分子层 神经氨酸酶：NA PB1 PB2 PA

NA HA 分节段的（-） SSRNA 1 2 3 4 5 6 7 8 核糖核蛋白（RNP） RNA多聚酶 M2 M1 PB2 PB1 PA

血凝素：HA- 吸附、融合 HA protein - attachment, fusion 细胞的酶 酸性 pH

神经氨酸酶：NA NA protein - neuraminidase

血凝素(H)和神经氨酸酶(N)是流感病毒的2个重要的分类指标 甲型流感病毒可分为： 16个H型 10个N型 可有各种组合，构成多种可能的类型 并不是所有的组合都致病，只有部分组合导致严重的疾病： （1）H7N7、H3N8→马； （2）H1N1、H3N2→猪； （3）H10N4→海豹； （4）H1N1 、H2N2 、H3N2 、H5N1 、H3N8 →人； （5）在禽类发现的组合很多，特别是H5N2 、H7N1是高致病性的。

抗原漂移 Antigenic Drift HA 和 NA点突变造成，变异幅度小，属于量变； 免疫反应不能提供完全保护； 零星的暴发，局部、有限的流行。

抗原转换 Antigenic Shift 因HA或NA的大幅度变异造成，属质变，产生“新”的H型或N型，导致新亚型的出现 ； 以前的抗体无保护作用； 可能发生大流行。

甲型流感的大流行

新的 H 和 N 的来源 where do “new” HA and NA come from? 鸟、禽之间传播 猪、禽以及人类之间的传播 美专家研究表明1918年全球大流感竟是猪惹的祸

新的 H 和 N 的来源 where do “new” HA and NA come from?

为什么没有乙型流感的大流行why do we not have influenza B pandemics? 到目前为止，未发现抗原转移 没有动物贮主

三、正粘病毒科的生物合成 吸附、穿入 细胞质内脱衣壳 细胞核内生物合成 装配 胞浆膜出芽，获得囊膜

1、吸附、穿入、脱衣壳 细胞核 H+

2、转录 (mRNA 合成) A A A U A U 裂解位点 =帽 cleavage site 宿主细胞mRNA 病毒的核酸内切酶 流感病毒的核衣壳 A U A U 病毒的聚合酶 流感病毒mRNA

RNA合成 核酸内切酶由病毒编码，并包含在病毒子内； RNA聚合酶由病毒编码，并包含在病毒子内； Poly(A)聚合酶由病毒编码，并包含在病毒子内； 为什么病毒不利用宿主细胞的酶，目前不明。

RNA 剪接 Two segments give rise to transcripts which can have one of two fates AAAAAA AAAAAA

3、RNA 复制 核内进行 authentic copies 复制酶和转录酶可能是同一个酶 3’ 5’ genomic (-ve) 核内进行 authentic copies 复制酶和转录酶可能是同一个酶 coated with protein as made 没有明显的早期与晚期 (+ve) 5’ 3’ 3’ 5’ genomic (-ve)

4、装配 核衣壳转运至细胞质； 糖蛋白插入胞浆膜； M 蛋白与细胞膜结合； 通过胞浆膜出芽； HA 裂解 NA的作用

flu HA protein and fusion cell enzymes S acid pH

正粘病毒与副粘病毒的比较 副粘病毒 Paramyxoviridae 正粘病毒 Orthomyxoviridae 核酸 单负RNA，不分节段 细胞质 细胞核 RNA转录引物 no yes 血凝素神经氨酸酶 有的无H或N， 如H、N，二者合在一起 均有，分开，(HA and NA) 合胞体的形成 是 (F蛋白在生理pH下发挥功能) 否 (HA蛋白在酸性pH下发挥功能) 进化率 低 高

四、正粘病毒科的抵抗力 抵抗力不强 56℃ 30min，灭活； 对干燥、日光、紫外线敏感； 室温下感染性很快消失； 乙醚、甲醛等敏感； 酸性条件下更易灭活； 但在-70℃或冷冻干燥后活性可长期保存。

五、传播 经过飞沫传播，侵入呼吸道，通过其HA吸附于呼吸道粘膜上皮细胞膜上的HA受体上，然后侵入这些细胞进行增殖。 引起发烧，呼吸系统疾病，以及全身症状。

六、兽医临床上常见的流感病毒 禽流感病毒 猪流感病毒

1、禽流感病毒 Avian influenza virus，AIV 禽流感病毒属于：正粘病毒科/甲型流感病毒属 具备科的特性： 核酸型为单股负股RNA，分8节段； 病毒粒子一般为球形，直径为80~120nm，但也常有同样直径的丝状形式，长短不一； 有囊膜，表面有长10~12nm的纤突； 病毒内有核衣壳螺旋形。

血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA) HA和NA是病毒表面的主要糖蛋白； 具有种(亚型)的特异性和多变性，在病毒感染过程中起着重要作用 禽流感病毒 血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA) HA和NA是病毒表面的主要糖蛋白； 具有种(亚型)的特异性和多变性，在病毒感染过程中起着重要作用 HA决定病毒的致病性，能诱发感染宿主产生具有保护作用的中和抗体， NA诱发的抗体无中和作用，但可减少病毒增殖和改变病程。

禽流感病毒 透射电镜下呈圆形，其表面有纤突（×60 000）

禽流感病毒 透射电镜下，呈丝状的流感病毒粒子（×150 000）

病毒的变异 基因组极易发生变异， 迄今已知有16种HA和10种NA，不同的HA和NA之间可能发生不同形式的随机组合，从而构成许多不同亚型。 禽流感病毒 病毒的变异 基因组极易发生变异， HA的基因的突变率最高， 其次为NA基因。 迄今已知有16种HA和10种NA，不同的HA和NA之间可能发生不同形式的随机组合，从而构成许多不同亚型。 据报道现已发现的流感病毒亚型至少有80多种； 其中绝大多数属非致病性或低致病性； 高致病性亚型主要是含H5和H7的毒株。

培养 易在鸡胚以及鸡和猴的肾组织培养中生长； 有些毒株也能在家兔、公牛和人的细胞中生长。 在组织培养中能引起血球吸附，并常产生病变。 禽流感病毒 培养 易在鸡胚以及鸡和猴的肾组织培养中生长； 有些毒株也能在家兔、公牛和人的细胞中生长。 在组织培养中能引起血球吸附，并常产生病变。 大多数毒株能在鸡胚成纤维细胞培养中产生蚀斑。 有些毒株在鸡、鸽或人的细胞培养中培养之后，对鸡的毒力减弱。

真性鸡瘟、欧洲鸡瘟 致病 OIE A类传染病，严重危害养禽业 引起各种类型的禽流感（ Avian influenza ，AI) 禽流感病毒 致病 引起各种类型的禽流感（ Avian influenza ，AI) 高致病性禽流感又称： 真性鸡瘟、欧洲鸡瘟 OIE A类传染病，严重危害养禽业

感染AIV的小鸡 呈明显的神经症状：扭头、观星状 禽流感病毒 感染AIV的小鸡 呈明显的神经症状：扭头、观星状

感染AIV的雏鸭， 呈现神经症状：扭头、两腿叉开 禽流感病毒 感染AIV的雏鸭， 呈现神经症状：扭头、两腿叉开

感染AIV的小鹅， 呈现明显的神经症状：头颈扭曲、肿头流眼泪 禽流感病毒 感染AIV的小鹅， 呈现明显的神经症状：头颈扭曲、肿头流眼泪

感染AIV的山鸡，眼睑肿胀，右眼已完全闭合 禽流感病毒 感染AIV的山鸡，眼睑肿胀，右眼已完全闭合

感染AIV的小鸡， 背部皮下点状和块状出血 禽流感病毒 感染AIV的小鸡， 背部皮下点状和块状出血

感染AIV 7天后的鸡： 冠和肉髯出血，多灶性的点状或块状坏死 禽流感病毒 感染AIV 7天后的鸡： 冠和肉髯出血，多灶性的点状或块状坏死

禽流感病毒 感染AIV的鸡，脚鳞片下出血

感染AIV的鸡， 腺胃的出血点和出血块及坏死 禽流感病毒 感染AIV的鸡， 腺胃的出血点和出血块及坏死

感染AIV的鸡， 腺胃乳头充血出血，肌胃角质膜下出血 禽流感病毒 感染AIV的鸡， 腺胃乳头充血出血，肌胃角质膜下出血

感染AIV的鸡， 胰腺有出血点或出血斑以及坏死点 禽流感病毒 感染AIV的鸡， 胰腺有出血点或出血斑以及坏死点

感染AIV的蛋鸭， 产蛋量显著下降，产道充血出血 禽流感病毒 感染AIV的蛋鸭， 产蛋量显著下降，产道充血出血

禽流感病毒 感染AIV的鸭， 胰腺出血、坏死

禽流感病毒 感染AIV的蛋鸭，卵泡充血出血

禽流感病毒 感染AIV的蛋鸭，卵泡充血出血

诊断 病毒的分离与鉴定 采取病鸡的呼吸道或窦内渗出物或器官组织，加肉汤稀释成15%悬液，离心沉淀或过滤以去除组织碎屑； 禽流感病毒 诊断 病毒的分离与鉴定 采取病鸡的呼吸道或窦内渗出物或器官组织，加肉汤稀释成15%悬液，离心沉淀或过滤以去除组织碎屑； 将无菌悬液0.1~0.2ml尿囊腔接种10~11日龄发育鸡胚，在35℃中培养48h，弃去死胎。 采取未死鸡胚的尿囊液，作HA试验和HI试验，以鉴定病毒。

禽流感病毒 实验室用HI实验诊断AIV的典型结果

血清学试验 可用来证实抗体的存在， 用于血清学检查的方法有： 这种抗体在感染后7d便可被检测出来。 ① HI试验——检测抗H抗体。 禽流感病毒 血清学试验 可用来证实抗体的存在， 这种抗体在感染后7d便可被检测出来。 用于血清学检查的方法有： ① HI试验——检测抗H抗体。 ② 双向免疫扩散试验——检测抗NP抗体。 ③ 病毒中和试验 ④ 神经氨酸酶抑制试验 ⑤ ELISA(酶联免疫吸附试验) ⑥ 琼脂扩散试验(AGP): 采取发病初期和康复期（发病后14~28d）的血清检测，如果康复期的血清抗体比发病初期升高４倍以上，则可证实禽流感的发生。

2、猪流感病毒 Swine influenza virus，SIV 猪流感病毒属于正粘病毒科/甲型流感病毒属 主要有：H1N1 H3N2 近年来，从猪体内还分离到丙型流行性感冒病毒，但对猪不致病。 流感病毒存在于病猪和带毒猪的呼吸道分泌物中，对热和日光的抵抗力不强，一般消毒药能迅速将其杀死。 除感染猪外，也能使人发病

可引起猪的急性呼吸器官传染病 微生物学检查： ——猪流行性感冒 用灭菌的棉拭子采取鼻腔分泌物，放入适量生理盐水中洗涮，再加青霉素、链霉素处理； 尿囊腔或羊膜腔接种10~12日龄鸡胚，35 ℃ 72~96小时，收集尿囊液和羊膜腔液，进行HA试验和HI试验，鉴定病毒。

第二节 布尼病毒科 Bunyaviridae 是最大的一个科，成员＞350种。

一、科的特性 球形，80~120nm； 负股（或双向）、单股RNA，分3个节段 核衣壳螺旋对称； 有囊膜； 胞浆内复制，高尔基体空泡出芽； L: 6.3-12kb——编码转录酶(L蛋白)； M:3.5- 6kb——编码1个聚合蛋白→G1＋G2＋HSm； S: 1- 2.2kb——编码核衣壳蛋白(N)和非结构蛋白(NSs). 核衣壳螺旋对称； 有囊膜； 胞浆内复制，高尔基体空泡出芽； 无CPE，持续性感染； 对热、酸、脂溶剂、消毒剂、去垢剂敏感。

二、分类 分为5个属，30多个血清群。 布尼病毒属：18个血清群, ＞160种 汉坦病毒属：22种 白岭病毒属： 2个血清群及若干亚群, ＞50种 内罗病毒属：7个血清群, ＞33种 尚有一属为植物病毒 未定属的病毒有80多种

二、分类 分为5个属，30多个血清群。 赤羽病病毒 苛察谷病毒 布尼病毒属：18个血清群, ＞160种 加州脑炎病毒群 汉坦病毒属：22种 白岭病毒属： 2个血清群及若干亚群, ＞50种 内罗病毒属：7个血清群, ＞33种 尚有一属为植物病毒 未定属的病毒有80多种

二、分类 分为5个属，30多个血清群。 汉坦病毒 多布拉勿病毒 汉城病毒 普马拉病毒 寻罗卜来病毒 布尼病毒属：18个血清群, ＞160种 纽约病毒 贝尤病毒 黑河沟病毒 安德斯病毒 未定名 布尼病毒属：18个血清群, ＞160种 汉坦病毒属：22种 白岭病毒属： 2个血清群及若干亚群, ＞50种 内罗病毒属：7个血清群, ＞33种 尚有一属为植物病毒 未定属的病毒有80多种

二、分类 分为5个属，30多个血清群。 布尼病毒属：18个血清群, ＞160种 汉坦病毒属：22种 白岭病毒属： 2个血清群及若干亚群, ＞50种 内罗病毒属：7个血清群, ＞33种 尚有一属为植物病毒 未定属的病毒有80多种 裂谷热病毒

二、分类 分为5个属，30多个血清群。 布尼病毒属：18个血清群, ＞160种 汉坦病毒属：22种 白岭病毒属： 2个血清群及若干亚群, ＞50种 内罗病毒属：7个血清群, ＞33种 尚有一属为植物病毒 未定属的病毒有80多种 内罗毕羊病病毒 克里米亚/刚果出血热病毒

除汉坦病毒外，多为虫媒病毒。

三、赤羽病病毒 Akabane disease virus 分布于澳大利亚、日本、以色列、非洲等地。 以蚊、库蜢为传播媒介； 主要感染牛、绵羊、山羊。 怀孕母牛感染后无临床症状； 胎儿通过胎盘感染后，表现为脑脊髓炎、多发性肌炎，严重者死亡、流产，耐过者发生先天性关节弯曲、积水性无脑（小脑形成大空斑）

四、汉坦病毒 Hantaan virus 主要引起人类的出血热 包括： 肾综合征出血热 汉坦病毒肺综合症

汉坦病毒的传播 持续性感染的啮齿类动物 通过种内打斗、嘶咬水平传播 病毒存在于排泄物及分泌物，尤其尿液 Hantavirus genus

汉坦病毒肺综合征 Hantavirus Pulmonary Syndrome Hantavirus genus

HPS的肺脏病变 Source: Dr. L. Ketai via CDC

HPS的实验室诊断 病毒分离： Vero E6细胞，无CPE， 盲传数代后用荧光抗体检测。 PCR检测。 Hantavirus genus

第三节 嵌沙样病毒科 Arenaviridae 人医上称为“砂粒病毒科” 本科成员以啮齿动物为宿主，有的可引发人类致命的疾病。

一、本科病毒的特性 病毒具有多形性，直径50~300nm，多数为110~130nm； 有囊膜； 囊膜内有许多细胞核糖体，形似砂粒，故得名。 核衣壳螺旋对称； 核酸：负股（或双向）、单股RNA，分2个节段。 L节段：7.2kbp S节段：3.4kbp 对热、酸、脂溶剂、消毒剂、去垢剂高度敏感

二、分类 本科病毒分为2个亚群 第一亚群 第二亚群 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)：类流感,脑膜炎,脑膜脑炎 旧大陆砂粒病毒群 新大陆砂粒病毒群 拉沙病毒： 出血热(拉沙热)，西非 摩匹病毒： 感染不致病， 西非 摩巴拉病毒：感染不致病， 中非共和国 依巴病毒： 感染不致病， 中非共和国 Junin病毒： 阿根廷出血热， 阿根廷 Machupo病毒：玻利维亚出血热， 玻利维亚 Guanarito病毒：委内瑞拉出血热，委内瑞拉 Sibia病毒： 巴西出血热，巴西 Tacanribe病毒：仅 1例实验室感染致病，特立尼达